【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术涉及非经典人类主要组织相容性复合体(mhc)分子(也称为mhc ib类分子)与肽抗原组合用于治疗帕金森病的治疗用途。本专利技术更具体地涉及包含肽抗原和非经典mhc ib类分子的一个或多个结构域的重组多肽。本专利技术还涉及生产此类重组多肽的方法、包含此类重组多肽的药物组合物以及它们用于治疗帕金森病的用途。
技术介绍
0、背景
1、帕金森病(pd)是最常见的神经退行性运动障碍，全球有超过700万人受其影响，目前尚无治愈方法。患者患有严重的运动和非运动症状，如震颤、运动迟缓、僵硬、姿势不稳和抑郁。病理性的疾病特征是黑质(substantia nigra)中多巴胺能神经元的退化和含有α-突触核蛋白的蛋白质聚集体(称为lewy-bodies，路易体)的形成。虽然α-突触核蛋白(asyn)的生理作用指向突触递质释放和免疫反应放大的功能(alam et al,cell reports 38:110090.doi:10.1016/j.celrep.2021.110090)，但不溶性α-突触核蛋白的致病作用仍是一个谜。研究发现，asyn编码基因snca的倍增和突变可以引发遗传性pd，这将asyn与pd的发病机制紧密联系起来。
2、人类pd患者的脑部解剖特征包括黑质中小胶质细胞的活化和t细胞的浸润(brochard v et al.,2009；mcgeer pl et al.,1988)。黑质纹状体系统中的促炎性细胞因子，如肿瘤坏死因子(tnf)-α、干扰素(ifn)-γ和白介素il-1β及il-6进一
3、目前，pd的疗法主要依靠使用左旋多巴胺或衍生物质来弥补黑质神经元的损失。这种干预措施最初可以改善疾病症状，但无法阻止疾病的进展。
4、一项以人群为基础的病例对照研究(包括约48,000名pd患者)分析了服用免疫抑制剂后患pd的风险。服用硫唑嘌呤(azathioprine)的患者罹患pd的风险显著降低(racetteba et al.,2018)。最近的一项队列研究进一步表明，接受抗tnf-α治疗炎症性肠病的患者患pd的风险降低(peter i et al.,2018)。小规模开放标签临床试验已经探索了β2-肾上腺素能受体激动剂或抗il-17疗法等免疫调节剂的效果，并取得了部分令人鼓舞的结果(magistrelli land comi c,2020；storelli e et al.,2019)。
5、考虑到这种慢性疾病通常进展缓慢的特性，强效免疫抑制剂的副作用是早期pd患者试验的主要障碍。然而，对于晚期患者，不可逆的神经退化限制了通过阻止进一步进展所能获得的益处。相比之下，高度针对性的免疫调节药物可以实现早期治疗，从而最大限度地提高治疗效果。
6、为此，对asyn特异性抗体cinpanemab(biib054)进行了临床试验(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/nct03318523)。人们曾希望通过cinpanemab隔离游离asyn可以防止asyn进一步聚集，从而防止疾病进展。不幸的是，这项研究未能达到其主要或次要终点。因此，仍然迫切需要针对pd的具有靶向性和有效的疾病改善疗法。
7、t细胞在pd中的致病作用主要在基于毒素的模型中进行分析，例如1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(mptp)或6-羟基多巴胺(6-ohda)模型。然而，由于缺乏asyn聚集和路易体形成，这些模型不能很好地反映人类疾病的分子方面。这促使ip博士开发了一种可忠实地重现人类疾病基本特征的新型pd小鼠模型。立体定向引导下，将编码人类α-突触核蛋白a53t(“hasyn”)的aav1/2载体单侧注射到黑质中，诱导了行为缺陷、多巴胺能黑质神经元和纹状体纤维的丢失以及纹状体多巴胺的减少，以及路易体形成(ip cw et al.,2017)。由于该模型的高表面效度是通过注射已知与人类疾病相关的α-突触核蛋白突变体实现的，因此该模型的致病相关性也得到了其疾病相关构建体效度的支持。此外，在该动物模型中可检测到显示s129磷酸化的不溶性asyn聚集体和路易氏样神经突和小体(ip cw et al.,2017)。因此，hasyn pd模型为推进临床前和转化工作以为pd患者开发新的、更好的疗法提供了重要工具。在一个合作项目中，专利技术人证实了该hasyn pd模型中脑免疫细胞的广泛促炎特征，并证明了cd4+和cd8+活化t细胞亚群浸润到hasyn pd小鼠的脑中。这些t细胞诱导具有pd样症状的神经变性。遗传性t细胞缺陷(rag-1-/-)减少了多巴胺能神经变性，而t细胞重建加剧了体内神经元丢失。从hasyn pd小鼠脑中分离出的t细胞在体外对表达hasyn的神经元细胞具有细胞毒性(karikari et al.,brain behav immun.2022mar；101:194-210.)。
8、免疫抑制mhc ib类分子(如hla-g)对于妊娠期间的耐受诱导至关重要。它们通过免疫抑制受体(如ilt2、ilt4和kir2dl4)对各种免疫细胞发挥免疫抑制作用。wo2018/215340涉及mhc ib类分子和肽的组合，用于靶向性治疗性的免疫调节，但未提及帕金森病的治疗。
9、因此，迫切需要有效治疗帕金森病的靶向药物。
技术实现思路
1、本专利技术人发现，人类mhc ib类分子，例如hla-g，具有诱导针对所呈递肽抗原的抗原特异性耐受性的能力。因此，尽管mhc ib类分子的结构和序列与诱导抗原肽特异性免疫反应的经典人类mhc ia类分子相似，但根据本专利技术，mhc ib类分子可以有利地用于以抗原特异性方式抑制免疫反应。此外，本专利技术人发现，除天然存在的mhc ib类分子之外的分子，特别是仅包含mhc ib类分子的至少一个结构域、优选mhc ib类分子的至少α3结构域的多肽，可用于如本专利技术所述的抑制免疫反应：各种ia类分子的α1和α2结构域可以与人类mhcib类分子的α3结构域组合，以抑制针对这些抗原所呈递的肽的免疫反应。负载有抗原的hla-g分子可能不稳定。因此，专利技术人设计了可溶性重组多肽，其包含肽抗原、mhc ib类分子，例如hla-g，和β2-微球蛋白(b2m)，并将这三个成分共价连接(例如，通过共价接头)。或者，用其他mhc分子的相应结构域对mhc ib类分子(例如hla-g)的抗原结合α1和α2结构域进行更换，以增强这些重组多肽的灵活性和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够呈递肽抗原的重组多肽，所述重组多肽按N端至C端的顺序包含：
2.根据权利要求1所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原的长度为7至11个氨基酸，优选8-10个氨基酸。
3.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由SEQ ID No:20、SEQ ID No:21、SEQ ID No:22、SEQ IDNo:23、SEQID No:24、SEQ ID No:25、SEQ ID No:26、SEQ ID No:27、SEQ ID No:28、SEQ ID No:29、SEQID No:30、SEQ ID No:31、SEQ ID No:33、SEQ ID No:34、SEQ ID No:35、SEQ ID No:36、SEQID No:37、SEQ ID No:38、SEQ ID No:39、SEQ ID No:40、SEQ ID No:41、SEQ ID No:42、SEQID No:43、SEQ ID No:44、SEQ ID No:45和SEQ ID No:46的氨基酸序列组成。>
