【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于有机合成，具体涉及一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、γ-谷氨酰转肽酶(ggt)是一种能够切割蛋白质和肽的c末端谷氨酸的酶，其活性异常升高通常与多种肝脏疾病、神经系统疾病和心肌梗死相关。在肝胆疾病的诊断中，ggt活性的变化是一个比碱性磷酸酶和亮氨酸氨基肽酶更敏感的指标。血清ggt活性的测定已成为临床诊断中的一个重要辅助手段。
2、ggt活性测定最常用的底物是l-谷氨酰-4-硝基苯胺或其相关衍生物，这些底物对酶具有足够的特异性，且使用方便、灵敏。目前，国内主要采用ifcc法和szasz法进行ggt活性测定。两种方法都是基于酶动力学原理，使用γ-谷氨酰-3-羧基-4-对硝基苯胺和双甘肽作为底物。ggt作用于供体底物γ-谷氨酰-3-羧基-4-对硝基苯胺和受体底物双甘肽，产生γ-谷氨酰双甘肽和3-羧基-4-硝基苯胺，通过在405nm处检测吸收峰来计算血清中ggt的浓度。然而，γ-谷氨酰基-4-硝基苯胺的溶解度和稳定性较差，这是该方法的一个明显缺点。这种底物溶解度低，且溶液在很短时间内就会失效。尽管可以添加表面活性剂来改善其溶解度，但γ-谷氨酰基-4-硝基苯胺仍需在50到60℃的温度下溶解，超过这个温度会自发水解。此外，由于血清样本中其他成分的波长与产物测定波长相近，需要对样品进行严格的空白测试，使得过程复杂繁琐。
3、为了解决这些问题，已经合成了几种具有更高溶解度的γ-谷氨酰基-4-硝基苯胺衍生物。例如，通过在对硝基苯胺的3位上引入一个磺酸基或羧基，可以增加底物的溶解度。
4、另一种测定方法采用γ-谷氨酰苯胺作为底物，通过改良的bratton-marshall法将苯胺裂解产物重氮化，并与n-(1-萘基)乙二胺偶联。然而，此底物在溶液中稳定性较差，且需要加热或表面活性剂来促进溶解，这严重限制了其测定范围和线性上限。
5、另一种被采用的底物是γ-l-谷氨酰-α-萘酰胺，其裂解产物是α-萘胺，可与重氮化合物固蓝b盐偶联形成强色染料。但此反应过程缓慢，且α-萘胺已被发现具有致癌性。
技术实现思路
1、本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物。
2、本专利技术的另一目的在于提供上述γ-谷氨酰转肽酶检测底物的制备方法。
3、本专利技术的再一目的在于提供上述γ-谷氨酰转肽酶检测底物的应用。
4、本专利技术的技术方案如下：
5、一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物，其为l-γ-谷氨酰-3-磺酸-4-(n,n-二乙基)苯胺，其结构式为
6、上述γ-谷氨酰转肽酶检测底物的制备方法，其合成路线为
7、
8、在本专利技术的一个优选实施方案中，包括如下步骤：
9、(1)将等摩尔的n-邻苯二甲酰-l-谷氨酸酐和3-磺酸-4-(n,n-二乙基)苯胺溶于反应溶剂中，于0-60℃反应1-2h；
10、(2)除去步骤(1)所得的物料中的反应溶剂，冷却至室温后加入冰乙醇析出结晶，然后进行固液分离，获得固体；
11、(3)将步骤(2)所得的固体溶解于反应溶剂中，接着加入肼溶液搅拌均匀，室温反应40-50h；
12、(4)将步骤(3)所得的物料进行抽滤，即得所述γ-谷氨酰转肽酶检测底物。
13、进一步优选的，所述反应溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸或乙酸乙酯。
14、进一步优选的，所述肼溶液中的溶质为肼、水合肼、硫酸肼和盐酸肼中的至少一种。
15、进一步优选的，所述步骤(1)的反应的温度为10-30℃。
16、进一步优选的，所述反应溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸或乙酸乙酯；所述肼溶液中的溶质为肼、水合肼、硫酸肼和盐酸肼中的至少一种；所述步骤(1)的反应的温度为10-30℃。
17、一种γ-谷氨酰转肽酶活性的检测方法，采用上述γ-谷氨酰转肽酶检测底物进行检测。
18、本专利技术的有益效果是：本专利技术常温下稳定且易溶于水，因此可用于ggt活性的干生化检测，显色反应产物呈绿色，检测波长范围为650-670nm，可避免底物及样本中其他活性物质对检测结果的影响。
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1.一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物，其特征在于：其为L-γ-谷氨酰-3-磺酸-4-(N,N-二乙基)苯胺，其结构式为
2.权利要求1所述的一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物的制备方法，其特征在于：其合成路线为
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述反应溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸或乙酸乙酯。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述肼溶液中的溶质为肼、水合肼、硫酸肼和盐酸肼中的至少一种。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的反应的温度为10-30℃。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述反应溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸或乙酸乙酯；所述肼溶液中的溶质为肼、水合肼、硫酸肼和盐酸肼中的至少一种；所述步骤(1)的反应的温度为10-30℃。
8.一种γ-谷氨酰转肽酶活性的检测方法，其特征在于：采用权利要求1所述的γ-谷氨酰转肽酶检测底物进行
...【技术特征摘要】
1.一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物，其特征在于：其为l-γ-谷氨酰-3-磺酸-4-(n,n-二乙基)苯胺，其结构式为
2.权利要求1所述的一种γ-谷氨酰转肽酶检测底物的制备方法，其特征在于：其合成路线为
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述反应溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸或乙酸乙酯。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述肼溶液中的溶质为...
【专利技术属性】
技术研发人员：林积蓉，温爱民，赵月梅，王丽霞，
申请(专利权)人：英科新创厦门科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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