【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及禽呼肠孤病毒毒株的分离和应用领域，具体涉及一种鹅源番鸭呼肠孤病毒、灭活疫苗及其应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、禽正呼肠孤病毒（avian orthoreovirus, arv）是一类无囊膜、呈正二十面体并具有双层衣壳结构、直径为50~80nm的分节段的双链rna病毒。arv属于呼肠孤病毒科、棘突呼肠孤病毒亚科、正呼肠孤病毒属。arv可以引起多种禽类发生多种疾病，其临床表现因病毒毒株、毒力或感染宿主的不同而有差异，严重危害我国养禽业发展。
3、鉴于其为新发病，目前对该病的流行病学及致病机制等尚缺乏深入研究，也无有效的疫苗和药物进行预防和治疗，因此，从病原入手，进一步研究分子致病机理和病毒变异机理，开发相应疫苗是防控该传染性疾病的关键。因此，急需研制一种安全高效能预防该鹅源番鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗。相较于弱毒疫苗，灭活疫苗比较安全、生产简单且易于保存，对该病的防控及养鹅业的健康发展同样具有重要意义。
技术实现思路
1、针对上述现有技术，本专利技术从发病的雏鹅中分离得到一株导致雏鹅“花肝病”的番鸭呼肠孤病毒，并对该鹅源番鸭呼肠孤病毒的细胞嗜性、致病性和免疫原性进行了考察，为新发的以“花肝病”和关节腔严重出血为主要特征的传染性疾病的防治提供了保障。
2、具体的，本专利技术涉及以下技术方案：p>
3、本专利技术的第一方面，提供了一株鹅源番鸭呼肠孤病毒，该病毒已于2024年10月30日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称cctcc），保藏名称为：番鸭呼肠孤病毒mdrv-js001，分类命名为：番鸭呼肠孤病毒（ muscovy duck reovirus），保藏地址为：中国武汉，武汉大学，保藏编号为：cctcc no：v202491。
4、本专利技术提供的鹅源番鸭呼肠孤病毒为现有禽呼肠孤病毒的变异株，被其感染的家禽肝脏、脾脏或其他组织器官会出现大量白色坏死斑点，还会出现精神萎靡，食欲不振，运动障碍，排黄绿色稀便的症状，除此之外，被感染后的家禽还会出现关节肿大，剖检可见关节腔严重出血，而上述病症在以往的番鸭呼肠孤病毒感染中未曾出现。
5、优选的，所述家禽为雏鹅。
6、本专利技术第二方面，提供了上述鹅源番鸭呼肠孤病毒在制备防治雏鹅“花肝病”和关节腔出血的疫苗中的应用。
7、所述“花肝病”是指由保藏编号为：cctcc no：v202491的番鸭呼肠孤病毒感染导致的雏鹅肝脏、脾脏或其他组织器官出现大量白色坏死斑点。
8、优选的，所述疫苗为灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗或者基因工程疫苗中的任一种。
9、通过对本专利技术提供的鹅源番鸭呼肠孤病毒的细胞嗜性、免疫原性进行考察，发现该毒株具有广泛的细胞嗜性，可以在lmh细胞上增殖，而且能够在短时间内进行大量增殖，非常适合进行高抗原滴度的优质灭活疫苗的生产，并且对新发的以雏鹅“花肝病”和关节腔出血为主要病症的传染性疾病具有很好的免疫原性，因此，本专利技术提供的鹅源番鸭呼肠孤病毒可以作为优异的疫苗株，用于疫苗的制备。
10、术语“细胞嗜性”指具有在一种或多种细胞系或者组织细胞中感染和/或复制的能力。
11、本专利技术第三方面，提供了一种防治鹅“花肝病”和关节腔出血的灭活疫苗，所述灭活疫苗含有预防或治疗上有效量的灭活的鹅源番鸭呼肠孤病毒液；所述鹅源番鸭呼肠孤病毒的保藏编号为cctcc no：v202491。
12、所述灭活的鹅源番鸭呼肠孤病毒液制备方法包括如下步骤：
13、（1）将保藏编号为cctcc no：v202491的鹅源番鸭呼肠孤病毒株接种到lmh细胞中，对鹅源番鸭呼肠孤病毒进行增殖培养后，通过冻融破碎细胞，收取上清液，并进行纯化，获得鹅源番鸭呼肠孤病毒液；
14、（2）向步骤（1）获得的鹅源番鸭呼肠孤病毒液中加入终浓度为0.2%的甲醛，37℃搅拌灭活16h，获得灭活的鹅源番鸭呼肠孤病毒液。
