【技术实现步骤摘要】
本专利技术属药物制备领域，具体涉及一种贻贝黏蛋白的提取纯化方法。
技术介绍
1、贻贝黏蛋白是由海洋贻贝足丝腺分泌的黏性蛋白质，分子量分布为10～100kda，含有丰富的多巴基团，这些基团赋予了其强大的黏附性能和生物活性。这种蛋白质能够有效地黏附在各种固体表面上，包括无机和有机表面，这使得它在表面化学、生物医学和海洋工程等领域具有广泛的应用。在生物医学领域，贻贝黏蛋白因其抗炎、抗氧化、促进细胞贴壁爬行和创面愈合等功效而被广泛应用。
2、目前天然贻贝黏蛋白的提取纯化，是使用醋酸联合变性剂(尿素、盐酸胍等)进行组织匀浆、分离纯化得到。然而，这种传统方法普遍存在着提取得率低，得到的贻贝黏蛋白由于分子结构中氨基酸残基的电荷、亲水/疏水特性，导致其与外用涂敷类护肤产品、医用敷料类产品中阴离子高分子成分存在配伍禁忌。有报道为避免配伍过程中出现物理性或化学性的相互作用，影响产品的功效，使用碱类物质将配伍后的沉淀通过调节消除，但经过调节后的贻贝黏蛋白与阴离子材料的复合物的结构特征是否完全恢复原始的状态，并发挥其功能，尚未有试验数据的支持。因此有必要提供一种贻贝黏蛋白得率高，同时不会与阴离子高分子成分存在配伍禁忌的贻贝黏蛋白制备方法。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种贻贝黏蛋白的提取纯化方法，包括如下步骤：
2、1)取贻贝足腺，加提取液-1浸泡，均浆，沉淀，取沉淀物加提取液-2重悬，均浆，离心过滤，取滤液，得提取物；
3、2)取步骤1)所得
4、所述提取液-1是含50～150mm中性缓冲盐、20～30mm edta、0.5～1.5m氯化钠、0.5～1.5mm苯甲磺酰氟、5～15mm n-乙基马来酰亚胺、25～75mm抗坏血酸的水溶液；
5、所述提取液-2是含1～10％酸、4～10m尿素、25～75mm抗坏血酸、20～50mm edta、5～15mm egta、0.5～1.5mm苯甲磺酰氟、5～15mm n-乙基马来酰亚胺、10～30mm谷胱甘肽和0.005～0.015％triton x-100的水溶液。
6、进一步地，所述提取液-1是含50mm中性缓冲盐、25mm edta、1m氯化钠、1mm苯甲磺酰氟、10mm n-乙基马来酰亚胺、50mm抗坏血酸的水溶液。
7、更进一步地，所述中性缓冲盐包括磷酸钠盐、醋酸盐、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、硼酸钠盐、碳酸钠盐，优选三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。
8、进一步地，所述提取液-2是含5％酸、8m尿素、50mm抗坏血酸、25mm edta、10mmegta、1mm苯甲磺酰氟、10mm n-乙基马来酰亚胺、20mm谷胱甘肽和0.01％triton x-100的水溶液。
9、更进一步地，所述酸包括柠檬酸、醋酸，优选醋酸。
10、进一步地，步骤1)所述贻贝足丝与提取液-1的质量体积比为1g：5～20ml；所述贻贝足腺包括贻贝足丝和/或足丝腺体；
11、所述浸泡的时间为30～120分钟；
12、所述均浆的转速5000-20000rpm，时间5～30分钟；
13、所述沉淀物与提取液-2的质量体积比为1g：5～7.5ml；
14、所述离心的速度10000g以上；
15、所述过滤是用5～100微米滤纸和/或0.5～5微米滤芯过滤。
16、进一步地，步骤2)所述纯化的方法为透析法；
17、所述透析法是提取物置于透析袋内，用透析液进行透析，取透析后袋内溶液过滤，收集滤液，即可；
18、所述透析液由1#～5#透析液组成；每一种透析液至少透析两次，每次的透析时间大于5个小时；
19、所述1#透析液是含3～7％醋酸、6m尿素和辅助成分的水溶液；2#透析液是含3～7％醋酸、4m尿素和辅助成分的水溶液；3#透析液是含3～7％醋酸、2m尿素和辅助成分的水溶液；4#透析液是含3～7％醋酸和辅助成分的水溶液；5#透析液是含0.5～1.5％柠檬酸和辅助成分的水溶液；
20、所述透析液中的辅助成分为5～15mm edta、6～10mm egta、0.5～1.5mm苯甲磺酰氟、10～30mm n-乙基马来酰亚胺、0.005～0.015％triton x-100。
21、更进一步地，所述提取物与透析液的体积比为1：200～1000；
22、所述1#透析液是含5％醋酸、6m尿素和辅助成分的水溶液；2#透析液是含5％醋酸、4m尿素和辅助成分的水溶液；3#透析液是含5％醋酸、2m尿素和辅助成分的水溶液；4#透析液是含5％醋酸和辅助成分的水溶液；5#透析液是含1％柠檬酸和辅助成分的水溶液；
23、所述透析液中的辅助成分为10mm edta、8mm egta、1mm苯甲磺酰氟、20mm n-乙基马来酰亚胺、0.01％ triton x-100；
24、所述过滤是用0.5 -5微米的聚醚砜材质滤芯进行过滤。
25、进一步地，步骤2)所述纯化的方法为冲洗法；
