【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及益母草，尤其涉及一种益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法。
技术介绍
1、益母草为唇形科益母草属植物,收载于2005版药典,并且位列卫健委公布的可用于保健食品的中药名单之一。临床上用于月经不调、产后瘀痛、心血管疾病、血液病等，是一种极具开发潜力的物种。近年在益母草的规范化栽培技术方面也进行了一定的研究，尤其是提高药用有效成分总生物碱含量的栽培措施，从而提高药材的质量实现鲜益母草的规范化栽培。
2、然而益母草属于雌雄同花植物，自然状态下长期自交易导致其种子萌发率低，萌发难以成苗，有效药用成分含量下降等问题。
3、因此，建立一种高效稳定的体外再生体系是益母草育种和产业发展亟待解决的问题。通过不同植物生长调节剂种类和浓度的组合培养基，诱导愈伤组织，并通过分化培养基诱导其胚性愈伤组织的不定芽分化以期建立益母草再生完整体系，为益母草组织培养育种技术的推进奠定基础。
技术实现思路
1、本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例，在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
2、鉴于上述现有技术中所存在的问题，提出了本专利技术。
3、为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案；
4、益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：包括如下步骤：
5、步骤1
6、步骤2、将外植体置于ms培养基中培养，用细胞分裂素、生长素诱导不定芽分化，所述细胞分裂素为6-ba和tdz，所述生长素为naa。
7、上述设计，植物部位如茎、根或叶片受到切割、损伤等物理刺激后，细胞会启动愈伤组织的形成，添加生长素和细胞分裂素到培养基中，能够有效诱导愈伤组织的形成，愈伤组织可用于快速繁殖植物，尤其是难以通过种子或其他方式繁殖的种类。益母草带腋芽茎段切成小段后，每个段的接触面积增大，有利于营养物质和生长调节剂的吸收，从而提高诱导愈伤组织的效率，切割可以帮助激活休眠的腋芽，切段的茎部容易刺激腋芽的生长，有利于不定芽的形成，从而促进繁殖，而且切成小段后，可以在不同的培养基和培养条件下进行优化实验，从而找到最适合益母草愈伤组织诱导和再生的条件。ms培养基，含有必需的无机盐、维生素和氨基酸，为植物生长提供了基础的营养成分；6-ba，能够促进细胞分裂和芽的形成，tdz能促进愈伤组织的生长；naa是一种合成的生长素，可以促进根的形成，以及调节生长和分化，尤其在诱导不定根和促进愈伤组织的再分化方面具有重要作用。
8、将分化出不定芽的益母草带腋芽茎段培养生根，得到可以用于快速种植的益母草种苗。
9、优选，所述6-ba的浓度为3mg·l-1，所述tdz的浓度为0.5mg·l-1，所述naa的浓度为0.1mg·l-1；以空白做对照，每个培养基接种三个外植体，每个实验组重复15次，统计出的腋芽茎段的分化率，方差分析得出最佳激素组合。
10、优选，所述ms培养基中添加有蔗糖，所述蔗糖的浓度为30g·l-1，蔗糖能为细胞提供能量，促进细胞生长和分化。
11、优选，所述ms培养基中添加有琼脂，所述琼脂的浓度为7g·l-1；琼脂作为凝固剂，使培养基能够凝固并形成固体状态，便于植株益母草带腋芽茎段的固定和生长。
12、优选，培养温度为23-25℃，光照强度为35-40μmol·m－2s－1，相对湿度为40％-70％，光照时间10-12h·d－1；ph值设定为5.8-6之间；使外植体处于适宜的环境中，能够有效促进养分的吸收和不定芽分化的分化。
13、优选，将饱满的益母草种子置于超净工作台中，用75％乙醇处理30s,无菌水冲洗3-5遍，再用2％次氯酸钠处理20min，无菌水冲洗3-5遍获得无菌种子，将无菌种子培养至出现腋芽，获得所述益母草苗；这样能够有效地去除益母草种子表面的污染物和细菌，这对于后续的组织培养和再生过程至关重要，降低微生物污染，提高不定芽分化培养的成功率和实验的结果。
14、优选，所述益母草苗带腋芽茎段切成小段时，采用切割刀切割，所述切割刀包括刀架，所述刀架包括位于水平方向上的水平支架、位于竖直方向上的竖直支架、承载刀面的倾斜支架，所述倾斜支架有两个，分别连接在水平刀架的两端，两个倾斜支架相互镜像且均位于所述水平支架的下方，所述倾斜支架上架设有刀面，所述刀面与水平面呈30°夹角；将益母草带腋芽茎段以斜角切割而不是垂直切割，这样可以增加接触面积，有助于激素的吸收和不定芽形成；切割出的外植体的长度、切割面倾斜角度、切割面间距等具有更好的一致性；切斜支架镜面对称，使两端受力一致，可有效保证切割刀的使用寿命，和切割时两端的一致性。
