【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于防治acs后心室重构，尤其涉及亚油酰肉碱在筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物中的应用以及筛选方法和药物。
技术介绍
1、急性冠脉综合征(acs)是由急性心肌缺血引起的一组临床综合征，acs后发生的心室重构是心力衰竭(hf)的主要原因之一。对适应性重塑和不良重塑的调节是防治acs后心室重构的关键，适应性重塑和不良重塑之间的平衡是目前防治acs后心室重构的新治疗靶点。
2、先天免疫反应是适应性重塑和不良重塑之间的重要调节因子，包括三个关键阶段：促炎期、抗炎修复期和成熟期。
3、单核细胞(mo)在心室重塑过程中的促炎期和抗炎修复期均发挥重要作用，研究表明，acs患者外周血中高水平的促炎型mo和促炎期延长及左心室功能恢复障碍有关。因此，发现反映acs患者pci后促炎期延长的物质，找到抑制促炎型mo的高水平的方法对抑制acs后促炎期延长和防治acs后心室重构十分重要。目前关于平衡acs后先天免疫反应中促炎期和抗炎修复期的研究并未转化为心肌缺血损伤的有效的临床治疗。寻找可平衡acs后先天免疫反应中促炎期和抗炎修复期，可调节acs患者pci后促炎期延长的药物将为抑制acs后促炎期延长和防治acs后心室重构提供新的防治靶点。
技术实现思路
1、针对以上技术问题，本专利技术提供亚油酰肉碱在筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物中的应用以及筛选方法和药物。本专利技术首次提出将亚油酰肉碱用于筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：
3、本专利技术第一方面提供亚油酰肉碱在筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物中的应用。
4、本专利技术通过研究首次发现acs患者pci后血浆中亚油酰肉碱与促炎期延长和能量代谢紊乱中的脂肪酸代谢障碍有关，其含量可反映心肌缺血损伤程度，并且会加剧缺氧/复氧对心肌细胞的活性抑制。因此，亚油酰肉碱可用于筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物。
5、本专利技术第二方面一种筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物的方法，具体包括以下步骤：
6、s1、将心肌细胞与待筛选药物共同培养8～12h；
7、s2、将培养基更换为含有亚油酰肉碱和待筛选药物的无血清无糖dmem培养基进行缺氧培养至少12h；
8、s3、将培养基更换为含有亚油酰肉碱和待筛选药物的完全dmem培养基，复氧培养4～6h后，检测细胞活性，根据细胞活性筛选出显著改善心肌细胞活性的药物，即为对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物。
9、本专利技术基于促炎期和抗炎修复期之间复杂的平衡关系，提供了上述通过细胞逆向筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物的方法，筛选出的药物可用以调节mo的极化、抑制促炎期延长，进而减轻acs后心脏的不良重塑，促进心功能的有效恢复。
10、其中，“显著改善”是指使细胞活性的数值产生显著差异(如p<0.05)。
11、优选地，所述无血清无糖dmem培养基中亚油酰肉碱的含量为20μmol/l。
12、优选地，所述心肌细胞为h9c2心肌细胞。
13、优选地，所述缺氧培养的时间为12h。
14、优选地，所述复氧培养的时间为4h。
15、优选地，s3中检测细胞活性的方法可采用cck-8法。示例性地，可按以下操作进行细胞活性检测：s3中复氧培养完成后，将原含药血清吸弃，重新加入含有10％cck-8试剂的完全培养基，在37℃恒温避光孵育1～2h，检测od值。根据od值筛选改善心肌细胞活性的药物。
16、本专利技术第三方面提供了上述方法在筛选对acs患者pci后促炎期延长具有改善作用的中药活性成分中的应用。
17、利用上述方法以及亚油酰肉碱加剧缺氧/复氧对心肌细胞损伤的模型，能够筛选出抑制亚油酰肉碱加剧缺氧/复氧对心肌细胞损伤、可显著改善缺氧/复氧对心肌细胞损伤的中药活性成分。
18、本专利技术第四方面提供了一种对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物，所述药物中含有丹酚酸b、隐丹参酮、丹参酮ⅱa、丹酚酸c、丹酚酸f、积雪草酸中的至少一种。以上6种活性成分具有显著改善亚油酰肉碱加剧缺氧/复氧心肌细胞损伤的作用(p<0.05)。
19、本专利技术第五方面提供了丹参(sm)提取物在制备改善acs患者pci后促炎期延长的药物中的应用。
20、优选地，所述丹参提取物的制备方法为：将丹参饮片以50％～70％v/v乙醇水溶液回流提取，将所得提取液进行干燥，即得。进一步优选地，所述乙醇水溶液的浓度为60％v/v。