15、所述鹅源番鸭呼肠孤病毒液的病毒滴度为10-6.2tcid50/0.1 ml。
16、优选的，所述灭活疫苗中还含有药学上可接受的佐剂。
17、所述灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
18、取灭活的鹅源番鸭呼肠孤病毒液，加入tween- 80混合作为水相，以白油、硬脂酸铝和span-80混合作为油相，将油相和水相按2:1混合均匀，乳化，得到防治鹅源番鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗。
19、本专利技术的有益效果：
20、1.本专利技术分离获得了一株鹅源番鸭呼肠孤病毒mdrv-js001，具有跨种传播能力，能够感染雏鹅，被该毒株感染后，雏鹅会出现关节腔肿大的现象，对发病雏鹅进行刨检发现，被感染雏鹅出现了以“花肝病”和关节腔出血为主要病症的症状。并且该毒株具有广泛的细胞嗜性，可以在lmh细胞上增殖，非常适合进行高抗原滴度的优质灭活疫苗的生产；对新发的以雏鹅“花肝病”和关节腔出血为主要病症的传染性疾病具有很好的免疫原性。可以作为优异的疫苗株，用于疫苗的制备。
21、（2）通过对该毒株σc基因序列分析发现，mdrv-js001分离株的σc基因序列与经典的番鸭呼肠孤病毒zj2000m毒株核苷酸和氨基酸的同源性均在95%以上，与其他水禽呼肠孤病毒分离株亲缘关系较远，处于不同的遗传进化分支。以保藏编号为cctcc no：v202491的鹅源番鸭呼肠孤病毒株制备的灭活疫苗安全性好，保护率达100%，并且本专利技术的灭活疫苗能够在短时间内快速达到高浓度的抗体水平，且免疫持续期长，能够为雏鹅提供快速、长期的免疫保护。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株鹅源番鸭呼肠孤病毒，其特征在于，所述鹅源番鸭呼肠孤病毒已于2024年10月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：V202491。
2.权利要求1所述的鹅源番鸭呼肠孤病毒在制备防治雏鹅“花肝病”和关节腔出血的疫苗中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗或者基因工程疫苗中的任一种。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗。
5.一种防治鹅“花肝病”和关节腔出血的灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗含有预防或治疗上有效量的灭活的鹅源番鸭呼肠孤病毒液；所述鹅源番鸭呼肠孤病毒的保藏编号为CCTCC NO：V202491。
6.根据权利要求5所述的灭活疫苗，其特征在于，所述灭活的鹅源番鸭呼肠孤病毒液制备方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的灭活疫苗，其特征在于，所述鹅源番鸭呼肠孤病毒液的病毒滴度为10-6.2 TCID50 /0.1 mL。
8.根据权利要求6所述的灭活疫苗，其特征在于，所述灭
9.根据权利要求5-8任一项所述的灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一株鹅源番鸭呼肠孤病毒，其特征在于，所述鹅源番鸭呼肠孤病毒已于2024年10月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no：v202491。
2.权利要求1所述的鹅源番鸭呼肠孤病毒在制备防治雏鹅“花肝病”和关节腔出血的疫苗中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗或者基因工程疫苗中的任一种。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗。
5.一种防治鹅“花肝病”和关节腔出血的灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗含有预防或治...
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