4.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类MHC Ia类分子或来自人类MHC Ib类分子。
5.根据权利要求4所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类MHC Ib类分子，并且其中所述人类MHC Ib类分子是人类HLA-G分子。
6.根据权利要求5所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类MHC Ia类分子，并且其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类HLA-A2分子、人类HLA-A1分子或人类HLA-A11分子。
7.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的MHC Ib类分子的α3结构域是人类HLA-E、人类HLA-F或人类HLA-G的α3结构域，优选人类HLA-G。
8.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列SEQ ID No:9或SEQ ID No:2的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列SEQID No:9或SEQ ID No:2的α3结构域具有至少80％氨基酸序列同一性、至少90％氨基酸序列同一性、至少92％氨基酸序列同一性、至少94％氨基酸序列同一性、至少96％氨基酸序列同一性、至少98％氨基酸序列同一性、或至少99％氨基酸序列同一性，或者与具有氨基酸序列SEQ ID No:9或SEQ ID No:2的α3结构域相同。
9.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(ii)的接头序列和/或根据(iv)的接头序列包含氨基酸序列(GGGGS)n，其中n是等于或大于1的整数，并且其中n优选为选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组中的整数，并且优选选自由2、3、4和5组成的组中。
10.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(iii)的人多肽结构域的所述序列与SEQ ID No:5的氨基酸序列至少95％相同，优选与SEQ ID No:5的氨基酸序列至少98％相同，更优选与SEQ ID No:5的氨基酸序列相同。
11.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽是二聚体或多聚体。
12.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽包含或由所有的组分i)至vii)组成，不包含组分viii)至x)，或者，包含或由所有的组分i)至x)组成。
13.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其还包含N端分泌信号肽序列。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽由如下氨基酸序列组成，所述氨基酸序列以N端至C端的顺序由下述((a)和(b))组成：
15.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽是可溶的。
16.一种核酸，其编码一种或多种根据上述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述核酸优选为载体。
17.一种药物组合物或试剂盒，其包含至少一种根据权利要求16所述的核酸。
18.一种药物组合物或试剂盒，其包含至少一种根据权利要求1-15中任一项所述的重组多肽。
19.根据权利要求18所述的药物组合物或试剂盒，其中所述药物组合物或试剂盒包含至少两种不同的根据权利要求1-15中任一项所述的重组多肽，并且其中每种不同的多肽包含不同的如权利要求...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种能够呈递肽抗原的重组多肽，所述重组多肽按n端至c端的顺序包含：
2.根据权利要求1所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原的长度为7至11个氨基酸，优选8-10个氨基酸。
3.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由seq id no:20、seq id no:21、seq id no:22、seq idno:23、seqid no:24、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seqid no:30、seq id no:31、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36、seqid no:37、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40、seq id no:41、seq id no:42、seqid no:43、seq id no:44、seq id no:45和seq id no:46的氨基酸序列组成。
4.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类mhc ia类分子或来自人类mhc ib类分子。
5.根据权利要求4所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类mhc ib类分子，并且其中所述人类mhc ib类分子是人类hla-g分子。
6.根据权利要求5所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类mhc ia类分子，并且其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类hla-a2分子、人类hla-a1分子或人类hla-a11分子。
7.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的mhc ib类分子的α3结构域是人类hla-e、人类hla-f或人类hla-g的α3结构域，优选人类hla-g。
8.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:2的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列seqid no:9或seq id no:2的α3结构域具有至少80％氨基酸序列同一性、至少90％氨基酸序列同一性、至少92％氨基酸序列同一性、至少94％氨基酸序列同一性、至少96％氨基酸序列同一性、至少98％氨基酸序列同一性、或至少99％氨基酸序列同一性，或者与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:2的α3结构域相同。
9.根据上述权利要求中任一项所述的重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔戈·维施胡森，瓦伦汀·布鲁塔尔，叶志宏，
申请(专利权)人：尤利乌斯·马克西米利安维尔茨堡大学，
类型：发明
国别省市：
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