【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术属于细胞生物学领域。特别地，本专利技术涉及使衰老卵母细胞恢复活力的方法。本专利技术进一步公开了使用年轻体细胞产生重构嵌合滤泡(reconstituted chimericfollicle)来治疗不孕或提高生育力的方法，所述重构嵌合滤泡包含衰老卵母细胞和年轻体细胞。
技术介绍
0、专利技术背景
1、哺乳动物卵巢包含许多卵巢滤泡，这些卵巢滤泡在发育期间庇护并滋养卵母细胞。哺乳动物卵巢滤泡包含卵母细胞和其周围的体细胞或非生殖细胞，包括颗粒细胞(gc)和卵泡膜细胞(theca cell)。这些体细胞是维持女性的生殖能力的最小功能单位，它们与卵母细胞一起生长和发育。重要的是，体细胞尤其是gc能够通过称为跨区投射(transzonalprojection,tzp)的特化结构来滋养发育中的卵母细胞，并为卵母细胞的发育和生长提供能量、营养物质和微环境。这些允许卵母细胞经历成熟以有能力受精，从而产生有活力的胚胎。另外，gc产生对于女性生殖健康至关重要的雌性激素雌激素。
2、最近的一份报告指出，不孕影响全球六分之一的人，并且与年龄相关的女性生育力下降是严重的全球社会和临床问题。由于卵巢滤泡的数量和质量随年龄而逐渐损失以及辅助生殖技术(art)的限制，因此母体衰老对自发地(自然地)或经由art/体外受精(ivf)实现的生育力具有有害作用。母体衰老与体细胞衰老或凋亡相关，导致卵巢滤泡闭锁。
3、为了提高雌性受试者的生育力，使衰老卵母细胞恢复活力的现有方法是线粒体转移，其通过用来自供体雌性受试者的
4、因此，需要开发使衰老卵母细胞恢复活力以预防和治疗不孕的新方法，其在不将供体的dna转移至受体的卵母细胞的情况下提高卵母细胞的数量和能力。
技术实现思路
0、概述
1、在一个方面，提供了一种使衰老卵母细胞恢复活力的体外方法，其包括将衰老卵母细胞与不包含卵母细胞的供体卵巢滤泡组合以生成嵌合卵巢滤泡。
2、在另一方面，提供了一种嵌合卵巢滤泡，其包含衰老卵母细胞和供体体细胞。
3、在另一方面，提供了一种治疗有需要的雌性受试者的不孕或提高其生育力的方法，其包括：
4、a)从受试者获得卵巢滤泡并从卵巢滤泡中分离衰老卵母细胞；
5、b)从供体获得卵巢滤泡并从供体卵巢滤泡中去除卵母细胞；
6、c)将来自a)的衰老卵母细胞与来自b)的没有卵母细胞的卵巢滤泡一起移植，以生成嵌合卵巢滤泡；
7、d)培养嵌合卵巢滤泡以生成成熟的嵌合卵巢滤泡；以及
8、e)i)将嵌合卵巢滤泡植入雌性受试者中以治疗不孕或提高生育力；或
9、ii)使成熟卵母细胞从成熟的嵌合卵巢滤泡排卵并分离成熟卵母细胞用于体外受精。
10、定义
11、如本文所用，术语“恢复活力(rejuvenating)”在卵母细胞的背景下是指恢复衰老卵母细胞的微环境以促进卵母细胞的发育、生长和成熟的过程，使得卵母细胞具有发育为有活力的胚胎的潜力。
12、术语“卵泡发生(folliculogenesis)”是指卵巢滤泡从原始阶段至初级阶段、次级阶段、早期窦(窦前)阶段和窦阶段的发育和成熟。卵巢滤泡包含卵母细胞和体细胞。这些体细胞可包括但不限于卵丘细胞、颗粒细胞和卵泡膜细胞。每个阶段的卵巢滤泡可通过一种或更多种特定细胞类型和/或表型的存在来表征。例如，原始阶段的卵巢滤泡的特征可以在于存在被前颗粒细胞(pre-granulosa cell)包围的卵母细胞，初级阶段的卵巢滤泡可包含被单层颗粒细胞包围的卵母细胞，并且次级阶段的卵巢滤泡可包含被超过一层的颗粒细胞包围的卵母细胞。次级阶段的卵巢滤泡成熟为窦前阶段，该阶段包含卵母细胞、超过一层的颗粒细胞和卵泡膜细胞。窦前阶段卵巢滤泡随后进展至窦阶段，该阶段的特征在于在包含超过一层颗粒细胞和卵泡膜细胞的体细胞内形成包围未成熟卵母细胞的窦。窦阶段的卵巢滤泡是指排卵前滤泡或成熟滤泡，并且排卵前滤泡中的未成熟卵母细胞可以是完全生长的生发泡(gv)阶段卵母细胞。
13、如本文所用，术语“嵌合卵巢滤泡”是指包含从第一受试者的卵巢滤泡获得的卵母细胞和从第二受试者的卵巢滤泡获得的体细胞的滤泡。第一受试者还可被称为“受体”，并且第二受试者还可称为“供体”。术语“嵌合卵巢滤泡”、“嵌合滤泡”、“重构的嵌合卵巢滤泡”和“重构嵌合滤泡”在本上下文中可互换使用。