15、不定芽的生长点是植物中专门负责生长和发育的细胞群体，具有分裂和分化的能力，包含分裂活跃的细胞，负责生成新的芽、叶、根等结构，可能产生更多芽，所以切割时应保持这些节点完整。
16、优选，所述刀面的下边缘处是刀刃处，所述刀面的厚度自上边缘向下边缘逐渐减小；以减小对组织的挤压和损伤，保证割后的茎段能有效地产生不定芽。
17、优选，刀面的下边缘具有齿，所述齿分两组，位于同一组内的齿朝向相同，位于不同组内的齿朝向存在夹角，两组齿交替间隔排布。从而使切割面的表面有规律的不平整。
18、优选，所述切割刀的制备方法为：步骤1，取呈长方形状的金属板；步骤2，在金属板的两端各冲压出两道切割线，两道切割线将金属板的端部分割为位于两侧的侧边段、位于中间的中间段，将两个侧边段向内折叠至与金属板呈90°夹角，以侧边段作为竖直支架，将中间段向内折叠至与金属板呈30°夹角，以中间段作为切斜支架；结构简单，方便生产。
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1.益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述6-BA的浓度为3mg·L-1，所述TDZ的浓度为0.5mg·L-1，所述NAA的浓度为0.1mg·L-1。
3.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述MS培养基中添加有蔗糖，所述蔗糖的浓度为30g·L-1。
4.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述MS培养基中添加有琼脂，所述琼脂的浓度为7g·L-1。
5.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述MS培养基的PH值为5.8-6，培养温度为24℃-26℃，光照强度为35-40μmol·m-2s-1，相对湿度为40％-70％，光照时间12h·d-1。
6.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：将饱满的益母草种子置于超净工作台中，用75％乙醇处理30s,无菌水冲洗3-5遍，再用2％次氯酸钠处理
7.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述益母草苗带腋芽茎段切成小段时，采用切割刀切割，所述切割刀包括刀架，所述刀架包括位于水平方向上的水平支架、位于竖直方向上的竖直支架、承载刀面的倾斜支架，所述倾斜支架有两个，分别连接在水平刀架的两端，两个倾斜支架相互镜像且均位于所述水平支架的下方，所述倾斜支架上架设有刀面，所述刀面与水平面呈30°夹角。
8.根据权利要求7所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述刀面的下边缘处是刀刃处，所述刀面的厚度自上边缘向下边缘逐渐减小。
9.根据权利要求8所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：刀面的下边缘具有齿，所述齿分两组，位于同一组内的齿朝向相同，位于不同组内的齿朝向存在夹角，两组齿交替间隔排布。
10.根据权利要求9所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述切割刀的制备方法为：
...【技术特征摘要】
1.益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述6-ba的浓度为3mg·l-1，所述tdz的浓度为0.5mg·l-1，所述naa的浓度为0.1mg·l-1。
3.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述ms培养基中添加有蔗糖，所述蔗糖的浓度为30g·l-1。
4.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述ms培养基中添加有琼脂，所述琼脂的浓度为7g·l-1。
5.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：所述ms培养基的ph值为5.8-6，培养温度为24℃-26℃，光照强度为35-40μmol·m-2s-1，相对湿度为40％-70％，光照时间12h·d-1。
6.根据权利要求1所述的益母草带腋芽茎段诱导不定芽分化的方法，其特征在于：将饱满的益母草种子置于超净工作台中，用75％乙醇处理30s,无菌水冲洗3-5遍...
【专利技术属性】
技术研发人员：王千千，朱向涛，陈霞，宋文明，刘淑娴，
申请(专利权)人：浙江农林大学暨阳学院，
类型：发明
国别省市：
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