【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农用微生物，具体是涉及一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂及其制备方法。
技术介绍
1、龙牙百合属百合科百合属多年生球根植物，为深受市场欢迎的药食同源养生品，是集食用、药用和观赏于一体的重要经济作物，自然分布在我国的山西、河南、湖北、湖南、江西、安徽和浙江等省区海拔300-920m的山地，龙牙百合的地下鳞茎不仅是我国三大食用百合之一，同时也是中国药典指定的中药百合基源生药之一，具有润肺止咳、清热安神的功效。其鳞茎主要含有甾体皂苷、秋水仙碱、酚性甘油苷，还含有多糖、氨基酸、磷脂以及丰富的铜、锌、镁、钙等微量元素等，是深受市场欢迎的药食同源养生品。此外，龙牙百合花白色、芳香浓郁，可作香料，也作为切花在世界各地广泛种植。因此，龙牙百合是集食用、药用和观赏于一体的重要经济作物，属江西省中药材“赣食十味”之一。目前，龙牙百合在我国江西万载、泰和、永丰，湖南隆回、安化、龙山以及广西永福、资源、柳州等市县有大面积栽培,其中，江西万载的龙牙百合种植历史已有500年之久。
2、龙牙百合在栽培过程中容易发生枯萎病等病害，每年5-6月，百合感染枯萎病等病害十分普遍，严重影响其产量与品质，给种植户造成较大的经济损失，有效防控此类病害具有重要意义。随着龙牙百合产业快速发展，严格的轮作换茬制度执行越来越困难，枯萎病大面积严重发生，造成龙牙百合整株枯萎和鳞茎变质腐烂致大幅度减产，发病严重的田块病株率达91.42％，病情指数88.50，发病田平均减产46％以上，常导致百合发病而减产减收，甚至绝收，病虫害猖獗，严重制约着龙
3、因此，研究提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其防效较好、无毒、环境友好，产品呈粉剂，方便施用，是一种高效绿色环保的生防菌剂，包括以下质量百分比成分：桔青霉的分生孢子可湿性粉剂20-30％，贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂70-80％。
2、优选的，所述桔青霉penicillium citrinum，菌株编号为青6，保藏日期2024年7月29日，保藏编号为cgmcc no:41479。
3、优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌bacillus velezensis，菌株编号为hx182，保藏日期2024年7月29日，保藏编号为cgmcc no:31478。
4、优选的，所述桔青霉的分生孢子可湿性粉剂配方为：桔青霉的分生孢子粉含量为8-10％；润湿剂为1-1.25％的十二烷基硫酸钠；分散剂为5-6％的木质磺酸钠；紫外保护剂为0.3-0.4％的黄原胶；孢子促进剂为0.1-0.2％的氯化钙；载体为82-85％的高岭土；所述桔青霉的分生孢子可湿性粉剂的孢子粉的含孢量为3.7×1011cfu/g。
5、优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂配方为：贝莱斯芽孢杆菌菌株发酵液40-50％、硅藻土40-45％、皂角粉9-12％、三聚磷酸钠2-4％、黄原胶2-3％，所述贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂的活菌含量为2.65×1011cfu/g。
6、本专利技术还提供了一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
7、1)制备桔青霉的分生孢子可湿性粉剂；
8、2)制备贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂；
9、3)将桔青霉的分生孢子可湿性粉剂和贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂按比例混合。
10、优选的，所述制备桔青霉的分生孢子可湿性粉剂方法为：
11、a、拮抗菌的分离与纯化：采用土壤稀释法，对健康百合根际土菌株进行分离，将10g新鲜的百合根际土壤加入到90ml无菌水中，置于200r/min的摇床上震荡30min，得到土壤悬浊液，依次稀释土壤悬浊液至103、104、105、106倍，吸取100ul土壤稀释液涂布在pda培养基上，每组浓度重复三次，25℃恒温培养1-3d，挑取形态差异明显的单个菌落，接种至pda培养基中，观察分离后的菌落形态，检查是否含有杂菌，对形态差异明显的菌落继续进行纯化，纯化3-4次；
12、b、青6菌株的鉴定：采用形态特征法和分子生物学的方法，对复筛出的拮抗效果好的菌株进行鉴定；
13、c、固体发酵及孢子粉收获：用无菌水冲洗pda培养基培养7d的菌株青6，得到孢子悬浮液并调整其浓度为1.0×106cfu/ml，以1％的添加量至pdb培养基中，28℃、170r/min振荡培养7d后用于后续试验，将黏米粉50g置于15cm培养皿中，于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30min，在超净工作台中将收集的种子液吸取30ml加入到培养皿中，搅拌均匀，3个重复，置于28℃培养箱中恒温培养7d，待培养7d至黏米粉长出深绿色孢子粉，于35℃鼓风干燥箱中干燥5d，取出培养皿将其用研钵研磨，得到孢子粉；