14、术语“体细胞”是指非生殖细胞。在本专利技术的上下文中，“体细胞”是指卵巢滤泡中在卵泡发生期间包围卵母细胞的非生殖体细胞。这些细胞可包括但不限于前颗粒细胞、卵丘细胞、颗粒细胞和卵泡膜细胞。例如，在卵泡发生的原始阶段，体细胞包含前颗粒细胞，在初级阶段和次级阶段，体细胞包含颗粒细胞，并且在早期窦(窦前)阶段和窦阶段，体细胞包含颗粒细胞和卵泡膜细胞。卵母细胞周围的这些细胞在卵母细胞发育期间经历细胞分裂。
15、如本文所用，关于卵巢滤泡的术语“衰老”是指质量已劣化的卵巢滤泡。卵巢滤泡质量的一个量度是卵巢滤泡在卵泡发生期间发育和成熟的能力。因此，衰老卵巢滤泡是不能够或不太能够发育为成熟卵巢滤泡以诱导卵母细胞排卵的卵巢滤泡。衰老卵巢滤泡包含衰老卵母细胞和不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞。
16、如本文所用，关于卵巢滤泡的术语“年轻”是指在卵泡发生期间能够发育为成熟滤泡的卵巢滤泡。
17、“成熟卵巢滤泡”是指处于滤泡发育的窦阶段的卵巢滤泡，其包含颗粒细胞和完全生长的生发泡阶段卵母细胞。术语“成熟卵巢滤泡”和“排卵前卵巢滤泡”在本上下文中可互换使用。
18、“完全生长的生发泡阶段卵母细胞”是指未成熟并且具有经历成熟的能力的卵母细胞。
19、“成熟卵母细胞”是指已经历减数分裂成熟并具有经历受精的能力的中期ii(mii)停滞的卵母细胞或卵。术语“成熟卵母细胞”、“排卵的卵母细胞”和“mii卵母细胞”在本上下文中可互换使用。
20、如本文所用，术语“能力(competence)”是指卵母细胞发育、生长和成熟以用于受精(其产生有活力的胚胎)的能力。有活力的胚胎可在子宫中进展并发育为胎儿。
21、术语“受试者”是指人或非人哺乳动物。此类哺乳动物的实例包括但不限于灵长类动物、小鼠、大鼠、豚鼠、兔和狗。
22、术语“不孕”是指雌性生殖系统的疾病，其特征在于卵母细胞不能被雄性生殖细胞受精或被雄性生殖细胞受精的能力降低，或者受精卵母细胞不能生长并发育为有活力的胚胎或生长并发育为有活力的胚胎的能力降低。
23、如本文所用，术语“可育(fertile)”是指卵母细胞被雄性生殖细胞受精的能力或受精卵母细胞生长并发育为有活力的胚胎的能力。
24、如本文所用，在组分的浓度和化合物的百分比的背景下，术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种使衰老卵母细胞恢复活力的体外方法，其包括将所述衰老卵母细胞与不包含卵母细胞的供体卵巢滤泡组合以生成嵌合卵巢滤泡。
2.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述衰老卵母细胞从包含不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞的衰老卵巢滤泡获得。
3.根据权利要求2所述的体外方法，其中相对于能够促进卵母细胞发育的体细胞，所述不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞的特征在于选自由以下组成的组的一种或更多种表型：更高的反应性氧化应激水平、更低的线粒体膜电位、增加的DNA损伤和凋亡、降低的ATP水平、内聚力不存在或降低或它们的组合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的体外方法，其中所述供体卵巢滤泡是年轻滤泡。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的体外方法，其中所述供体卵巢滤泡包含能够促进卵母细胞发育的体细胞。
6.根据权利要求5所述的体外方法，其中相对于不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞，所述能够促进卵母细胞发育的体细胞具有选自由以下组成的组的一种或更多种预定表型：更低的反应性氧化应激水平、更高的线粒体膜电位、更少的DN
