【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析，特别涉及一种甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质及其制备方法。
技术介绍
1、甘氨酰谷氨酰胺是一种人工合成的多肽类氨基酸，它是15种复方氨基酸双肽注射液的主要成分之一，甘氨酸谷氨酰胺主要用于提供谷氨酰胺，以促进蛋白质合成。谷氨酰胺在肠外营养中起着非常重要的作用，其可以减轻肠道黏膜萎缩，能够增强小肠及结肠细胞的活性，从而增强肠黏膜功能，减少肠道内的细菌和内毒素异位，因此甘氨酰-l-谷氨酰胺在医疗领域拥有广阔的发展空间。
2、本次制备的甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质j是以氯乙酰氯为路线制备甘氨酰谷氨酰胺的工艺杂质，目前尚无关于该杂质制备方法的报道。由于在以l-谷氨酰胺和氯乙酰氯为路线制备甘氨酰谷氨酰胺的生产过程中，使用氯乙酰氯制备的中间体n-氯乙酰-l-谷氨酰胺与甘氨酰谷氨酰胺发生卤代氨解，从而不可避免地生成副产物杂质j。对该杂质的研究可用于甘氨酰谷氨酰胺中杂质的定性定量分析，对提高甘氨酰谷氨酰胺的质量标准，进行药理毒理有积极意义。
技术实现思路
1、本专利提供了一种甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质的制备方法，该线路设计合理，操作简单，反应条件温和（以水为反应溶剂，反应温度温和），原料易得（为甘氨酰谷氨酰胺合成的原料及本身），所得目标产物的纯度达98%以上，可用于杂质的定性定量分析，对甘氨酰谷氨酰胺原料药质量研究有积极意义。
2、本专利技术公开的甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质（为了便于描述，简称为j）的结构式如下：
3、。
4、该甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质的
5、。
6、其中，谷氨酰胺（化合物1）和氯乙酰氯在碱性水溶a中反应得到化合物2，反应体系的ph≥9，反应温度为0-10℃。化合物2（n-氯乙酰-l-谷氨酰胺）与甘氨酰谷氨酰胺在碱性水溶b中反应，反应温度为20-50℃，反应完成后硅胶柱纯化得到潜在杂质j。其中，碱性水溶b选自碳酸钠溶液或碳酸钾溶液等。碱性水溶b的浓度为5-20wt%，优选地，浓度为10-20wt%。化合物2、甘氨酰谷氨酰胺和碱b的摩尔比为1：0.9-1.0：1.5-3.0，优选地，化合物2、甘氨酰谷氨酰胺和碱b的摩尔比为1：1：2。
7、具体地，硅胶柱纯化的过程为：反应完成后，在反应液中加入硅胶，减压浓缩至干得到固体，固体进行硅胶柱层析得到潜在杂质j。硅胶的用量为化合物2重量的0.5-1.5倍；优选地，硅胶的用量为化合物2重量的1倍。以甲醇-二氯甲烷-乙酸作为洗脱剂，甲醇：二氯甲烷：乙酸的体积比为2：1：0.01-0.03。
8、其中，碱性水溶a为氢氧化钠溶液，氢氧化钠溶液的浓度为5-30wt%，优选为15-20wt%。l-谷氨酰胺、氯乙酰氯和氢氧化钠的摩尔比为1：1.1-1.5：0.5-1.2。优选地，l-谷氨酰胺、氯乙酰氯和氢氧化钠的摩尔比为1：1.1-1.2：1.0-1.2。
9、其中，谷氨酰胺和氯乙酰氯反应完成后，调整ph至1-3，析晶，固液分离得到化合物2。
10、本专利技术提供的甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质的制备方法包括：
11、s1氯乙酰化：先将谷氨酰胺溶于水中，再滴加氢氧化钠溶液；控制滴加温度在0-10℃，然后再滴加氯乙酰氯，同时滴加氢氧化钠溶液以维持ph≥9；滴加完成后，反应1-2小时，反应完成后，加入浓盐酸调ph至1-3，搅拌析晶后抽滤，得化合物2。其中，l-谷氨酰胺、氯乙酰氯和氢氧化钠的摩尔比为1：1.1-1.5：0.5-1.2，氢氧化钠溶液的浓度为5-30wt%。
12、s2卤代氨解、硅胶柱纯化：将化合物2和甘氨酰谷氨酰胺溶解到碱性水溶b中，在20-50℃下反应，反应时间为6-8小时，反应完成后，加入硅胶，减压浓缩（温度为50-65℃）至干得到固体，固体进行硅胶柱层析，洗脱液减压浓缩（温度为50-60℃）至干得到潜在杂质j。其中，碱性水溶b选自碳酸钠溶液或碳酸钾溶液，碱性水溶b的浓度为5-20wt%。化合物2、甘氨酰谷氨酰胺和碱b的摩尔比为1：0.9-1.0：1.5-3.0，硅胶的用量为化合物2重量的0.5-1.5倍，以甲醇-二氯甲烷-乙酸作为洗脱剂，甲醇：二氯甲烷：乙酸的体积比为2：1：0.01-0.03。
13、优选地，在步骤s1中，反应温度为0-5℃。
14、优选地，在步骤s1中，加入浓盐酸调ph至1-2。
15、优选地，在步骤s2中，反应温度为30-40℃。
