【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物基因领域，特别是涉及一种抗cd276的纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、cd276(recombinant cluster of differentiation 276)，又称b7-h3，是i型跨膜糖蛋白，分子量为45-66kda，其与b7-h1(pd-l1)有相似的分子结构，是b7-cd28家族重要的免疫检查点分子。cd276主要以膜蛋白和可溶形式存在，其中，可溶形式由膜蛋白经金属蛋白酶剪切而来。此外，在外泌体和其他胞外小泡中也发现了cd276蛋白。cd276在免疫系统中可能发挥共刺激和共抑制的双重作用：一方面，其具有对cd4+和cd8+t细胞的共刺激作用，作为一种共刺激分子，cd276信号诱导细胞免疫，促进细胞因子ifn-γ、il-8、tnf-α等的分泌，增强cd8+t细胞的细胞毒作用；另一方面，其可以抑制treg细胞，从而使肿瘤逃逸免疫反应，其机制可能与t细胞表面受体调节基因转录的nfat、nfκb和ap-1因子三个主要信号通路相关。已有大量研究证实cd276在多种类型的癌症中广泛表达，其与肿瘤不良预后的相关性也被确认。目前cd276抗体的临床应用研究主要有针对肿瘤的抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugates，adc)、抗体介导的细胞毒(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity，adcc)药物、双特异性及三特异性抗体、嵌合抗原受体t细胞(chimericantigen receptor t，car-t)治疗等。
2、重链抗
3、目前市面上报道的针对cd276的抗体绝大部分都是由重链可变区(variabledomain of heavy chain of heavy chain antibody，vhh)和轻链可变区组成的单链抗体(single chain fragment variable，scfv)。scfv抗体大小几乎是vhh抗体的两倍，并且在scfv中，fr2中的四个残基形成疏水界面，这个疏水区虽然促进了vh-vl的连接，但是降低了scfv的溶解度，导致它们有很高的聚集倾向，相比vhh抗体，scfv抗体不容易溶解，可能影响对抗原的识别。scfv的另一个重大缺点是它们大部分来源于啮齿类动物，因为杂交瘤技术只在小鼠和大鼠身上得到很好的发展。小鼠vl和vh与人类相应区域的序列同源性分别只有53％和51％，而vhh抗体与人类vh(vh3基因家族)显示出很高的序列相似性，约75-90％的同源性，因此vhh抗体的人性化程度更高，免疫原性更低。鼠源scfv抗体即使在人源化之后，其可变区仍能引起抗独特型反应，不利于免疫治疗。
4、综上所述，亟需研发一种新的技术方案，以解决现有技术中存在的问题。
技术实现思路
1、基于纳米抗体的优势，本专利技术成功构建了人cd276胞外段蛋白免疫的羊驼噬菌体抗体库，并从中筛选出了2条新的抗cd276的纳米抗体的vhh序列。我们实验发现该纳米抗体既可以做细胞流式又可以做组织的免疫组化来检测人cd276抗原，因此具有检测cd276抗原的应用前景；同时，该纳米抗体序列可制备成嵌合抗原受体t细胞(car-t)，并可以有效地杀伤cd276阳性的肿瘤细胞，因此具有应用于靶向cd276阳性细胞的免疫治疗方面的前景。
2、本专利技术所涉及的术语“嵌合抗原受体”，是指一种人造受体，经过基因工程改造，赋予免疫细胞(如t淋巴细胞)靶向特定抗原的新能力。这些受体是嵌合的，因为它们将抗体中特异性识别抗原的结构域和t细胞激活功能域结合到一个受体中。
3、本专利技术所涉及的术语“重链cdr”，即，重链的互补决定区，是指抗体重链可变区的核心保守结构，是决定抗体结合抗原的关键区域，包括cdr1、cdr2和cdr3。
4、本专利技术所涉及的术语“框架区fr”，是vhh抗体中除cdr区外的序列。
5、本专利技术的一个目的在于，提供一种抗cd276的纳米抗体，所述抗cd276的纳米抗体包括互补决定区cdr和框架区fr；
6、其中，
7、所述互补决定区cdr包括互补决定区cdr1-cdr3；
8、所述互补决定区cdr1-cdr3分别如氨基酸序列1-3所示；
9、所述氨基酸序列1-3如seq id no.1-seq id no.3所示。
10、进一步地，所述框架区fr包括框架区fr1-fr5；
11、其中，
12、所述框架区fr1-fr5分别如氨基酸序列4-8所示；
13、所述氨基酸序列4-8如seq id no.4-seq id no.8所示。
14、进一步地，所述抗cd276的纳米抗体的氨基酸序列为cd276-vhh1或cd276-vhh2；所述cd276-vhh1和cd276-vhh2如seq id no.9-seq id no.10所示。
15、进一步地，所述抗cd276的纳米抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其组合。
16、本专利技术的另一个目的在于，提供一种核酸分子，所述核酸分子编码上述抗cd276的纳米抗体。
17、进一步地，所述核酸分子包括核酸序列seq id no.11或seq id no.12。
18、本专利技术的另一个目的在于，提供一种载体，所述载体包括上述抗cd276的纳米抗体。
19、进一步地，所述载体选自dna分子、mrna分子或细胞。
20、本专利技术的另一个目的在于，提供所述载体在抗原检测、吸附抗原试剂和免疫治疗中的应用。
21、进一步地，所述抗原检测为cd276抗原检测。
22、进一步地，所述免疫治疗为针对cd276阳性细胞免疫治疗。
23、噬菌体展示技术是最常用的纳米抗体生产方法，通过基因工程从天本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗CD276的纳米抗体，其特征在于，所述抗CD276的纳米抗体包括互补决定区CDR和框架区FR；
2.根据权利要求1所述抗CD276的纳米抗体，其特征在于，所述框架区FR包括框架区FR1-FR5；
3.根据权利要求1所述抗CD276的纳米抗体，其特征在于，所述抗CD276的纳米抗体的氨基酸序列为CD276-VHH1或CD276-VHH2；
4.根据权利要求1所述抗CD276的纳米抗体，其特征在于，所述抗CD276的纳米抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其组合。
5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-4任一项所述抗CD276的纳米抗体。
6.根据权利要求5所述核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括核酸序列SEQ IDNo.11或SEQ ID No.12。
7.一种载体，其特征在于，所述载体包括权利要求1-4任一项所述抗CD276的纳米抗体。
8.根据权利要求7所述载体，其特征在于，所述载体选自DNA分子、mRNA分子或细胞。
9.权利要求7-8任一项
...【技术特征摘要】
1.一种抗cd276的纳米抗体，其特征在于，所述抗cd276的纳米抗体包括互补决定区cdr和框架区fr；
2.根据权利要求1所述抗cd276的纳米抗体，其特征在于，所述框架区fr包括框架区fr1-fr5；
3.根据权利要求1所述抗cd276的纳米抗体，其特征在于，所述抗cd276的纳米抗体的氨基酸序列为cd276-vhh1或cd276-vhh2；
4.根据权利要求1所述抗cd276的纳米抗体，其特征在于，所述抗cd276的纳米抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其组合。
【专利技术属性】
技术研发人员：王志民，王晓辉，黄磊，卢双双，
申请(专利权)人：普飞郑州高新技术产业开发区生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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