【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于构建头颈部肿瘤体外3d微肿瘤模型的培养基及其方法。
技术介绍
1、头颈部肿瘤是世界第六大常见的恶性肿瘤，每年新发病例约89万、死亡病例近45万。头颈部肿瘤的原发部位和病理分型多样，包括颈部肿瘤、耳鼻喉科肿瘤以及口腔颌面肿瘤三大类别。颈部肿瘤常见的是甲状腺肿瘤；耳鼻喉科肿瘤常见的有喉癌、副鼻窦癌等；口腔颌面肿瘤常见的为各种口腔癌，如舌癌、牙龈癌、颊癌等。
2、头颈部的重要器官比较集中、解剖较为复杂，血供及淋巴引流十分丰富，故而头颈部肿瘤易发生侵袭转移、预后较差。头颈部肿瘤建议早诊断、早治疗，然而其发病部位相对隐匿，患者在就诊时多处于中晚期阶段。尽管已有手术、放疗、化疗、靶向和免疫等多种综合治疗方式，但是晚期患者5年总生存率也仅为20%-35%。因此，如何根据患者个体化差异情况制定精准治疗方案、延长生存时间并且改善生存质量是国内外学者面临的棘手问题，具有重大科学理论价值和社会实践意义。
3、截至目前，肿瘤体外替代物模型的转化应用仍然受限，主要原因是细胞模型组成单一、缺少对免疫微环境的模拟，动物模型与人类的种属差异、欠缺对个性化医疗需求的考虑等。针对头颈部肿瘤诊疗现状，亟待开发和构建一种样本易于获取、操作可重复性好，高通量、标准化、充分保留原始肿瘤组织各项生物学特征的体外3d细胞模型，从而推动临床前有效性及安全性评价、加速新药研发、带动产业发展和患者受益。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种用于构建头颈部肿瘤体外3d微
2、第一方面，本专利技术要求保护一种构建用于头颈部肿瘤体外3d微肿瘤模型的培养基。
3、本专利技术要求保护的用于头颈部肿瘤体外3d微肿瘤模型构建的培养基，由抗菌抗真菌剂三抗、hepes、glutamax、mem非必需氨基酸溶液、人重组蛋白egf、人重组蛋白bfgf、人重组蛋白hgf、人重组蛋白msp、人重组蛋白wnt-3a、人重组蛋白noggin、人重组蛋白r-spondin1、人重组蛋白il-2、人重组蛋白il-15、毛喉素（forskolin，一种腺苷酸环化酶激动剂）、chir99021、sb202190、a83-01、primocin、n-乙酰-l-半胱氨酸（n-acetyl-l-cysteine）、烟碱（nicotinamide）、n2添加剂（n2 supplement）、b27、its-x（insulin, transferrin,selenium, ethanolamine solution）、y-27632和基础培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗为青霉素、链霉素和两性霉素b。
4、在所述培养基中，所述hepes的终浓度为8-12mm（如10mm）；所述glutamax的终浓度为0.8-1.2%（如1%）体积百分含量；所述mem非必需氨基酸溶液的终浓度为0.8-1.2%（如1%）体积百分含量；所述人重组蛋白egf的终浓度为10-100ng/ml（如50ng/ml）；所述人重组蛋白bfgf的终浓度为10-50ng/ml（如20ng/ml）；所述人重组蛋白hgf的终浓度为5-25ng/ml（如20ng/ml）；所述人重组蛋白msp的终浓度为5-25ng/ml（如20ng/ml）；所述人重组蛋白wnt-3a的终浓度为200-300ng/ml（如200ng/ml）；所述人重组蛋白noggin的终浓度为100-200ng/ml（如100ng/ml）；所述人重组蛋白r-spondin 1的终浓度为250-500ng/ml（如400ng/ml）；所述人重组蛋白il-2的终浓度为10-100ng/ml（如20ng/ml）；所述人重组蛋白il-15的终浓度为10-100ng/ml（如10ng/ml）；所述毛喉素的终浓度为2-10μm（如5μm）；所述chir99021的终浓度为1.5-6μm（如2μm）；所述sb202190的浓度为5-10μm（如5μm）；所述a83-01的浓度为0.25-1.25μm（如1μm）；所述primocin的浓度为0.5mg/ml；所述n-乙酰-l-半胱氨酸的浓度为0.5-2mm（如2mm）；所述烟碱的浓度为5-10mm（如10mm）；所述n2添加剂的终浓度为1%体积百分含量；所述b27的终浓度为1.5-2.5%（如2%）体积百分含量；所述its-x的终浓度为0.8-1.2%（如1%）体积百分含量；所述y-27632的终浓度为5-20μm（如7.5μm）。
5、进一步地，所述mem非必需氨基酸溶液的溶剂为水，溶质及浓度如下：甘氨酸10mm；l-丙氨酸10mm；l-天冬酰胺10mm；l-天冬氨酸10mm；l-谷氨酸10mm；l-脯氨酸10mm；l-丝氨酸10mm。所述glutamax是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代细胞培养基中的l-谷氨酰胺。所述glutamax为“glutamax™ supplement”（如gibco#35050061，或与其组成相同的其他产品）。所述“glutamax™ supplement”的成分为l-alanyl-l-glutamine，是l-glutamine的替代物，浓度为200nm，溶剂为0.85% nacl溶液。所述a83-01为“3-(6-methyl-2-pyridinyl)-n-phenyl-4-(4-quinolinyl)-1h-pyrazole-1-carbothioamide”（如tocris#2939，或与其组成相同的其他产品）。