16、在步骤s1中，谷氨酰胺有两个氨基，在碱性条件和低温下，酰胺不容易与酰氯反应，也不容易自反应，酰胺也不容易分解。加入酸的作用：一是将盐变为酸，二是让产物沉降下来。
17、在步骤s2中，化合物2有一个氨基、一个羧基和一个氯基，甘氨酰谷氨酰胺有两个氨基和一个羧基，各基团之间均具有反应的可能。申请人发现，在较弱的碱性下，步骤s2的反应为主反应（对反应液进行液相色谱分析，目标产物的纯度仅50-60%），允许其他反应进行。最后通过特殊的纯化方法进行纯化。在弱碱性的条件下，可以促进主反应进行；但是若碱性太强，酰胺基容易分解，会导致反应更加复杂，则对碱的碱性和浓度都有要求。对于硅胶柱纯化，由于本专利的反应非常复杂，纯化难度非常高，则对洗脱剂的要求非常高，仅能在特定的组合及配比下才能实现，即使在最优的条件下，高纯度产物（98%以上，成分简单，适用于药品分析，且杂质仅一种（hplc检测））的收率也仅10%左右，量非常少，但是对于药品的分析足够了。
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1.甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质，其特征在于，其结构式如下：
2.如权利要求1所述的甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质的制备方法，其特征在于，反应流程如下：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，硅胶柱纯化的过程为：反应完成后，在反应液中加入硅胶，减压浓缩至干得到固体，固体进行硅胶柱层析得到潜在杂质J；所述硅胶的用量为化合物2重量的0.5-1.5倍，以甲醇-二氯甲烷-乙酸作为洗脱剂，所述甲醇：二氯甲烷：乙酸的体积比为2：1：0.01-0.03。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述碱性水溶A为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度为5-30wt%。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述L-谷氨酰胺、氯乙酰氯和氢氧化钠的摩尔比为1：1.1-1.5：0.5-1.2。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述谷氨酰胺和氯乙酰氯反应完成后，调整pH至1-3，析晶，固液分离得到化合物2。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
8.根据权利要求7所述的制备方法
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，反应时间为6-8小时。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，硅胶减压浓缩的温度为50-65℃，洗脱液减压浓缩的温度为50-60℃。
...【技术特征摘要】
1.甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质，其特征在于，其结构式如下：
2.如权利要求1所述的甘氨酰谷氨酰胺潜在杂质的制备方法，其特征在于，反应流程如下：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，硅胶柱纯化的过程为：反应完成后，在反应液中加入硅胶，减压浓缩至干得到固体，固体进行硅胶柱层析得到潜在杂质j；所述硅胶的用量为化合物2重量的0.5-1.5倍，以甲醇-二氯甲烷-乙酸作为洗脱剂，所述甲醇：二氯甲烷：乙酸的体积比为2：1：0.01-0.03。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述碱性水溶a为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度为5-30wt%。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述l-谷氨酰胺、氯乙酰氯和氢氧化钠的摩尔比...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗云，阮海燕，梁文革，吴伟伟，江曦，杨庆垂，商雷，冯议，石攀文，黄红国，詹志武，张琪，
申请(专利权)人：湖北泓肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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