【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药生物，具体涉及一种猪肺炎支原体重组抗原、表达载体和重组菌及应用。
技术介绍
1、猪肺炎支原体(mycoplasmahyopneumoniae，mhp)是一种引起猪支原体肺炎(mycoplasmapneumoniae ofswine，mps)的病原，属于慢性呼吸道系统疾病，同时也称为猪气喘病、猪地方流行性肺炎；一般情况下，猪是mps的易感动物，在各个年龄段都可以感染该疾病。在猪群中会引起咳嗽，哮喘，厌食等症状，在临床上表现为仔猪日增重减少和肺部的明显病变，其对养猪业产生巨大的经济损失。
2、当猪自然感染肺炎支原体也能够产生免疫，但由于支原体的免疫原性较差，要想获得有效的免疫保护，需要花相当长的时间；通过感染获得免疫的办法，见效较差，不能保护肥育猪免受mps的侵害国内外研究表明发生喘气病后，再想彻底杀灭病原体，是十分困难的，对呼吸道感染而言尤为如此，因为消毒剂很难渗入到肺部黏膜表面而发挥作用；同时抗生素治疗也无法修复已造成的病变损伤。如果停止消毒，病原又会逸出、该病的传播又会重新开始，对养殖场的损失惨重。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种猪肺炎支原体重组抗原、表达载体和重组菌及应用，构建表达猪肺炎支原体p97蛋白的乳酸乳球菌表达系统，并制备预防猪肺炎支原体感染的口服活菌制剂，不需要免疫应答过程即可起到预防猪肺炎支原体感染的效果。
2、本专利技术提供了一种猪肺炎支原体重组抗原的构建方法，包括以猪肺炎支原体p97基因作为参考基因，对所
3、所述修饰包括将所述参考基因的c末端含有12个重复基元的r1区域串联三次用柔性连接肽连接起来，并在c端加his标签；
4、所述猪肺炎支原体p97基因的genbank登录号为ay512904.1。
5、本专利技术还提供了利用上述构建方法构建得到的猪肺炎支原体重组抗原。
6、优选的，所述猪肺炎支原体重组抗原的核苷酸序列如seq id no.1所示。
7、本专利技术还提供了一种包含上述猪肺炎支原体重组抗原的重组载体。
8、本专利技术还提供了一种包含上述重组载体的重组菌。
9、优选的，所述重组菌以乳酸乳球菌为基础载体。
10、本专利技术还提供了上述重组菌经发酵后得到的含活菌的发酵液。
11、本专利技术还提供了一种预防猪肺炎支原体感染的口服活菌制剂，所述口服活菌制剂以上述发酵液为有效成分。
12、优选的，所述口服活菌制剂中活菌数为(0.8～1.2)×108cfu/ml。
13、有益效果：本专利技术提供了一种猪肺炎支原体重组抗原的构建方法，对猪肺炎支原体p97蛋白r1区域进行修饰，构建得到seq id no.1所示的猪肺炎支原体重组抗原。本专利技术还将所述猪肺炎支原体重组抗原克隆至表达载体中，利用遗传转化手段获得重组工程菌。
14、本专利技术所述重组工程菌可稳定表达所述猪肺炎支原体重组抗原，可将其制备成口服活菌制剂，相较于疫苗，本专利技术创制的口服剂更加安全、有效、快速。本专利技术所述口服剂的安全性表现在有效成分小分子功能性蛋白，无病原基因存在；有效性表现在所述口服剂的有效成分只分泌保护性抗原，作用于机体表面粘膜部位，抢占猪肺炎支原体靶细胞的受体，支原体入侵时，其与黏膜表面细胞结合的位点被阻断及封闭，从而阻断支原体感染路径；快速性表现在乳酸乳球菌表达的分泌蛋白直接抢占了病原与靶细胞结合的受体从而阻断支原体感染，不需要免疫应答过程。
15、本专利技术实施例中，猪服食所述制剂后，制剂中乳酸乳球菌分泌的抗原蛋白(p97蛋白)黏附到呼吸道黏膜支原体靶细胞受体，，封闭黏膜表面的支原体受体蛋白位点，起到生态占位的作用，当环境中的支原体入侵机体时，靶细胞上的支原体结合位点已被抗原蛋白生物膜完全封闭，支原体无法与靶细胞上的支原体结合位点结合，从而有效阻断支原体与细胞表面上的受体结合，起到预防猪肺炎支原体感染的效果。
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1.一种猪肺炎支原体重组抗原的构建方法，其特征在于，包括以猪肺炎支原体P97基因作为参考基因，对所述参考基因的C末端进行修饰；
2.利用权利要求1所述构建方法构建得到的猪肺炎支原体重组抗原。
3.根据权利要求2所述猪肺炎支原体重组抗原，其特征在于，所述猪肺炎支原体重组抗原的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
4.一种包含权利要求2或3所述猪肺炎支原体重组抗原的重组载体。
5.一种包含权利要求4所述重组载体的重组菌。
6.权利要求5所述重组菌经发酵后得到的含活菌的发酵液。
7.一种预防猪肺炎支原体感染的口服活菌制剂，其特征在于，所述口服活菌制剂以权利要求6所述发酵液为有效成分。
8.根据权利要求7所述口服活菌制剂，其特征在于，所述口服活菌制剂中活菌数为(0.8～1.2)×108cfu/mL。
【技术特征摘要】
1.一种猪肺炎支原体重组抗原的构建方法，其特征在于，包括以猪肺炎支原体p97基因作为参考基因，对所述参考基因的c末端进行修饰；
2.利用权利要求1所述构建方法构建得到的猪肺炎支原体重组抗原。
3.根据权利要求2所述猪肺炎支原体重组抗原，其特征在于，所述猪肺炎支原体重组抗原的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4.一种包含权利要求2或3所述猪肺炎支原体...
【专利技术属性】
技术研发人员：董伟，彭娜娜，贺佳怡，谢小红，文利新，
申请(专利权)人：长沙绿叶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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