【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病原体检测领域，具体涉及一种基于便携式血糖仪的牙龈卟啉单胞菌检测方法。
技术介绍
1、牙周病是由龈下菌斑引起的最常见的口腔疾病之一。牙周炎被称为成人牙齿缺失的“头号杀手”，与糖尿病、自身免疫性疾病、癌症等全身性疾病的发生发展密切相关。牙周病的临床诊断主要依靠口腔医生的临床检查，这是主观的，且缺乏定量标准。牙周病原体通过刺激机体免疫反应而引起局部炎症介质的过度表达被认为是牙周病临床症状发生的根本机制。牙龈卟啉单胞菌(pg)、牙列密螺旋体(td)和连翘拟杆菌(bf)被认为与牙周病密切相关。因此，牙周病原体的定量检测对牙周病的早期和及时干预、合理治疗、改善预后具有重要意义。
2、目前，许多分析方法已被用于牙周病原体的定量检测，如(i)基于细菌培养的检测，(ii)使用聚合酶链反应(pcr)和环介导等温扩增的dna检测，以及(iii)免疫学。然而，这些方法通常需要很长的时间来处理，缺乏足够的灵敏度和特异性，或需要复杂的引物设计和昂贵的设备和试剂。然而，现有的牙周病原体的定量检测方法大多不适合在复杂或特殊场合(例如床旁、椅旁、家中)进行快速、准确的检测，而且存在线性范围窄、检测限低(例如>103cfu/ml)等问题。
技术实现思路
1、第一方面，本专利技术提供了一种非诊断目的的牙龈卟啉单胞菌检测方法，其特征在于，所述方法包括：
2、s101将样本加入第一反应体系并孵育，获得第一混合物，所述第一反应体系包括第一核酸分子、第二核酸分子和适配体分子；所述适
3、s102将经修饰的基体电极与所述第一混合物接触后洗涤；
4、s103将洗涤后的经修饰的基体电极插入血糖仪；
5、s104获得血糖仪读数，进而获得所述样本中所述牙龈卟啉单胞菌的浓度；
6、其中，所述经修饰的基体电极经au@v4c3 mxene材料修饰并结合有特异性识别牙龈卟啉单胞菌的抗体和封闭剂。
7、在一些实施例中，所述au@v4c3 mxene材料的制备方法如下：
8、a)将v4c3 mxene粉末分散于有机碱性化合物后搅拌并离心，获得第一沉淀物；
9、在一些实施例中，所述v4c3 mxene粉末为多层v4c3 mxene。
10、在一些实施例中，在所述a)步骤中，所述搅拌的时间包括24小时。
11、在一些实施例中，在所述a)步骤中，所述离心的示例性方法包括以8500rpm离心5min。
12、在一些实施例中，所述有机碱性化合物包括四丙基氢氧化铵。
13、在一些实施例中，所述v4c3 mxene粉末可以通过将v4alc3粉末进行刻蚀后获得，本专利技术对此不做限制。
14、b)向所述第一沉淀物中加入第一溶剂后离心，得到单层v4c3 mxene悬浮液；需要说明的是，本专利技术通过采用有机碱性化合物，制备得到单层v4c3 mxene，避免了多层v4c3mxene的内部仍残留铝的问题的同时，使得金纳米颗粒能够更好地附着在单层v4c3 mxene上，克服了金纳米颗粒仅能附着在多层v4c3 mxene上下表面的问题。
15、在一些实施例中，所述第一溶剂包括ddh2o、超纯水、去离子水、注射用水、纯水中的一种或多种。
16、在一些实施例中，在所述b)步骤中，所述离心的示例性方法包括以3500rpm离心30min。
17、c)将kaucl4溶液和所述单层v4c3 mxene悬浮液混合并搅拌至溶液呈红色后，加入还原剂，获得第二沉淀物，即所述电极修饰材料；
18、在一些实施例中，所述单层v4c3 mxene悬浮液的浓度包括1–10mg/ml。在一些实施例中，所述单层v4c3 mxene悬浮液的浓度包括5mg/ml。
19、在一些实施例中，所述kaucl4溶液和所述单层v4c3 mxene悬浮液的浓度比包括0.30-0.45:1。经验证，通过控制上述浓度比，本专利技术制得的电极修饰材料的导电性显著提升。
20、在一些实施例中，所述还原剂用于将kaucl4进一步还原成金纳米颗粒。在一些实施例中，所述还原剂包括硼氢化钠。在一些实施例中，所述还原剂的浓度包括1m。在一些实施例中，所述还原剂与所述kaucl4溶液的体积比包括1:1。
21、在一些实施例中，所述还原剂的加入方式为逐滴滴加。
22、在一些实施例中，所述kaucl4溶液和所述单层v4c3 mxene悬浮液的浓度比包括0.38:1。
23、在一些实施例中，所述方法还包括将所述第二沉淀物洗涤置于所述第一溶剂重新分布。
24、在本专利技术中，au@v4c3 mxene材料不仅可以提高电极的电子转移效率，而且可以提高电极的活性比表面积，在提高电化学传感器的灵敏度方面显示出很强的优势。与v4c3mxene相比，本专利技术提供的au@v4c3 mxene材料的电导率提高了4-6倍。此外，本专利技术提供的au@v4c3 mxene材料具有极佳的稳定性，原位沉积于v4c3 mxene的金纳米颗粒不会进一步溶解、脱落，适用于电极修饰。此外，au@v4c3 mxene材料还增加了基体电极的可结合性，使得抗体等大分子物质能够通过所述电极修饰材料的金纳米颗粒结合在基体电极上。