21、以该制备方法制得的丹参提取物中含有上述6种活性成分中的5种，能显著改善亚油酰肉碱对缺氧/复氧心肌细胞的活性抑制，并能提高超氧化物歧化酶(sod)活性，降低丙二醛(mda)含量，改善亚油酰肉碱对缺氧/复氧心肌细胞的脂质过氧化损伤，对亚油酰肉碱加剧缺氧/复氧对心肌细胞的损伤具有治疗潜力。经过对mi/ri小鼠模型的研究发现，丹参提取物能够使小鼠左室射血分数(lvef)和左心室短轴缩短率(lvfs)显著升高，左心室舒张末期内径(lvid,d)和左心室收缩末期内径(lvid,s)显著降低，剂量依赖性地改善mi/ri小鼠的心功能。4g/kg和2g/kg的丹参提取物可明显减轻mi/ri小鼠心肌组织的炎性浸润，改善心肌纤维化。通过代谢差异物和通路富集分析，发现丹参提取物可通过改善亚油酰肉碱积累等促进脂肪酸氧化、抑制糖酵解等调节mi/ri小鼠的代谢紊乱；能提高mi/ri小鼠的sod活性，降低mda含量，改善脂质过氧化损伤。并且，丹参提取物还可抑制mi/ri小鼠心肌中il-6、il-1β、tnf-α、ifn-γ等促炎因子和gm-csf、mcp-1/ccl2、mcp-3/ccl7等促炎型mo相关趋化因子的表达，从而抑制mo向促炎型极化，抑制acs后促炎期延长，调节先天免疫反应中促炎期和抗炎修复期的平衡。
22、更优选地，所述丹参提取物的制备方法为：将丹参饮片以60％v/v乙醇水溶液回流提取2次，将所得提取液合并，干燥，即得。
23、本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次发现acs患者pci后血浆中亚油酰肉碱与促炎期延长和能量代谢紊乱中的脂肪酸代谢障碍有关，其含量可反映心肌缺血损伤程度，并且会加剧缺氧/复氧对心肌细胞的活性抑制，从而可以用于筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物。本专利技术提供的筛选对acs患者pci后促炎期延长具有改善作用的药物的方法的理论基础即在于本专利技术经研究发现的亚油酰肉碱与促炎期延长和能量代谢紊乱中的脂肪酸代谢障碍的相关性以及促炎期和抗炎修复期之间复杂的平衡关系。利用该方法筛选出的药本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.亚油酰肉碱在筛选对ACS患者PCI后促炎期延长具有调节作用的药物中的应用。
2.一种筛选对ACS患者PCI后促炎期延长具有调节作用的药物的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无血清无糖DMEM培养基中亚油酰肉碱的含量为20μmol/L。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述心肌细胞为H9c2心肌细胞。
5.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述缺氧培养的时间为12h；和/或
6.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，S3中检测细胞活性的方法为采用CCK-8法。
7.权利要求2～6任一项所述的方法在筛选对ACS患者PCI后促炎期延长具有改善作用的中药活性成分中的应用。
8.一种对ACS患者PCI后促炎期延长具有调节作用的药物，其特征在于，所述药物中含有丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、丹酚酸C、丹酚酸F、积雪草酸中的至少一种。
9.丹参提取物在制备改善ACS患者PCI后促炎期延长的药物中的应用。
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...【技术特征摘要】
1.亚油酰肉碱在筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物中的应用。
2.一种筛选对acs患者pci后促炎期延长具有调节作用的药物的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无血清无糖dmem培养基中亚油酰肉碱的含量为20μmol/l。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述心肌细胞为h9c2心肌细胞。
5.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述缺氧培养的时间为12h；和/或
6.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，s3中检测细...
【专利技术属性】
技术研发人员：高秀梅，程丽颖，韩立峰，张林，王丽明，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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