【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然产物提取制备，特别涉及一种石斛多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
1、石斛(dendrobium nobile lindl.)，别名金钗石斛、金钗花、千年润等，是兰科(orchidaceae)石斛属(dendrobium)的植物。石斛分布在中国、印度、尼泊尔等地，在中国主要分布在福建、湖南等亚热带地区。石斛性喜温暖湿润且较为阴凉的环境，常与苔藓植物伴生，适宜生长在山地林中树干上或山谷岩石上。石斛具有益胃生津，滋阴清热之功效。常用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。
2、石斛含有多种化学成分，其中主要有效成分包括石斛类多糖和生物碱等。天然多糖从草本植物中提取，具有显著的生物活性，并被应用于免疫相关疾病的治疗。研究人员一直致力于多糖提取方法的开发，常见的提取方法有：(1)溶剂提取法，适用范围广，能提取多种类型的多糖，但是溶剂使用量大，可能存在环境和安全问题；(2)超声波辅助提取法，提取效率高，缩短提取时间，但是设备成本高，工业化应用难度大；(3)微波辅助提取法，提取速度快，能有效提取热敏感成分，但是高温可能导致一些成分的损失，设备成本高；(4)酶解法，选择性强，可以高效地提取目标多糖，但是酶剂成本高，反应时间长，需精确控制条件；热水提取法，操作简单，成本低，重复性好，设备维护和操作要求较低，这使得热水提取在大规模生产中更具实际可行性，但是提取效率相对较低，可能需要较长时间。因此，有必要对石斛多糖提取工艺和纯化方法进行优化，以提高石斛多糖的提取率
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提出一种石斛多糖及其制备方法和应用，解决上述问题。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、一种石斛多糖的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、预处理：取石斛的药用部位进行蒸汽爆破处理，蒸汽爆破处理条件为：温度为160～180℃，压力在1.0～1.2mpa之间，蒸汽爆破处理时间1～2分钟；
5、s2、热水浸提：将蒸汽爆破后的混合物用热水浸提，过滤，滤液浓缩；所述热水浸提的条件为：液料比为20～35:1ml/g，提取温度控制为80-100℃，提取时间为2-3小时；
6、s3、醇沉：向滤液中加入乙醇，低温条件下进行醇沉，离心后收集沉淀；
7、s4、除去蛋白和色素：将沉淀物复溶后用sevage试剂除蛋白，再通过大孔吸附树脂脱色素；
8、s5、透析：将除去蛋白和色素的溶液进行透析，透析液冷冻干燥后得石斛多糖粗品；
9、s6、纯化石斛多糖：多糖粗品溶解后离心，取上清液用nacl溶液洗脱，收集多糖组分，多糖组分进一步纯化后冻干得到精制石斛多糖。
10、优选的，所述步骤s1中石斛种类为霍山石斛，药用部位为石斛的茎和叶。
11、优选的，所述步骤s2中向滤液中加入3～5倍体积的75～95vol％乙醇；所述低温条件下醇沉具体为：4摄氏度条件下静置12～24h。
12、优选的，所述步骤s5透析具体为：将除去蛋白和色素的溶液置于截留分子量为2000da的透析袋，用4℃蒸馏水透析48～72h，每隔4h换水一次。
13、优选的，所述步骤s6多糖粗品进行分离纯化具体为将多糖粗品以溶解在去离子水中，离心后取上清液上样到deae-cellulose 52柱，用0.05m nacl溶液洗脱，用自动收集器收集洗脱液，用硫酸苯酚法监测含糖组分，制作洗脱图谱，根据洗脱图谱，收集洗脱液中主要组分，透析，冻干，得到多糖组分。
14、优选的，所述步骤s6多糖组分进一步纯化具体为：将多糖组分上样到sephadex g-75凝胶柱上，用蒸馏水以0.4ml/min的流速洗脱，收集洗脱液，冻干后得到精制石斛多糖。
15、本专利技术还提供一种由上述石斛多糖的制备方法得到的石斛多糖。
16、本专利技术还提供一种石斛多糖的应用，所述石斛多糖作为药物或护肤品中的抗氧化剂的应用。
17、本专利技术还提供一种石斛多糖的应用，所述石斛多糖在制备癌细胞系hepg2、bgc-823、lovo、a-549和cal-62抑制药物中的应用。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
19、本专利技术提供的一种石斛多糖的制备方法，首先，通过蒸汽爆破对霍山石斛进行预处理，能有效破裂植物细胞壁，增加多糖的释放量，通过物理作用使细胞组织更易溶解，从而提高多糖的提取效率；然后使用热水浸提法提取水溶性多糖，接着，采用低温醇沉法使多糖析出，再通过sevag法和大孔树脂吸附法去除蛋白质和色素，之后，多糖溶液经过透析袋透析，以去除分子量小于2000da的物质，最后经过冷冻干燥得到石斛多糖粗品，进一步分离纯化得到精制石斛多糖。另外通过体外实验证明所得的霍山石斛多糖同时具有明显的抗氧化和抗肿瘤活性，尤其对人肝癌细胞系(hepg2)、人结肠癌细胞(lovo)和人甲状腺癌细胞系(cal-62)具有较强的抑制癌细胞增殖活性，在护肤和医药领域具有较好的应用前景。
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1.一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中石斛种类为霍山石斛，药用部位为石斛的茎和叶。
3.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中向滤液中加入3～5倍体积的75～95vol％乙醇；所述低温条件下醇沉具体为：4摄氏度条件下静置12～24h。
4.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S5透析具体为：将除去蛋白和色素的溶液置于截留分子量为2000Da的透析袋，用4℃蒸馏水透析48～72h，每隔4h换水一次。
5.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S6多糖粗品进行分离纯化具体为将多糖粗品以溶解在去离子水中，离心后取上清液上样到DEAE-Cellulose 52柱，用0.05M NaCl溶液洗脱，用自动收集器收集洗脱液，用硫酸苯酚法监测含糖组分，制作洗脱图谱，根据洗脱图谱，收集洗脱液中主要组分，透析，冻干，得到多糖组分。
6.根据权利要求1所述的一种石斛多
7.一种石斛多糖，其特征在于，由权利要求1-6任意一项所述的石斛多糖的制备方法制得。
8.权利要求7所述的一种石斛多糖作为药物或护肤品中的抗氧化剂的应用。
9.权利要求7所述的一种石斛多糖的应用，其特征在于，所述石斛多糖在制备癌细胞系HePG2、BGC-823、LoVo、A-549和CAL-62抑制药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中石斛种类为霍山石斛，药用部位为石斛的茎和叶。
3.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中向滤液中加入3～5倍体积的75～95vol％乙醇；所述低温条件下醇沉具体为：4摄氏度条件下静置12～24h。
4.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤s5透析具体为：将除去蛋白和色素的溶液置于截留分子量为2000da的透析袋，用4℃蒸馏水透析48～72h，每隔4h换水一次。
5.根据权利要求1所述的一种石斛多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤s6多糖粗品进行分离纯化具体为将多糖粗品以溶解在去离子水中，离心后取上清液上样到deae-cellu...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔卫东，张敏，
申请(专利权)人：科奕美广州健康产业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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