25、在一些实施例中，所述基体电极包括玻碳电极或裸金电极。
26、在一些实施例中，所述基体电极包括血糖芯片。
27、在一些实施例中，所述封闭剂包括牛血清白蛋白。本专利技术中封闭剂的加入，使得所述au@v4c3 mxene材料的无活性位点可以被封闭。
28、在一些实施例中，所述经修饰的基体电极的制备方法包括：将所述au@v4c3 mxene溶液与所述基体电极混合后干燥。在一些实施例中，所述au@v4c3 mxene溶液的浓度包括1–10mg/ml。在一些实施例中，所述au@v4c3 mxene溶液的浓度包括5mg/ml。在一些实施例中，为使得所述au@v4c3 mxene材料能够更好地附着在所述基体电极上，所述au@v4c3mxene溶液还可以包括壳聚糖。在一些实施例中，所述壳聚糖的浓度包括1–10mg/ml。
29、在一些实施例中，所述特异性识别牙龈卟啉单胞菌的抗体和所述封闭剂通过先后与所述经修饰的基体电极孵育的方式，与所述经修饰的基体电极结合。
30、在一些实施例中，所述特异性识别牙龈卟啉单胞菌的抗体的浓度包括10-100μg/ml。在一些实施例中，所述特异性识别牙龈卟啉单胞菌的抗体的浓度包括50μg/ml。在一些实施例中，所述特异性识别牙龈卟啉单胞菌的抗体与所述经修饰的基体电极的体积比包括5:1。
31、在一些实施例中，所述样本包括唾液样本和/或龈沟液样本。...
【技术保护点】
1.一种非诊断目的的牙龈卟啉单胞菌检测方法，其特征在于，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Au@V4C3 MXene材料的制备方法如下：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样本包括唾液样本和/或龈沟液样本。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，所述第二核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述适配体分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S101步骤中所述孵育的时间包括20–60min。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二核酸分子与海藻酸盐偶联。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样本的体积包括10–200μL。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第一混合物中所述第一核酸分子、所述第二核酸分子和所述适配体分子的浓度包括1:1:1至3:3:1。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基体电极
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S104步骤还包括绘制所述血糖仪读数与所述牙龈卟啉单胞菌的浓度的标准曲线并获得所述血糖仪读数与所述牙龈卟啉单胞菌的浓度的线性方程，基于所述线性方程，获得所述样本中所述牙龈卟啉单胞菌的浓度。
...【技术特征摘要】
1.一种非诊断目的的牙龈卟啉单胞菌检测方法，其特征在于，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述au@v4c3 mxene材料的制备方法如下：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样本包括唾液样本和/或龈沟液样本。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一核酸分子的核苷酸序列如seq idno:1所示，所述第二核酸分子的核苷酸序列如seq id no:2所示，所述适配体分子的核苷酸序列如seq id no:3所示。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s101步骤中所述孵育的时间包括20–60min。
6.如权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋锦璘，神华尉，付雅菲，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：
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