【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化工，具体而言，涉及一种重组iv型胶原蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
1、胶原蛋白作为一种重要的结构蛋白，广泛存在于动物组织中。iv型胶原蛋白是基底膜的主要成分之一，在维持组织的结构和功能方面起着重要作用。传统的iv型胶原蛋白主要从动物组织中提取，存在着来源有限、可能携带病原体和批次间差异大等问题。
技术实现思路
1、本专利技术解决的问题是如何解决提取iv型胶原蛋白存在的来源有限、可能携带病原体和批次间差异大的问题。
2、为解决上述问题，本专利技术提供一种重组iv型胶原蛋白及其制备方法和应用。
3、第一方面，本专利技术提供了一种重组iv型胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
4、s1：通过重组iv型胶原蛋白的氨基酸序列seq id no：1得到密码子，进而获得目的基因，合成至表达载体上，得到质粒；
5、s2：将步骤s1得到的质粒转入表达宿主中，筛选阳性转化子，获得表达菌株；
6、s3：培养步骤s2中获得的表达菌株，表达目的蛋白，得到粗制的重组iv型胶原蛋白。
7、可选地，还包括步骤s4：分离纯化步骤s3得到的目的蛋白，得到重组iv型胶原蛋白。
8、可选地，步骤s4中通过盐析、超滤、色谱层析、等电点沉淀和膜分离方法中的一种或几种的组合进行分离纯化步骤s3得到的目的蛋白。
9、可选地，步骤s1中，氨基酸序列seq id no：1根据大肠杆菌密码子偏好优化后，通过pcr扩增
10、可选地，步骤s1中，目的基因合成至pkk223-3表达载体上，得到质粒pkk223-3-ivnc1。
11、可选地，步骤s2中，表达宿主为细菌宿主大肠杆菌de3感受态细胞、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或者真核宿主毕赤酵母、酿酒酵母、动物细胞、植物细胞。
12、可选地，步骤s3包括：
13、s31：将步骤s2中获得的表达菌株接种至添加氨苄抗生素的液体培养基中培养，得到种子液；
14、s32：取部分种子液，接种至液体培养基中，培养至od600＝0.6-0.8时，添加诱导剂，诱导10-12h后，离心收集菌体；
15、s33：将菌体置于缓冲液中，破碎细胞，离心收集处于上清液的表达目的蛋白，得到粗制的重组iv型胶原蛋白。
16、可选地，诱导剂为异丙基-β-d-硫代半乳糖苷、乳糖、半乳糖或甲醇。
17、第二方面，本专利技术提供了一种重组iv型胶原蛋白，采用如上任一项所述的重组iv型胶原蛋白的制备方法制成，所述重组iv型胶原蛋白的氨基酸序列为
18、svdhgflvtrhsqtiddpqcpsgtkilyhgysllyvqgnerahgqdlgtag
19、sclrkfstmpflfcninnvcnfasrndysywlstpepmpmsmapitgenirp
20、fisrcavceapamvmavhsqtiqippcpsgwsslwigysfvmhtsagaegs
21、gqalaspgscleefrsapfiechgrgtcnyyanaysfwlatiersemfkkptpstl kagelrthvsrcqvcmrrt(seq id no：1)。
22、第三方面，本专利技术提供了一种如上所述的重组iv型胶原蛋白在抗衰、抗炎和抵御皮肤热损伤领域的应用。
23、本专利技术的一种重组iv型胶原蛋白及其制备方法和应用的有益效果是：通过基因工程技术制备得到高纯度的重组iv型胶原蛋白，不受来源限制，不会携带病原体，重组iv型胶原蛋白纯度能够达到80％以上，基因工程技术制备结果稳定，多次制备结果能够做到几乎无差异。该重组iv型胶原蛋白具有良好的生物相容性和生物学活性，能够改善皮肤弹性和水分含量，减少皱纹产生，延缓皮肤衰老。此外，重组iv型胶原蛋白能显著下调炎症因子il-1α、il-6和pge2，减少炎症；还能通过上调热休克蛋白hsp32、hsp47和hsp70，减少热损伤；并且，在热损伤后，重组iv型胶原蛋白能够显著下调热损伤细胞的金属基质蛋白酶(mmp1和mmp3)的同时，还能显著促进一型胶原col1a1和三型胶原col3a1的基因表达，可见热损伤后重组iv型胶原蛋白也能抑制胶原降解同时还可以促进胶原分泌，改善皮肤弹性和水分含量，减少皱纹产生，延缓皮肤衰老。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，还包括步骤S4：分离纯化步骤S3得到的所述目的蛋白，得到所述重组IV型胶原蛋白。
3.根据权利要求2所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中通过盐析、超滤、色谱层析、等电点沉淀和膜分离方法中的一种或几种的组合进行分离纯化步骤S3得到的所述目的蛋白。
4.根据权利要求1所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，氨基酸序列SEQ ID NO：1根据大肠杆菌密码子偏好优化后，通过PCR扩增或者全基因合成，获得所述目的基因。
5.根据权利要求1所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述目的基因合成至pKK223-3表达载体上，得到质粒pKK223-3-IVNC1。
6.根据权利要求1所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述表达宿主为细菌宿主大肠杆菌DE3感受态细胞、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或者真核宿主
7.根据权利要求1所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括：
8.根据权利要求7所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷、乳糖、半乳糖或甲醇。
9.一种重组IV型胶原蛋白，其特征在于，采用如权利要求1-8任一项所述的重组IV型胶原蛋白的制备方法制成，所述重组IV型胶原蛋白的氨基酸序列为SVDHGFLVTRHSQTIDDPQCPSGTKILYHGYSLLYVQGNERAHGQDLGTAGSCLRKFSTMPFLFCNINNVCNFASRNDYSYWLSTPEPMPMSMAPITGENIRPFISRCAVCEAPAMVMAVHSQTIQIPPCPSGWSSLWIGYSFVMHTSAGAEGSGQALASPGSCLEEFRSAPFIECHGRGTCNYYANAYSFWLATIERSEMFKKPTPSTL KAGELRTHVS RCQVCMRRT(SEQ ID NO：1)。
10.一种如权利要求9所述的重组IV型胶原蛋白在抗衰、抗炎和抵御皮肤热损伤领域的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组iv型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的重组iv型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，还包括步骤s4：分离纯化步骤s3得到的所述目的蛋白，得到所述重组iv型胶原蛋白。
3.根据权利要求2所述的重组iv型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤s4中通过盐析、超滤、色谱层析、等电点沉淀和膜分离方法中的一种或几种的组合进行分离纯化步骤s3得到的所述目的蛋白。
4.根据权利要求1所述的重组iv型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，氨基酸序列seq id no：1根据大肠杆菌密码子偏好优化后，通过pcr扩增或者全基因合成，获得所述目的基因。
5.根据权利要求1所述的重组iv型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，所述目的基因合成至pkk223-3表达载体上，得到质粒pkk223-3-ivnc1。
6.根据权利要求1所述的重组iv型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中，所述表达宿主为细菌宿主大肠杆菌de3感受态细胞、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或者真核宿主毕赤酵母、酿酒酵...
【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，杜宇航，段志广，殷诗玉，张玉瑶，徐茹，严钰博，
申请(专利权)人：西安巨子生物基因技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。