【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及共刺激或共抑制信号传导途径的蛋白质(包括ctla-4)的抗体。更特别地，本专利技术进一步涉及针人ctla-4的犬源化抗体(caninized antibodies)，其具有特异性序列和对犬ctla-4的高结合亲和力。本专利技术还涉及本专利技术的抗体在治疗犬科动物的癌症中的用途。
技术介绍
0、专利技术背景
1、免疫应答的起始或终止经由信号传导途径介导，所述信号传导途径由在许多免疫细胞(最值得注意的是t淋巴细胞和抗原呈递细胞(apc))的表面上表达的一组蛋白质之间的复杂相互作用活化。共刺激信号传导途径导致免疫应答的发展，并且已经显示最重要的是通过t细胞表面上的cd28与apc表面上的b7.1(也称为cd80)和b7.2(也称为cd86)家族成员的相互作用介导的。b7.1和b7.2被认为执行类似的功能。
2、相反，共抑制途径导致免疫应答的抑制或终止，并且已经显示是通过t细胞上的ctla-4和apc上的b7.1/b7.2蛋白之间的相互作用介导的。已经显示另外的共抑制信号传导途径是通过t细胞上的程序性细胞死亡受体1(pd-1)和apc上的程序性细胞死亡受体配体1或2(pd-l1/pd-l2)蛋白之间的相互作用介导的。此外，还已经显示pd-l1和b7.1之间的相互作用也可以在t细胞中产生抑制信号。
3、b7.1和b7.2是免疫球蛋白(ig)超家族的成员[sharpe and freeman,naturereviews,2:116-126(2002)]。b7.1在活化的b细胞、活
4、b7.1和b7.2结合cd 28和ctla-4，具有不同的功能结果[linsley et al.,pnas,87:5031-5035(1990)；linsley et al.,j.exp.med.,173:721-730(1991)；azuma et al.,nature 366:76-79(1993)；freeman et al.,science 262:909-912(1993)]。b7.1和b7.2与ctla-4的结合比b7.1/b7.2与cd 28的结合具有高得多的亲和力[van der merwe,j.exp.med.185:393-402(1997)]。
5、cd28是同源二聚体糖蛋白，其是ig超家族的成员[aruffo and seed,pnas,84:8573-8577(1987)]。成熟蛋白质具有134个氨基酸残基的单个细胞外可变结构域，其包含对反受体(counter receptor)结合必不可少的六肽基序mypppy[riley and june,blood,105:13–21(2005)]。cd28的41个氨基酸的胞质结构域含有四个酪氨酸残基，其在活化时可以被磷酸化[sharpe and freeman,nat.rev.immunol.,2:116–126(2002)]。cd28在大多数cd4+t细胞和约50％的cd8+t细胞上表达[gross et al.,j.immunol.,149:380-388(1992)；riley and june,blood,105:13–21(2005)]。在t细胞受体(tcr)连接之后，b7.1/b7.2与cd28的结合为t细胞提供了关键的共刺激信号，从而允许t细胞活化和随后的免疫应答发展[reiser et al.,pnas,89:271-275(1992)；jenkins et al.,j.immunol.,147:2461-2466(1991)]。已经表明，在不存在cd28信号的情况下，t细胞经历细胞凋亡或进入无应答状态[jenkins et al.,j.exp.med.165:302-319(1987)；jenkins et al.,pnas,84:5409-5413(1987)；schwartz,science,248:1349-1356(1990)]。cd28-b7.1/b7.2结合可以改变活化所需的tcr连接的阈值水平(例如，抗原-mhc复合物的量)，减少刺激初始细胞所需的时间并增强t细胞应答的幅度[soskic et al.,advances in immunology,124:96-123(2014)]。
6、ctla-4(cd152)也是ig超家族的成员，并且由单个细胞外结构域、跨膜结构域和短胞质尾组成[swanson,immunology；1010:169-177(2000)]。另外，ctla-4与cd28共享约30％的氨基酸同一性。ctla-4不在初始t细胞上组成型表达，尽管其在cd28连接和t细胞活化之后不久快速上调，其中ctla-4的峰值表达水平在初始t细胞活化之后约48-96小时[alegreet al.,j.immunol.,157:4762-4770(1996)；freeman et al.,j.immunol.,149:3795-3801(1992)]。ctla-4以比cd28高得多的亲和力结合b7.1和b7.2两者[van der merwe et al.,j.exp.med.,185:393-402(1997)]。然而，与cd28结合b7.1或b7.2的刺激作用相反，ctla-4作为抑制性受体起作用，其对于免疫应答的下调是至关重要的[walnus et al.,immunity,1:405-413(1994)；walnus,j.exp.med.,183:2541-2550(1996)；krummel和allison,j.exp.med.,183:2533-2540(1996)]。ctla-4介导其免疫抑制功能的机制与其充当cd28与b7.1/b7.2之间相互作用的竞争性抑制剂的能力有关[综述在swanson,immunology,1010:169-177(2000)中]。ctla-4在免疫下调中的关键作用在ctla-4缺陷的小鼠中得到证实，所述小鼠在3-5周龄时因为发展了以多个器官的t细胞浸润为特征的淋巴增殖性疾病而死亡[tivol et al.,immunity,3:541-5417(1995)；waterhouse et al.,science,270:985-988(1995)]。还证实ctla-4敲除的后果取决于cd28与其配体b7.1和b7.2的相互作用，如在ctla-4/b7-1/b7-2三重敲除小鼠中没有疾病所示[mandelbrot et al.,j.exp.med.,189:435-440(1999)]。这也本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸，其包含选自SEQ ID NO:1、33、35、37、39、59、61、63和65的第一编码序列。
2.一种核酸，其包含选自SEQ ID NO:3、41、43和45的第二编码序列。
3.一种核酸，其包含权利要求的第一编码序列和权利要求2的第二编码序列。
4.一种核酸，其包含：
5.一种特异性结合犬CTLA-4的犬源化抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链；其中：
6.一种特异性结合犬CTLA-4的嵌合犬源化抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链；其中所述重链包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
7.药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的核酸和可药用载体或稀释剂。
8.药物组合物，其包含权利要求5或6的抗体和可药用载体或稀释剂。
9.表达载体，其包含权利要求1-4中任一项的核酸。
10.宿主细胞，其包含一种或多种权利要求1-4中任一项的核酸或者一种或多种权利要求9的表达载体。
11.一种产生特异
12.权利要求11的方法，其中所述特异性结合CTLA-4的抗体或其抗原结合片段是犬源化抗体或嵌合抗体。
13.权利要求11或12的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合犬CTLA-4。
14.权利要求7或8的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于增加需要其的受试者中免疫细胞的活性。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸，其包含选自seq id no:1、33、35、37、39、59、61、63和65的第一编码序列。
2.一种核酸，其包含选自seq id no:3、41、43和45的第二编码序列。
3.一种核酸，其包含权利要求的第一编码序列和权利要求2的第二编码序列。
4.一种核酸，其包含：
5.一种特异性结合犬ctla-4的犬源化抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链；其中：
6.一种特异性结合犬ctla-4的嵌合犬源化抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链；其中所述重链包含seq id no:2的氨基酸序列并且所述轻链包含seq id no:4的氨基酸序列。
7.药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的核酸和...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·莫尔塞耶，张远征，I·塔佩，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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