本发明专利技术属于药物分析技术领域，具体涉及分离检测利福喷汀中间体Z<subgt;1</subgt;及其杂质的方法。该杂质包括杂质SM<subgt;1d</subgt;、杂质Z<subgt;1b</subgt;、杂质Z<subgt;1c</subgt;、杂质SM<subgt;1b</subgt;及杂质SM<subgt;1</subgt;中的一种或多种。该方法包括：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，采用流动相A和流动相B进行线性梯度洗脱，并进入检测器进行检测，流动相A由磷酸二氢钠和乙腈按体积比55‑65:45‑35组成；流动相B由磷酸二氢钠和乙腈按体积比65‑75：35‑25组成；最后根据色谱图，采用加校正因子的主成分自身对照法和/或面积归一化法计算各杂质含量。本发明专利技术方法具有分离度好、耐用性好、灵敏度高、重现性好的特点。
1、利福喷汀是aventis pharma ag开发的一种大环内酰胺抗生素，其化学名为3-[n-(4-环戊基-1-哌嗪基)亚胺甲基]利福霉素，分子式为c47h64n4o12，结构式如式ⅶ所示。作为半合成利福霉素类，利福喷汀对结核杆菌、麻风杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感杆菌均有抗菌作用。
3、利福喷汀中间体z1是利福喷汀合成过程中的关键中间体。经研究发现，利福喷汀中间体z1在制备过程中容易产生5种工艺杂质：杂质sm1d、杂质z1b、杂质z1c、杂质sm1b和杂质sm1。对于这些杂质，不论是在原料药还是制剂中均需要进行严格控制。
4、然而，目前缺少可以快速同时分离上述5种杂质的方法。现有技术中，cn112730657a专利公开了一种利福喷丁含量的分析检测方法，其通过高效液相色谱进行测定，色谱柱选用ymc-pack c8，流动相由水相和有机相组成，按体积分数设置等度洗脱；其中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈或其混合物，水相包括水、缓存盐、高氯酸钠和酸碱试剂；最后采用外标法进行定量分析。该方法无法分离利福喷汀中间体z1及杂质sm1d、杂质z1b、杂质z1c、杂质sm1b和杂质sm1。
>1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种基于高效液相色谱法分离利福喷汀中间体z1及其杂质的方法，该方法可以在较短的时间之内完成多种物质的分离。2、为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
3、基于高效液相色谱法分离利福喷汀中间体z1及其杂质的方法，所述利福喷汀中间体z1和所述杂质共同组成组合物，所述杂质包括杂质sm1d、杂质z1b、杂质z1c、杂质sm1b及杂质sm1中的任一种或多种；
4、所述高效液相色谱法中，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，采用流动相a和流动相b进行线性梯度洗脱；所述流动相a和流动相b均为磷酸二氢钠和乙腈的混合溶液；所述流动相a中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为55-65:45-35；所述流动相b中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为65-75：35-25；
5、所述利福喷汀中间体z1及其杂质的结构式如下：
6、
7、被分离后的物质可用于参与下一步生产中。
8、上述杂质可以按照多种方式排列组合。
9、例如，组合方式1：杂质sm1d、杂质z1b和杂质z1c。
10、又如，组合方式2:杂质sm1d、杂质sm1b。
11、再如，组合方式3：杂质sm1d、杂质z1b、杂质z1c、杂质sm1b和杂质sm1。
12、在此不穷举所有排列组合方式。理论上，本方法的分离、鉴定和/或含量检测的物质上限为n(为数量)种时，自然可以检测1-n种物质。
13、进一步，所述流动相a中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为58-62:42-38；所述流动相b中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为68-72：32-28；所述磷酸二氢钠的浓度为0.01～0.03mol/l，ph为6.0±0.5。例如，所述流动相a中磷酸二氢钠和乙腈的体积比为62:38(图9)；或所述流动相a中磷酸二氢钠和乙腈的体积比为58:42(图10)。
14、作为优选，所述流动相a中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为60:40；所述流动相b中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为70：30。
15、作为优选，所述磷酸二氢钠的浓度为0.015～0.025mol/l。例如，磷酸二氢钠的浓度为0.015mol/l(图15)；或磷酸二氢钠的浓度为0.025mol/l(图16)。
16、作为优选，所述磷酸二氢钠的ph为5.8～6.2。例如，磷酸二氢钠的ph为5.8(图13)；或磷酸二氢钠的ph为6.2(图14)。
17、作为最优选，所述磷酸二氢钠的浓度为0.02mol/l。
18、作为最优选，所述磷酸二氢钠的ph为6.0±0.1。
19、进一步，采用浓度为2mol/l的氢氧化钠调节磷酸二氢钠的ph值。
20、进一步，所述线性梯度洗脱的程序如下：
21、在0分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为90-100：10-0；
22、在20分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为40-60:60-40；
23、在30分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为0-10:100-90；
24、在40分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为0-10:100-90；
25、在40.1分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为90-100：10-0；
26、在50分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为90-100：10-0。
27、作为优选，所述线性梯度洗脱的程序如下：
