【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域。具体地说，本专利技术涉及一种外周血中细胞毒性t细胞的快速检测方法。
技术介绍
1、细胞毒性t细胞是抗肿瘤免疫的主力军，生物领域常常需要对细胞毒性t细胞进行检测。现有的技术方案为：通过检测细胞产生细胞毒性分子如颗粒酶、穿孔素的能力鉴定细胞毒性t细胞，具体方法如下：使用t细胞刺激剂pma、离子霉素等对t细胞进行刺激，促进细胞毒性分子的表达，并加入brefeldin a(bfa)抑制蛋白质运输，使其产生的细胞毒性分子保留在细胞内。随后，对细胞进行固定、破膜处理，使用靶向细胞毒性分子如颗粒酶b、穿孔素的荧光抗体染色，使用流式细胞术检测细胞毒性分子的表达
2、然而，现有技术的检测方法具有以下缺点：(1)耗时长：整个检测时长大约需要8小时左右；(2)需要对t细胞进行tcr刺激、固定和破膜等操作，细胞在经过固定破膜后会死亡，无法获取具有活性的细胞毒性t细胞进行进一步培养。
3、因此，本领域需要开发一种耗时短、且能够在细胞存活状态下鉴定细胞毒性t细胞的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供一种耗时短、且能够在细胞存活状态下鉴定细胞毒性t细胞的方法。
2、在本专利技术的第一方面，提供了一种鉴定细胞毒性t细胞的方法，所述方法包括步骤：
3、(1)提供待检测的t细胞；
4、(2)检测所述t细胞表面标志蛋白的表达，从而鉴定所述t细胞是否为细胞毒性t细胞；
5、其中，所述标志蛋白为cx3cr1、或
6、在另一优选例中，如检测到所述t细胞为cx3cr1阳性、或cx3cr1和gpr56阳性t细胞，则所述t细胞为细胞毒性t细胞。
7、在另一优选例中，所述的cx3cr1阳性是指，所述t细胞表面cx3cr1的表达量(e1)与非细胞毒性t细胞的细胞表面cx3cr1的表达量(e0)之比(e1/e0)≥1.5，较佳地≥1.7，更佳地≥2.0。
8、在另一优选例中，所述的gpr56阳性是指，所述t细胞表面gpr56的表达量(e1)与非细胞毒性t细胞的细胞表面cx3cr1的表达量(e0)之比(e1/e0)≥1.5，较佳地≥1.7，更佳地≥2.0。
9、在另一优选例中，所述待检测的t细胞来源于人或非人哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、兔、猴。
10、在另一优选例中，所述待检测的t细胞来源于人外周血单核细胞。
11、在另一优选例中，所述的检测为体外检测。
12、在另一优选例中，所述的检测为非诊断性和非治疗性的。
13、在另一优选例中，所述的检测为流式细胞术检测。
14、在另一优选例中，所述的流式细胞术检测包括步骤：
15、(1)使用cx3cr1和gpr56的流式抗体对待检测t细胞进行染色；
16、(2)清洗所述t细胞以去除多余抗体；
17、(3)使用流式细胞仪进行检测表达cx3cr1、cx3cr1和gpr56的细胞，即为细胞毒性t细胞。
18、在另一优选例中，所述的细胞毒性t细胞选自下组：cd4+细胞毒性t细胞、cd8+细胞毒性t细胞、或其组合。
19、在另一优选例中，所述的方法不包括细胞固定和/或细胞破膜步骤。
20、在另一优选例中，所述的方法不包括检测胞内蛋白步骤。
21、在本专利技术的第二方面，提供了一种富集细胞毒性t细胞的方法，包括步骤：
22、(1)提供待富集的细胞群；
23、(2)筛选所述细胞群中高表达细胞表面标志蛋白cx3cr1、或cx3cr1和gpr56的细胞，从而富集细胞毒性t细胞。
24、在另一优选例中，所述待富集的细胞群来源于人或非人哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、兔、猴。
25、在另一优选例中，所述待富集的细胞群为人外周血单核细胞群。
26、在另一优选例中，所述的筛选通过流式细胞术进行。
27、在另一优选例中，所述的流式细胞术包括步骤：
28、(1)使用cx3cr1和gpr56的流式抗体对待富集的细胞群进行染色；
29、(2)清洗所述t细胞以去除多余抗体；
30、(3)使用流式细胞仪分选出表达cx3cr1、cx3cr1和gpr56的细胞，收集所述细胞从而得到富集的细胞毒性t细胞。
31、在另一优选例中，所述的细胞毒性t细胞选自下组：cd4+细胞毒性t细胞、cd8+细胞毒性t细胞、或其组合。
32、在另一优选例中，所述富集的细胞毒性t细胞具备活性。
33、在本专利技术的第三方面，提供了一种细胞毒性t细胞，所述细胞毒性t细胞通过如本专利技术第二方面所述的方法富集得到。
34、在另一优选例中，所述细胞毒性t细胞从人外周血单核细胞群中富集得到。