7.根据权利要求1-6中任一项所述的体外方法，其进一步包括培养所述嵌合卵巢滤泡以生成成熟的嵌合卵巢滤泡并诱导成熟卵母细胞从成熟的嵌合卵巢滤泡排卵。
8.根据权利要求7所述的体外方法，其中所述成熟的嵌合卵巢滤泡是窦阶段嵌合滤泡。
9.根据权利要求7或8所述的体外方法，其中所述成熟的嵌合卵巢滤泡包含完全生长的生发泡(GV)阶段卵母细胞和体细胞。
10.根据权利要求3-9中任一项所述的体外方法，其中所述体细胞包括颗粒细胞。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的体外方法，其中所述衰老卵母细胞是哺乳动物卵母细胞，并且所述供体卵巢滤泡是哺乳动物卵巢滤泡。
12.根据权利要求11所述的体外方法，其中所述哺乳动物卵母细胞是人或啮齿动物卵母细胞，并且其中所述哺乳动物供体卵巢滤泡是人或啮齿动物卵巢滤泡。
13.一种嵌合卵巢滤泡，其包含衰老卵母细胞和供体体细胞。
14.根据权利要求13所述的嵌合卵巢滤泡，其中所述衰老卵母细胞从包含不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞的衰老卵巢滤泡获得。
15.根据权利要求13或14所述的嵌合卵巢滤泡，其中所述供体体细胞从包含能够促进卵母细胞发育的体细胞的卵巢滤泡获得。
16.根据权利要求15所述的嵌合卵巢滤泡，其中所述供体卵巢滤泡是年轻滤泡。
17.根据权利要求13-16中任一项所述的嵌合卵巢滤泡，其中所述体细胞是颗粒细胞。
18.一种治疗有需要的雌性受试者的不孕或提高其生育力的方法，其包括：
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述雌性受试者是雌性哺乳动物受试者。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述哺乳动物受试者是人或啮齿动物。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种使衰老卵母细胞恢复活力的体外方法，其包括将所述衰老卵母细胞与不包含卵母细胞的供体卵巢滤泡组合以生成嵌合卵巢滤泡。
2.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述衰老卵母细胞从包含不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞的衰老卵巢滤泡获得。
3.根据权利要求2所述的体外方法，其中相对于能够促进卵母细胞发育的体细胞，所述不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞的特征在于选自由以下组成的组的一种或更多种表型：更高的反应性氧化应激水平、更低的线粒体膜电位、增加的dna损伤和凋亡、降低的atp水平、内聚力不存在或降低或它们的组合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的体外方法，其中所述供体卵巢滤泡是年轻滤泡。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的体外方法，其中所述供体卵巢滤泡包含能够促进卵母细胞发育的体细胞。
6.根据权利要求5所述的体外方法，其中相对于不太能够或不能够促进卵母细胞发育的体细胞，所述能够促进卵母细胞发育的体细胞具有选自由以下组成的组的一种或更多种预定表型：更低的反应性氧化应激水平、更高的线粒体膜电位、更少的dna损伤和凋亡、增加的atp水平、增加的内聚力或它们的组合。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的体外方法，其进一步包括培养所述嵌合卵巢滤泡以生成成熟的嵌合卵巢滤泡并诱导成熟卵母细胞从成熟的嵌合卵巢滤泡排卵。
8.根据权利要求7所述的体外方法，其中所述成熟的嵌合卵巢滤泡是窦阶段嵌合滤泡...
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