【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种变体aav衣壳蛋白、重组腺相关病毒raav。
技术介绍
1、中枢神经系统疾病包括帕金森病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病和胶质母细胞瘤、脑膜瘤等脑肿瘤疾病，这些疾病在老年人中尤为普遍，通常是由遗传性基因突变引起的，这些突变导致神经系统发育异常、神经变性或神经元功能受损等。中枢神经系统疾病给家庭和社会带来严重负担和影响。针对中枢神经系统疾病的治疗或是需要通过全脑性基因修复或功能蛋白补偿等，而其大脑本身的血脑屏障，即血脑屏障是指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障，在阻止有害物质进入大脑的同时也是阻碍药物进入中枢神经的主要障碍，如何突破血脑屏障高效特异递送药物，是目前神经系统治疗和神经科学研究的主要难题。
2、递送目的药物至神经系统，需要工具载体，在众多现有的工具载体中，aav载体因其出色的递送效率、稳定的安全性和相对较低的细胞毒性等特性而广受欢迎。aav血清型众多，不同血清型有不同的靶向感染特性，9型aav(aav9)是研究最为广泛的一种，在aav9基础上进行衣壳蛋白改造获得一系列能高效跨血脑屏障的aav变体，但大多数都有较强地肝脏嗜性，这种脱靶递送可能引起强烈的免疫反应或者引起肝毒性。此外，研究报道其他血清型aav也能跨血脑屏障，如aavhu.32(yoon et.al.,2020,143；2058-2072)，但是aavhu.32跨血脑屏障效率不高。
技术实现思路
1、因此，本专利技
2、为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
3、本专利技术提供了一种变体aav衣壳蛋白，包括：
4、1)、与seq id no.1所示的氨基酸序列具有至少80％、83％、85％、88％、90％、93％、95％、98％的同一性的氨基酸序列；以及
5、2)、如seq id no.1所示的氨基酸序列包括：氨基酸取代a587d、q588g、a589n、q590p，以及在第588位点之后和589位点之前插入氨基酸序列tlavpfk。
6、上述变体aav衣壳蛋白是在seq id no.1所示的氨基酸序列上经过氨基酸取代a587d、q588g、a589n、q590p，以及在第588位点之后和589位点之前插入氨基酸序列tlavpfk。在一些实施方式中，上述变体aav衣壳蛋白还可以进行至少一个氨基酸的缺失、取代和/或插入，比如插入的7聚体的多肽可以替换为tlavpfs、fvvgqsy、tlqvpfk、elavpfk、dlavpfk、tmavpfk、tlavppk、tlavlfk、tlagpfk，上述的多肽方案和氨基酸取代a587d、q588g、a589n、q590p中的至少一种氨基酸取代方案结合后得到不同的变体aav衣壳蛋白，经本专利技术研究发现，本专利技术的插入多肽为tlavpfk和氨基酸取代a587d、q588g、a589n、q590p组合的方案是最佳的方案，示例性的如插入的7聚体氨基酸由tlavpfk变成tlavpfs、fvvgqsy(以及原始第589、590位点的氨基酸保持a q不改变)，其他条件不变，如构建获得的aavhu.32-dgn提高中枢特异性，降低肝脏靶向性如图2、图3示以及aavhu.32-dgf提高肝脏特异性，降低中枢靶向性如图2、图3所示。基于此方法可优化载体的性能，如向靶器官或组织或细胞内递送外源目的产物的靶向性和转导效率，高效特异地跨血脑屏障。获得的变体aav衣壳蛋白可以与天然aav衣壳蛋白可以具有80％、83％、85％、88％、90％、93％、95％、98％以上的同一性的氨基酸序列。
7、作为最佳的实施方式，为上述的变体aav衣壳蛋白是在seq id no.1所示的氨基酸序列上经过氨基酸取代a587d、q588g、a589n、q590p，以及在第588位点之后和589位点之前插入氨基酸序列tlavpfk，该变体aav衣壳蛋白构建的重组腺相关病毒载体，可高效转导实现基因递送至中枢神经系统，同时具有显著降低的肝脏转导特性，其能用于更高效跨血脑屏障转导中枢神经系统，可以为神经科学研究和全脑系统性遗传疾病、神经退行性疾病等治疗提供了更好的工具，具有广阔的应用价值和市场前景。
8、在一些实施方式中，所述aav衣壳蛋白存在于所述aav衣壳的vp1、vp2和/或vp3中。作为最佳的实施方式，所述aav衣壳蛋白存在于所述aav衣壳的vp1中。
9、在一些实施方式中，所述aav衣壳蛋白是嵌合的。
10、在一些实施方式中，当在全身地递送给受试者的情况下，在所述受试者的中枢神经系统中测量时，相对于seq id no.1所示的天然aavhu.32衣壳蛋白，所述变体aav衣壳蛋白对中枢神经系统的组织和/或细胞的特异性增加和/或转导效率增加。
