【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种基于尿液样本检测的鉴别膀胱癌的组合物及其用途。
技术介绍
1、膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，目前临床上将膀胱镜检查及组织病理学活检作为诊断膀胱肿瘤的“金标准”。但上述检查为有创伤性检查，因此，寻求一种对患者创伤小、检测方便、具有高度特异性和敏感性的分子生物学标记物，行膀胱癌辅助诊断，对膀胱癌的早期诊断和随访检测都具有重要的临床意义。
2、液体活检通常被看作是体外分子诊断的一种延伸，其将样本由相关组织延伸至血液、尿液、脑积液等液体，具有取样无创、方便快捷、风险较小的特点。不仅如此，液体活检可以实现连续检测，对于癌症的早期诊断、疾病进展监控以及癌症治疗过程中的疗效评估具有重要的意义。
3、微小rna(microrna，mirna)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链rna分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。研究表明，作为基因表达的关键调节因子，mirna在癌症的发生发展中扮演重要的角色。若能够找到膀胱癌患者尿液样本中具有稳定表达差异的mirna，就能够用于膀胱癌患者鉴别诊断。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种基于尿液样本检测的鉴别膀胱癌的组合物及其用途。
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案具体如下：
3、基于尿液样本检测的鉴别膀胱癌的组合物，该组合物是通过检测尿液样本中hsa-mir-423-5p、hsa-mir-155-5p、hsa-
4、所述组合物包括：特异性逆转录茎环引物、特异性检测正向引物和特异性检测探针和通用反向引物；
5、用于检测尿液样本中hsa-mir-423-5p的表达时：
6、所述特异性逆转录茎环引物的核苷酸序列如seq id no.1；
7、所述特异性检测正向引物的核苷酸序列如seq id no.5；
8、所述特异性检测探针的核苷酸序列如seq id no.6；
9、所述通用反向引物的核苷酸序列如seq id no.13；
10、用于检测尿液样本中hsa-mir-155-5p的表达时：
11、所述特异性逆转录茎环引物的核苷酸序列如seq id no.2；
12、所述特异性检测正向引物的核苷酸序列如seq id no.7；
13、所述特异性检测探针的核苷酸序列如seq id no.8；
14、所述通用反向引物的核苷酸序列如seq id no.13；
15、用于检测尿液样本中hsa-mir-590-5p的表达时：
16、所述特异性逆转录茎环引物的核苷酸序列如seq id no.3；
17、所述特异性检测正向引物的核苷酸序列如seq id no.9；
18、所述特异性检测探针的核苷酸序列如seq id no.10；
19、所述通用反向引物的核苷酸序列如seq id no.13。
20、在上述技术方案中，所述组合物还包括：
21、用于检测尿液样本中的内参基因u68时：
22、相应的特异性逆转录茎环引物的核苷酸序列如seq id no.4；
23、相应的特异性检测正向引物的核苷酸序列如seq id no.11；
24、相应的特异性检测探针的核苷酸序列如seq id no.12；
25、相应的通用反向引物的核苷酸序列如seq id no.13。
26、在上述技术方案中，所述组合物还包括阳性质控品和阴性质控品。
27、在上述技术方案中，所述阳性质控品为人工合成单链hsa-mir-423-5p mimics、hsa-mir-155-5p mimics、hsa-mir-590-5p mimics和人工合成内参基因u68的rna mimics的混合物；
28、hsa-mir-423-5p mimics的核苷酸序列如seq id no.14；
29、hsa-mir-155-5p mimics的核苷酸序列如seq id no.15；
30、hsa-mir-590-5p mimics的核苷酸序列如seq id no.16；
31、内参基因u68的rna mimics的核苷酸序列如seq id no.17。
32、在上述技术方案中，所述阴性质控品为人工合成单链cel-mir-39-3p mimics，其核苷酸序列如seq id no.18。
33、在上述技术方案中，所述组合物通过检测尿液样本中hsa-mir-423-5p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-590-5p中的一种或者多种的表达，并结合二项逻辑回归模型，对膀胱癌行辅助判断。
34、用于鉴别膀胱癌的试剂盒，所述试剂盒包括上述组合物。
35、在上述技术方案中，所述试剂盒还包括：microrna逆转录反应液，其主要成分为：rna逆转录酶、5×缓冲液、0.1m dtt、dntps、rna酶抑制剂。
36、在上述技术方案中，所述试剂盒还包括：pcr反应液，其主要成分为dna聚合酶、kcl、mgcl2、tris-hcl、dntps。
37、在上述技术方案中，所述试剂盒还包括：50×rox reference dye、无核酸酶水。
38、本专利技术的有益效果是：
39、(1)本专利技术的组合物可以检测尿液样本中hsa-mir-423-5p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-590-5p表达量的变化，而该表达量的变化与膀胱癌密切相关。因此通过检测尿液样本中hsa-mir-423-5p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-590-5p的表达，并结合二项逻辑回归模型，对膀胱癌进行辅助判断，具有较高的灵敏度和特异性，可以提高膀胱癌鉴别的准确性。
40、(2)本专利技术通过实时荧光定量pcr检测，计算hsa-mir-423-5p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-590-5p与内参基因u68检测循环数(ct值)差值dct来求得每个膀胱癌相关标记物的相对定量值，计算综合评估值，并通过比较综合评估值与临界值判断膀胱癌。该检测方法无需电泳、杂交等操作步骤，降低了假阳性，减少了污染，操作简单。
41、(3)本专利技术的组合物，设置有内参基因u68，可以有效避免漏检及判定样本的质量；设置有阳性质控品，若阳性质控品检测呈阳性结果，说明检测体系工作正常，不会出现假阴性结果及漏检；设置有阴性质控品，若阴性质控检测呈阴性结果，说明检测体系工作正常；这样的设计使得检测方法严谨，有效避免漏检、错检的可能。
42、(4)本专利技术的试剂盒，检测对象为尿液样本，具有样本用量少、取样无创、方便快捷、风险较小等特点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.基于尿液样本检测的鉴别膀胱癌的组合物，其特征在于，该组合物是通过检测尿液样本中hsa-miR-423-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-590-5p中的一种或者多种的表达鉴别膀胱癌；
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括：
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括阳性质控品和阴性质控品。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述阳性质控品为人工合成单链hsa-miR-423-5p mimics、hsa-miR-155-5p mimics、hsa-miR-590-5p mimics和人工合成内参基因U68的RNA mimics的混合物；
5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述阴性质控品为人工合成单链cel-miR-39-3p mimics，其核苷酸序列如SEQ ID NO.18。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物通过检测尿液样本中hsa-miR-423-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-5
7.用于鉴别膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-5任意一项所述的组合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：microRNA逆转录反应液，其主要成分为：RNA逆转录酶、5×缓冲液、0.1M DTT、dNTPs、RNA酶抑制剂。
9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：PCR反应液，其主要成分为DNA聚合酶、KCl、MgCl2、Tris-HCl、dNTPs。
10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：50×ROXReference Dye、无核酸酶水。
...【技术特征摘要】
1.基于尿液样本检测的鉴别膀胱癌的组合物，其特征在于，该组合物是通过检测尿液样本中hsa-mir-423-5p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-590-5p中的一种或者多种的表达鉴别膀胱癌；
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括：
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括阳性质控品和阴性质控品。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述阳性质控品为人工合成单链hsa-mir-423-5p mimics、hsa-mir-155-5p mimics、hsa-mir-590-5p mimics和人工合成内参基因u68的rna mimics的混合物；
5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述阴性质控品为人工合成单链cel-mir-39-3p mimics，其核苷酸序列如seq id no.18。
6...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。