一种牛克隆胚胎的培养液及其应用制造技术

技术编号：44062579 阅读：1 留言：0更新日期：2025-01-17 16:02

本发明专利技术涉及牛克隆胚胎培养的技术领域，公开一种牛克隆胚胎的培养液及其应用。所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/L、氯化钾0.23g/L、碳酸氢钠2.2g/L、丙酮酸钠0.04g/L、半乳酸钙0.76g/L、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0.146g/L、牛血清白蛋白4g/L和NAD<supgt;+</supgt;10~100μmol/L。该培养液可以明显提高牛克隆胚胎的囊胚率、妊娠率，降低牛克隆胚胎的凋亡率和活性氧水平，使牛克隆胚胎的质量得到了显著的改善，有利于优化牛的体细胞克隆操作体系，降低牛克隆胚胎从生产到应用的成本。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于牛克隆胚胎培养的，尤其涉及一种牛克隆胚胎的培养液及其应用。

技术介绍

1、牛作为大型农业动物，其克隆技术的发展一直备受关注。以不同类型的体细胞，如成纤维细胞、卵丘细胞、肌肉细胞、乳腺上皮细胞等用于供核体细胞时，都得到了克隆动物。目前，同牛的体内胚胎相比，牛的克隆胚胎发育质量仍然不高，主要体现在获得的囊胚少、形态差、囊胚的细胞数目少、凋亡细胞数目多、妊娠率低下、妊娠时间增长、出现巨胎及出生性别比失衡、费用高昂等。以上原因严重制约了克隆胚胎技术的实际应用。

2、因此，现有技术仍有待改进和发展。

技术实现思路

1、鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种牛克隆胚胎的培养液及其应用，所述培养液能够显著降低牛克隆胚胎的活性氧（ros）含量及凋亡水平，提高牛克隆胚胎的囊胚率及胚胎质量，从而降低体外生产牛克隆胚胎的成本。

2、本专利技术的技术方案如下：

3、第一方面，提供一种牛克隆胚胎的培养液，所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/l、氯化钾0.23g/l、碳酸氢钠2.2g/l、丙酮酸钠0.04g/l、半乳酸钙0.76g/l、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0.146g/l、牛血清白蛋白4g/l和nad+10~100μmol/l；

4、其中，所述双抗以水配制，包括的物质及其含量为：青霉素10000u/ml和链霉素10000μg/l；

5、其中，所

6、其中，所述非必需氨基酸以水配制，包括的物质及其含量为：l-丙氨酸0.89g/l、l-天门冬酰胺一水合物1.5g/l、l-天冬氨酸1.33g/l、l-谷氨酸1.47g/l、甘氨酸0.75g/l、l-脯氨酸1.15g/l和l-丝氨酸1.05g/l。

7、优选的技术方案，所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/l、氯化钾0.23g/l、碳酸氢钠2.2g/l、丙酮酸钠0.04g/l、半乳酸钙0.76g/l、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0.146g/l、牛血清白蛋白4g/l和nad+50μmol/l。

8、优选的技术方案，所述培养液还包括亚硒酸钠50~150μmol/l。

9、进一步优选的技术方案，所述培养液还包括亚硒酸钠100μmol/l。

10、第二方面，提供一种如第一方面所述的培养液在牛克隆胚胎培养中的应用。

11、优选的技术方案，将所述培养液应用于牛克隆胚胎培养的方法，包括：将牛克隆胚胎置于所述培养液中，在38.5℃、5v/v％co2、100％湿度条件下进行体外培养。

12、进一步优选的技术方案，所述体外培养的时间为7~9天。

13、有益效果：本专利技术提供了一种牛克隆胚胎的培养液，所述培养液在胚胎基础培养液的基础上添加了nad+，进一步地，所述培养液中还添加了亚硒酸钠。添加了50μmol/l nad+的培养液能够将牛克隆胚胎的囊胚率从27.67%提高至38.10%；添加了50μmol/l nad+和100μmol/l亚硒酸钠的培养液能够将牛克隆胚胎的囊胚率从27.67%提高至42.34%；由此可见，本专利技术的培养液能够显著提高囊胚率。同时，采用本专利技术的培养液培养的牛克隆胚胎的ros水平与凋亡情况显著下调，胚胎移植后妊娠率明显上升，进一步证实了该培养液的有效性。

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【技术保护点】

1.一种牛克隆胚胎的培养液，其特征在于，所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/L、氯化钾0.23g/L、碳酸氢钠2.2g/L、丙酮酸钠0.04g/L、半乳酸钙0.76g/L、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0.146g/L、牛血清白蛋白4g/L和NAD+ 10~100μmol/L；

2.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/L、氯化钾0.23g/L、碳酸氢钠2.2g/L、丙酮酸钠0.04g/L、半乳酸钙0.76g/L、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0.146g/L、牛血清白蛋白4g/L和NAD+ 50μmol/L。

3.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述培养液还包括亚硒酸钠50~150μmol/L。

4.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述培养液还包括亚硒酸钠100μmol/L。

5.一种如权利要求1~4任一项所述的培养液在牛克隆胚胎培养中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将所述培养液应用于牛克隆胚胎培养的方法，包括：将牛克隆胚胎置于所述培养液中，在38.5℃、5v/v％CO2、100％湿度条件下进行体外培养。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述体外培养的时间为7~9天。

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【技术特征摘要】

1.一种牛克隆胚胎的培养液，其特征在于，所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/l、氯化钾0.23g/l、碳酸氢钠2.2g/l、丙酮酸钠0.04g/l、半乳酸钙0.76g/l、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0.146g/l、牛血清白蛋白4g/l和nad+ 10~100μmol/l；

2.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述培养液以水配制，包括的物质及其含量为：氯化钠6.81g/l、氯化钾0.23g/l、碳酸氢钠2.2g/l、丙酮酸钠0.04g/l、半乳酸钙0.76g/l、双抗0.05v/v%、必需氨基酸2v/v%、非必需氨基酸1v/v%、谷氨酰胺0...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨磊，李光鹏，刘明成，刘雪霏，苏广华，白春玲，宋丽爽，
申请(专利权)人：内蒙古大学，
类型：发明
国别省市：

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