【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，具体涉及一种柽柳thmyc9基因及其在提高植物耐盐性中的应用。
技术介绍
1、植物在生长过程中会受到干旱、盐碱等多种非生物逆境胁迫的影响。盐胁迫是影响植物生长和发育的主要因素之一，随着全球气候变化和人类活动的影响，盐碱地的面积逐渐增加，这对农林业的产出和环境保护造成了严重影响。因此，研究植物的盐碱耐性对于充分利用植物资源和改良盐渍土地具有重要的意义。
2、在盐胁迫条件下，植物主要面临渗透压和离子毒性的双重压力。高盐浓度导致土壤溶液的渗透压升高，使得植物根系吸水困难，从而引发水分胁迫。此外，过量的钠离子(na+)和氯离子(cl-)会干扰植物的正常生理过程，影响其生长发育，甚至导致细胞损伤和死亡。为了应对盐胁迫，植物进化出了一系列适应机制，包括合成渗透调节物质(如甘油、脯氨酸等)以维持细胞内的水分平衡，激活抗氧化酶系统以清除自由基，以及通过根系调整离子吸收和排放等方式来减少有害离子的积累。此外，一些植物还通过转运蛋白和离子通道调节细胞膜的通透性，增强对盐分的耐受性。转录因子通过增强一些关键调控因子的作用来促进抗逆性，从根本上提高植物的抗逆性。因此，亟需开发一种提高植株耐盐性的基因。
技术实现思路
1、为开发一种提高植株耐盐性的基因，本专利技术提供了一种柽柳thmyc9基因及其在提高植物耐盐性中的应用。本专利技术提供的thmyc9基因在植株中的过表达有利于提高植株耐盐能力。
2、本专利技术提供了一种柽柳thmyc9基因，所述thmyc9基因
3、本专利技术提供的thmyc9基因在植株中的过表达有利于通过提高植株清除活性氧、降低植株细胞损伤程度和膜脂过氧化程度、提高过氧化物酶和超氧化物歧化酶含量以及降低活性氧积累，从而提高植株耐盐性，thmyc9基因无论在刚毛柽柳瞬时过表达或在拟南芥中过表达均能够表现出较强的耐盐能力。
4、本专利技术还提供了一种过表达载体，所述过表达载体由所述的thmyc9基因插入至pcm1307载体的多克隆位点中获得。
5、本专利技术还提供了一种重组细胞，所述重组细胞由所述的过表达载体转化感受态细胞所得。
6、进一步地，所述感受态细胞为大肠杆菌或农杆菌。
7、本专利技术还提供了所述的柽柳thmyc9基因、所述的过表达载体或所述的重组细胞在提高植物耐盐性中的应用。
8、进一步地，所述植物为柽柳或拟南芥。
9、进一步地，利用所述thmyc9基因、过表达载体或重组细胞构建转基因株系，从而使得thmyc9基因过表达，提高植物耐盐胁迫能力。
10、进一步地，所述thmyc9基因、过表达载体或重组细胞用于降低转基因株系的细胞损伤程度和膜脂过氧化程度、提高过氧化物酶和超氧化物歧化酶含量以及降低活性氧积累，从而提高柽柳植株耐盐性。
11、本专利技术还提供了一种提高柽柳耐盐性的方法，包括如下步骤：
12、构建过表达载体：利用所述的thmyc9基因插入至pcm1307载体的多克隆位点中获得pcm1307-thmyc9过表达载体；
13、将pcm1307-thmyc9过表达载体转化农杆菌eha105获得阳性克隆菌株，然后挑取单克隆在含有卡那霉素和利福平的液体培养基中培养获得转化液，然后通过瞬时转化方式转化柽柳幼苗，获得耐盐胁迫的转基因柽柳。
14、本专利技术还提供了一种提高拟南芥耐盐性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
15、构建过表达载体：利用所述的thmyc9基因插入至pcm1307-flag载体的多克隆位点中获得pcm1307-thmyc9过表达载体；
16、将pcm1307-thmyc9过表达载体转化农杆菌eha105获得阳性克隆菌株，挑取单克隆在含有卡那霉素和利福平的液体培养基中培养至od600＝0.8-1，离心后收集菌体并用蔗糖水重悬至od600＝0.8-1，加入silwet-l77获得侵染液；
17、将拟南芥地上部分全部浸没于侵染液后进行培养，种子成熟时收获耐盐胁迫的的转基因拟南芥种子。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
19、本专利技术利用thmyc9基因构建过表达载体，对柽柳进行瞬时转化，并在野生型拟南芥中实现稳定遗传转化。经过生理指标测定及染色分析实验结果显示，过表达thmyc9基因显著提高了转基因植株的耐盐性，具体表现为盐胁迫后过表达植株细胞损伤程度减弱，清除活性氧的能力提高，进而有效的提高了柽柳和拟南芥的耐盐能力。
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1.一种柽柳ThMYC9基因，其特征在于，所述ThMYC9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种过表达载体，其特征在于，所述过表达载体由权利要求1所述的ThMYC9基因插入至pCM1307载体的多克隆位点中获得。
3.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞由权利要求2所述的过表达载体转化感受态细胞所得。
4.根据权利要求3所述的重组细胞，其特征在于，所述感受态细胞为大肠杆菌或农杆菌。
5.一种权利要求1所述的柽柳ThMYC9基因、权利要求2所述的过表达载体或权利要求3所述的重组细胞在提高植物耐盐性中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物为柽柳或拟南芥。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，利用所述ThMYC9基因、过表达载体或重组细胞构建转基因株系，从而使得ThMYC9基因过表达，提高植物耐盐胁迫能力。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述ThMYC9基因、过表达载体或重组细胞用于降低转基因株系
9.一种提高柽柳耐盐性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.一种提高拟南芥耐盐性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种柽柳thmyc9基因，其特征在于，所述thmyc9基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，其编码的蛋白质序列如seq id no.2所示。
2.一种过表达载体，其特征在于，所述过表达载体由权利要求1所述的thmyc9基因插入至pcm1307载体的多克隆位点中获得。
3.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞由权利要求2所述的过表达载体转化感受态细胞所得。
4.根据权利要求3所述的重组细胞，其特征在于，所述感受态细胞为大肠杆菌或农杆菌。
5.一种权利要求1所述的柽柳thmyc9基因、权利要求2所述的过表达载体或权利要求3所述的重组细胞在提高植物耐盐性中的应用...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丹丹，王玉成，国会艳，石新新，王巾丹，赵世豪，詹硕，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：
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