11、在一些实施方式中，所述中枢神经系统的细胞选自如下至少一种细胞类型：神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞和大脑血管细胞；
12、在一些实施方式中，所述中枢神经系统的组织选自如下至少一种组织类型：大脑、丘脑、皮质、纹状体、腹侧中脑、脊髓和小脑。
13、在一些实施方式中，当在全身地递送给受试者的情况下，在所述受试者的脱靶组织和/或脱靶细胞中测量时，相对于seq id no.1所示的天然aavhu.32衣壳蛋白，所述变体aav衣壳蛋白对脱靶组织和/或脱靶细胞的特异性降低和/或转导效率降低；
14、可选的，所述的脱靶组织包括肝脏组织；可选的，所述脱靶细胞包括肝脏细胞。
15、本专利技术提供了一种生物材料，包括如下任意一项：
16、1)、编码所述的变体aav衣壳蛋白的核酸分子；
17、2)、含有1)中所述核酸分子的重组载体；
18、3)、含有1)中所述核酸分子或(2)中所述重组载体的宿主细胞。
19、本专利技术披露的实施方式涉及一种重组腺相关病毒raav，含有所述的变体aav衣壳蛋白；
20、作为最佳的实施方式，还包括编码目的产物异源核苷酸序列；
21、作为最佳的实施方式，所述目的产物包括核酸、肽或蛋白质；
22、作为最佳的实施方式，所述核酸选自sirna或小向导rna；
23、作为最佳的实施方式，所述重组腺相关病毒raav的原始载体为raavhu.32。
24、作为最佳的实施方式，所述的变体aav衣壳蛋白存在于所述的重组腺相关病毒raav衣壳蛋白vp1中。
25、本专利技术披露的实施方式涉及一种药物组合物，含有所述的重组腺相关病毒raav以及药学上可接受的辅料。
26、术语“药学上可接受的”表明本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种变体AAV衣壳蛋白，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的变体AAV衣壳蛋白，其特征在于，所述AAV衣壳蛋白存在于所述AAV衣壳的VP1、VP2和/或VP3中。
3.根据权利要求1或2所述的变体AAV衣壳蛋白，其特征在于，所述AAV衣壳蛋白是嵌合的。
4.根据权利要求1-3任一项所述的变体AAV衣壳蛋白，其特征在于，当在全身地递送给受试者的情况下，在所述受试者的中枢神经系统中测量时，相对于SEQ ID NO.1所示的天然AAVhu.32衣壳蛋白，所述变体AAV衣壳蛋白对中枢神经系统的组织和/或细胞的特异性增加和/或转导效率增加。
5.根据权利要求4所述的变体AAV衣壳蛋白，其特征在于，所述中枢神经系统的细胞选自如下至少一种细胞类型：神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞和大脑血管细胞；
6.根据权利要求1-5任一项所述的变体AAV衣壳蛋白，其特征在于，当在全身地递送给受试者的情况下，在所述受试者的脱靶组织和/或脱靶细胞中测量时，相对于SEQ ID NO.1所示的天然AAVhu.32衣壳蛋白，所述变体AAV衣壳蛋
7.生物材料，包括如下任意一项：
8.一种重组腺相关病毒rAAV，其特征在于，含有权利要求1-6任一项所述的变体AAV衣壳蛋白；
9.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求8所述的重组腺相关病毒rAAV以及药学上可接受的辅料。
10.权利要求8所述的重组腺相关病毒rAAV在制备用于将目的产物递送至中枢神经系统的药物中的用途；
...【技术特征摘要】
1.一种变体aav衣壳蛋白，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的变体aav衣壳蛋白，其特征在于，所述aav衣壳蛋白存在于所述aav衣壳的vp1、vp2和/或vp3中。
3.根据权利要求1或2所述的变体aav衣壳蛋白，其特征在于，所述aav衣壳蛋白是嵌合的。
4.根据权利要求1-3任一项所述的变体aav衣壳蛋白，其特征在于，当在全身地递送给受试者的情况下，在所述受试者的中枢神经系统中测量时，相对于seq id no.1所示的天然aavhu.32衣壳蛋白，所述变体aav衣壳蛋白对中枢神经系统的组织和/或细胞的特异性增加和/或转导效率增加。
5.根据权利要求4所述的变体aav衣壳蛋白，其特征在于，所述中枢神经系统的细胞选自如下至少一种细胞类型：神经元、少突胶...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：布林凯斯深圳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。