所述sb202190为“4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基苯基)-5-(4-吡啶基)-1h-咪唑”（如sigma#s7067，或与其组成相同的其他产品）。所述b27为“b-27™ supplement(50x), minus vitamin a”（如gibco#12587010，或与其组成相同的其他产品）。所述“b-27™ supplement (50x), minus vitamin a”中含有生物素（biotin）、dl-α-生育酚乙酸酯（dl alpha tocopherol acetate）、dl-α-生育酚（dl alpha-tocopherol）、bsa（fatty acidfree fraction v）、过氧化氢酶（catalase）、人重组胰岛素（human recombinantinsulin）、人转铁蛋白（human transferrin）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase）、皮质酮（corticosterone）、d -半乳糖（d-galactose）、乙醇胺盐酸（ethanolamine hcl）、还原型谷胱甘肽（glutathione (reduced)）、左旋肉碱盐酸（l-carnitine hcl）、亚油酸（linoleic acid）、亚麻酸（linolenic acid）、孕酮（progesterone）、腐胺（putrescine2hcl）、亚硒酸钠（sodium selenite）、三碘甲状腺原氨酸（t3 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于构建头颈部肿瘤体外3D微肿瘤模型的培养基，其特征在于：所述培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、MEM非必需氨基酸溶液、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白Wnt-3a、人重组蛋白Noggin、人重组蛋白R-spondin 1、人重组蛋白IL-2、人重组蛋白IL-15、毛喉素、CHIR99021、SB202190、A83-01、Primocin、N-乙酰-L-半胱氨酸、烟碱、N2添加剂、B27、ITS-X、Y-27632和基础培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗为青霉素、链霉素和两性霉素B；
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述基础培养基为Advanced DMEM/F12培养基；和/或
3.一种用于构建头颈部肿瘤体外3D微肿瘤模型的成套试剂，由权利要求1所述培养基和如下中的全部或部分组成：样本解离液、样本保存液、样本清洗液、细胞消化液、消化终止液和细胞冻存液。
4.根据权利要求3所述的成套试剂，其特征在于：所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶II、胶原酶I
5.权利要求1或2所述的培养基或权利要求3或4所述成套试剂在构建头颈部肿瘤体外3D微肿瘤模型中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述头颈部肿瘤为喉癌、鼻咽癌或甲状腺癌。
7.一种构建头颈部肿瘤体外3D微肿瘤模型的方法，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述头颈部肿瘤为喉癌、鼻咽癌或甲状腺癌。
9.利用权利要求7或8所述方法构建得到的头颈部肿瘤体外3D微肿瘤模型。
10.一种获得头颈部肿瘤实体瘤原代细胞的方法，其特征在于：所述方法是从利用权利要求7或8所述方法构建得到的头颈部肿瘤体外3D微肿瘤模型中分离得到头颈部肿瘤实体瘤原代细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种用于构建头颈部肿瘤体外3d微肿瘤模型的培养基，其特征在于：所述培养基由抗菌抗真菌剂三抗、hepes、glutamax、mem非必需氨基酸溶液、人重组蛋白egf、人重组蛋白bfgf、人重组蛋白hgf、人重组蛋白msp、人重组蛋白wnt-3a、人重组蛋白noggin、人重组蛋白r-spondin 1、人重组蛋白il-2、人重组蛋白il-15、毛喉素、chir99021、sb202190、a83-01、primocin、n-乙酰-l-半胱氨酸、烟碱、n2添加剂、b27、its-x、y-27632和基础培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗为青霉素、链霉素和两性霉素b；
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述基础培养基为advanced dmem/f12培养基；和/或
3.一种用于构建头颈部肿瘤体外3d微肿瘤模型的成套试剂，由权利要求1所述培养基和如下中的全部或部分组成：样本解离液、样本保存液、样本清洗液、细胞消化液、消化终止液和细胞冻存液。
4.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹申意，席建忠，骆宇峰，张函槊，
申请(专利权)人：北京基石生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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