14、d、青霉6可湿性粉剂配方的筛选；
15、e、将桔青霉的分生孢子粉、润湿剂、分散剂、紫外保护剂、孢子促进剂、载体按比例混合、搅拌，然后在电热恒温鼓风干燥箱中持续烘干，最后经研磨粉碎制得可湿性粉剂。
16、优选的，所述制备贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂方法为：
17、a、细菌的分离与纯化：采用土壤稀释法，对健康百合根际土菌株进行分离；将10g新鲜的百合根际土壤加入到90ml无菌水中，置于200r/min的摇床上上震荡30min，得到土壤悬浊液，依次稀释土壤悬浊液至103、104、105、106倍，吸取100μl土壤稀释液涂布在pda培养基上，每组浓度重复三次，25℃恒温培养1-3d，挑取形态差异明显的单个菌落，接种至pda培养基中，观察分离后的菌落形态，检查是否含有杂菌，对形态差异明显的菌落继续进行纯化，纯化3-4次；
18、b、hx182菌株的鉴定：采用形态特征法和分子生物学的方法，对复筛出的拮抗效果好的菌株进行鉴定；
19、c、固体发酵及孢子粉收获：用无菌水冲洗pda培养基培养7d的菌株hx182，得到孢子悬浮液并调整其浓度为1.0×106cfu/ml，以1％的添加量至pdb培养基中，28℃、170r/min振荡培养7d后用于后续试验，将黏米粉50g置于15cm培养皿中，于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30min，在超净工作台中将收集的种子液吸取30ml加入到培养皿中，搅拌均匀，3个重复，置于28℃培养箱中恒温培养7d，待培养7d至黏米粉长出深绿色孢子粉，于35℃鼓风干燥箱中干燥5d，取出培养皿将其用研钵研磨本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，包括以下质量百分比成分：桔青霉的分生孢子可湿性粉剂20-30%，贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂70-80%。
2.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述桔青霉Penicillium citrinum，菌株编号为青6，保藏编号为CGMCC NO:41479。
3.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，菌株编号为Hx182，保藏编号为CGMCC NO:31478。
4.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述桔青霉的分生孢子可湿性粉剂配方为：桔青霉的分生孢子粉含量为8-10%；润湿剂为1-1.25%的十二烷基硫酸钠；分散剂为5-6%的木质磺酸钠；紫外保护剂为0.3-0.4%的黄原胶；孢子促进剂为0.1-0.2%的氯化钙；载体为82-85%的高岭土；所述桔青霉的分生孢子可湿性粉剂的孢子粉的含
5.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂配方为：贝莱斯芽孢杆菌菌株发酵液40-50%、硅藻土40-45%、皂角粉9-12%、三聚磷酸钠2-4%、黄原胶2-3%，所述贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂的活菌含量为2.65×1011cfu/g。
6.根据权利要求1所述的提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备桔青霉的分生孢子可湿性粉剂方法为：
8.根据权利要求6所述的提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂方法为：
...【技术特征摘要】
1.一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，包括以下质量百分比成分：桔青霉的分生孢子可湿性粉剂20-30%，贝莱斯芽孢杆菌可湿性粉剂70-80%。
2.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述桔青霉penicillium citrinum，菌株编号为青6，保藏编号为cgmcc no:41479。
3.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌bacillus velezensis，菌株编号为hx182，保藏编号为cgmcc no:31478。
4.根据权利要求1所述的一种提高龙牙百合药用活性成分和枯萎病抗性的生防菌剂，其特征在于，所述桔青霉的分生孢子可湿性粉剂配方为：桔青霉的分生孢子粉含量为8-10%；润湿剂为1-1.25%的十二烷基硫酸钠；分散剂为5-6%的木质磺酸钠；紫外保护剂为0.3-0.4%的黄原胶...
【专利技术属性】
技术研发人员：李润根，李嘉妮，卢其能，李兴杰，黄琪，赵雅芳，
申请(专利权)人：宜春学院，
类型：发明
国别省市：
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