26、所述冲洗法是提取物置于切向流系统中，用冲洗液冲洗，取冲洗后系统中溶液，即可；
27、所述冲洗液由冲洗液-1和冲洗液-2组成；冲洗液-1冲洗1～6h，再用冲洗液-2冲洗0.5～3h；
28、所述冲洗液-1是含3～8％醋酸、2～5m尿素和辅助成分的水溶液，冲洗液-2是含0.5～1.5％柠檬酸、10～30mm谷胱甘肽和辅助成分的水溶液；
29、所述冲洗液中的辅助成分为5～15mm的edta、6～10mm的egta、0.5～1.5mm的苯甲磺酰氟、15～25mm的n-乙基马来酰亚胺、0.03～0.08％triton x-100。
30、更进一步地，所述切向流系统中滤膜为聚醚砜膜、聚偏氟乙烯膜或聚酰胺膜；
31、所述提取物与冲洗液的体积比为1：2～20；
32、所述冲洗液-1是含5％醋酸、3m尿素和辅助成分的水溶液，冲洗液-2是含1％柠檬酸、20mm谷胱甘肽和辅助成分的水溶液；
33、所述冲洗液中的辅助成分为10mm的edta、8mm的egta、1mm的苯甲磺酰氟、20mm的n-乙基马来酰亚胺、0.05％triton x-100。
34、本专利技术最后提供了一种贻贝黏蛋白提取物，它是按照前述提取纯化方法制备而成。
35、本专利技术贻贝黏蛋白的提取纯化方法，通过特定的提取液提取，再以特定的纯化方法得到的贻贝黏蛋白，其中蛋白和多巴含量高，且能与阴离子高分子成分卡波姆、透明质酸钠、羧甲基纤维素钠等药物辅料配伍，用于药品或护肤品的制备，应用前景广泛。
36、显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
37、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种贻贝黏蛋白的提取纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：所述提取液-1是含50mM中性缓冲盐、25mM EDTA、1M氯化钠、1mM苯甲磺酰氟、10mM N-乙基马来酰亚胺、50mM抗坏血酸的水溶液。
3.根据权利要求2所述的提取纯化方法，其特征在于：所述中性缓冲盐包括磷酸钠盐、醋酸盐、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、硼酸钠盐、碳酸钠盐，优选三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。
4.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：所述提取液-2是含5％酸、8M尿素、50mM抗坏血酸、25mM EDTA、10mM EGTA、1mM苯甲磺酰氟、10mM N-乙基马来酰亚胺、20mM谷胱甘肽和0.01％Triton X-100的水溶液。
5.根据权利要求4所述的提取纯化方法，其特征在于：所述酸包括柠檬酸、醋酸，优选醋酸。
6.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：步骤1)所述贻贝足丝与提取液-1的质量体积比为1g：5～20mL；所述贻贝足腺包括贻贝足丝和/或足丝腺体；
7.
8.根据权利要求7所述的提取纯化方法，其特征在于：所述提取物与透析液的体积比为1：200～1000；
9.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：步骤2)所述纯化的方法为冲洗法；
10.一种贻贝黏蛋白提取物，其特征在于：它是按照权利要求1～9任一项所述提取纯化方法制备而成。
...【技术特征摘要】
1.一种贻贝黏蛋白的提取纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：所述提取液-1是含50mm中性缓冲盐、25mm edta、1m氯化钠、1mm苯甲磺酰氟、10mm n-乙基马来酰亚胺、50mm抗坏血酸的水溶液。
3.根据权利要求2所述的提取纯化方法，其特征在于：所述中性缓冲盐包括磷酸钠盐、醋酸盐、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、硼酸钠盐、碳酸钠盐，优选三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。
4.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：所述提取液-2是含5％酸、8m尿素、50mm抗坏血酸、25mm edta、10mm egta、1mm苯甲磺酰氟、10mm n-乙基马来酰亚胺、20mm谷胱甘肽和0.01％triton x-10...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡博志，郑宏宇，余娇，兰增金，
申请(专利权)人：蓝佳堂生物医药福建有限公司，
类型：发明
国别省市：
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