28、在0分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为100：0；
29、在20分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为50:50；
30、在30分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为0:100；
31、在40分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为0:100；
32、在40.1分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为100：0；
33、在50分钟，设置所述流动相a和所述流动相b的体积比为100：0。
34、进一步，流速为0.8～1.2ml/min；柱温为20-30℃。
35、作为优选，流速为0.9～1.1ml/min；柱温为23-27℃。例如，流速为0.9ml/min(图7)；或流速为1.1ml/min(图8)。又如，柱温为23℃(图11)；或柱温为27℃(图12)。
36、作为最优选，流速为1.0ml/min；柱温为25℃。
37、作为优选，所述色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm。
38、作为最优选，所述色谱柱选择hypersil gold c18(250×4.6mm，5μm)。
39、作为优选，进样量为5μl。
40、作为优选，运行时间为50分钟。
41、本专利技术的目的之二在于提供一种鉴别利福喷汀中间体z1及其杂质的方法，该方法可以在较短的时间之内完成多种物质的鉴定。
42、为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
43、鉴别利福喷汀中间体z1及其杂质的方法，采用前述分离方法分离所述组合物，并进入检测器进行检测，得到色谱图；通过比较检测品与对照品的色谱图谱特征，来确定检测品中是否含有利福喷汀中间体z1及其杂质。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于高效液相色谱法分离利福喷汀中间体Z1及其杂质的方法，其特征在于，所述利福喷汀中间体Z1和所述杂质共同组成组合物，所述杂质包括杂质SM1d、杂质Z1b、杂质Z1c、杂质SM1b及杂质SM1中的任一种或多种；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为58-62:42-38；所述流动相B中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为68-72：32-28；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线性梯度洗脱的程序如下：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流速为0.8～1.2mL/min；柱温为20-30℃。
5.鉴别利福喷汀中间体Z1及其杂质的方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的方法分离所述组合物，并进入检测器进行检测，得到色谱图；通过比较检测品与对照品的色谱图谱特征，来确定检测品中是否含有利福喷汀中间体Z1及其杂质。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为254±10nm。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，按照相对保留时间的先后顺序，可以鉴定出组合物中的各组份，所述组合物的组份按照升序依次为：杂质SM1d、杂质Z1b、杂质Z1c、杂质SM1b、利福喷汀中间体Z1、杂质SM1。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，以利福喷汀中间体Z1为参照峰；相对保留时间为0.47，判定为杂质SM1d；相对保留时间为0.54，判定为杂质Z1b；相对保留时间为0.64，判定为杂质Z1c；相对保留时间为0.86，判定为杂质SM1b；相对保留时间为1.14，判定为杂质SM1；各组份的相对保留时间各自在1％范围内波动。
9.测定利福喷汀中间体Z1及其杂质含量的方法，其特征在于，采用权利要求5-8任一项所述的方法分离并鉴别利福喷汀中间体Z1及其杂质，得到色谱图；根据所得色谱图，采用加校正因子的主成分自身对照法计算杂质SM1d、杂质Z1b和杂质Z1c的含量；采用面积归一化法计算杂质SM1b、杂质SM1的含量。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，样品配制溶剂为乙腈。
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【技术特征摘要】
1.基于高效液相色谱法分离利福喷汀中间体z1及其杂质的方法，其特征在于，所述利福喷汀中间体z1和所述杂质共同组成组合物，所述杂质包括杂质sm1d、杂质z1b、杂质z1c、杂质sm1b及杂质sm1中的任一种或多种；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相a中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为58-62:42-38；所述流动相b中，磷酸二氢钠和乙腈的体积比为68-72：32-28；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线性梯度洗脱的程序如下：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流速为0.8～1.2ml/min；柱温为20-30℃。
5.鉴别利福喷汀中间体z1及其杂质的方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的方法分离所述组合物，并进入检测器进行检测，得到色谱图；通过比较检测品与对照品的色谱图谱特征，来确定检测品中是否含有利福喷汀中间体z1及其杂质。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为254±10nm。
【专利技术属性】
技术研发人员：夏榕娇，周云川，
申请(专利权)人：重庆华邦胜凯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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