35、在另一优选例中，所述的细胞毒性t细胞选自下组：cd4+细胞毒性t细胞、cd8+细胞毒性t细胞、或其组合。
36、在另一优选例中，所述富集的细胞毒性t细胞具备活性。
37、在本专利技术的第四方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求3所述的细胞毒性t细胞、和药学上可接受的载体。
38、在本专利技术的第五方面，提供了如本专利技术第三方面所述的细胞毒性t细胞或如本专利技术第四方面所述的药物组合物在制备治疗疾病的药物中的用途。
39、在另一优选例中，所述的疾病为肿瘤、自身免疫性疾病、炎症性疾病、或其组合。
40、在本专利技术的第六方面，提供了一种用于鉴定或富集细胞毒性t细胞的试剂组合，所述试剂组合包括检测cx3cr1和gpr56蛋白的试剂。
41、在另一优选例中，所述的试剂为抗体，例如流式检测抗体。
42、在本专利技术的第七方面，提供了一种用于检测细胞毒性t细胞的设备，其特征在于，所述设备包括：
43、1)输入模块，所述输入模块用于接收待检测的t细胞；
44、2)检测模块，所述检测模块用于检测所述t细胞表面标志蛋白的试剂，其中，所述标志蛋白为cx3cr1、或cx3cr1和gpr56；
45、3)输出模块，所述输出模块用于输出检测结果。
46、在另一优选例中，如所述检测模块检测到t细胞为cx3cr1阳性、或cx3cr1和gpr56阳性t细胞，则输出模块输出：所述t细胞为细胞毒性t细胞。
47、在另一优选例中，所述的cx3cr1阳性是指，所述t细胞表面cx3cr1的表达量(e1)与非细胞毒性t细胞的细胞表面cx3cr1的表达量(e0)之比(e1/e0)≥1.5，较佳地≥1.7，更佳地≥2.0。
48、在另一优选例中，所述的gpr56阳性是指，所述t细胞表面gpr56的表达量(e1)与非细胞毒性t细胞的细胞表面cx3cr1的表达量(e0)之比(e1/e0)≥1.5，较佳地≥1.7，更佳地≥2.0。
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【技术保护点】
1.一种用于检测细胞毒性T细胞的设备，其特征在于，所述设备包括：
2.如权利要求1所述的设备，其特征在于，如所述检测模块检测到T细胞为CX3CR1阳性、或CX3CR1和GPR56阳性T细胞，则输出模块输出：所述T细胞为细胞毒性T细胞。
3.一种鉴定细胞毒性T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，如检测到所述T细胞为CX3CR1阳性、或CX3CR1和GPR56阳性T细胞，则所述T细胞为细胞毒性T细胞。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述待检测的T细胞来源于人或非人哺乳动物。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述待检测的T细胞来源于人外周血单核细胞。
7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的检测为流式细胞术检测。
8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的方法不包括细胞固定和/或细胞破膜步骤。
9.一种富集细胞毒性T细胞的方法，其特征在于，包括步骤：
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述待富集的
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测细胞毒性t细胞的设备，其特征在于，所述设备包括：
2.如权利要求1所述的设备，其特征在于，如所述检测模块检测到t细胞为cx3cr1阳性、或cx3cr1和gpr56阳性t细胞，则输出模块输出：所述t细胞为细胞毒性t细胞。
3.一种鉴定细胞毒性t细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，如检测到所述t细胞为cx3cr1阳性、或cx3cr1和gpr56阳性t细胞，则所述t细胞为细胞毒性t细胞。
5.如权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘苹，程曼，
申请(专利权)人：上海美杰医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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