【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及保护剂疫苗，更具体地说，它涉及高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗。
技术介绍
1、目前，高致病性猪繁殖与呼吸综合征是危害我国养猪业的主要疫病之一，主要引起母猪怀孕后期流产、早产、死胎等繁殖障碍，同时其易与副猪嗜血杆菌发生混合或继发感染，针对该病的治疗需要研发疫苗对猪群进行免疫接种。
2、但是现有的疫苗大多仅仅只有单独预防高致病性猪繁殖与呼吸综合征的灭活疫苗，不具有同时预防容易与其发生混合感染的副猪嗜血杆菌病的疫苗，因此疫苗预防全面性差，且疫苗制配采用的佐剂不具备综合性的免疫调节作用，极大的降低了疫苗的使用效果，同时在细胞增殖和冻干工艺上大多存在抗原效率低和保护效果差的弊端，因此需要研发一种预防效果好的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗。
技术实现思路
1、(1)要解决的技术问题
2、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其具有同时预防高致病性猪繁殖与呼吸综合征病与副猪嗜血杆菌病、疫苗免疫调节效果好和保护治疗效果好的特点。
3、(2)技术方案
4、为实现上述目的，本专利技术提供了高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，包括以下制作步骤：
5、s1、细胞培养
6、按猴胚胎肾上皮细胞marc-145微载体细胞悬浮培养工艺进行生物反应器细胞微载体悬浮培养；
7、待细胞数量增殖到适当规模后，关闭搅拌桨，完全沉降后排出培养上
8、s2、病毒抗原提取
9、按高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒hp-prrsv悬浮培养工艺在生物反应器进行hp-prrs的微载体悬浮培养，将悬浮培养收获的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞培养物经冻融后，取抗原液用滤棒过滤去除微载体，得到第一抗原液；
10、取副猪嗜血杆菌进行增殖培养，收获得到包含副猪嗜血杆菌的菌液，浓缩处理后进行灭活清洗，并分离得到灭活后的副猪嗜血杆菌浓缩液，将浓缩液中加入吐温-80，得到第二抗原液；
11、将得到的第一抗原液和第二抗原液按比例进行混合，得到混合抗原液；
12、s3、佐剂的选择与制备
13、取通过重组dna技术将猪α干扰素基因在表达系统中所表达产生的具有抗病毒活性的猪α干扰素蛋白作为猪α干扰素配合氢氧化铝佐剂得到复合免疫佐剂；
14、s4、耐热保护剂的配备
15、将l-谷氨酸钠、胰蛋白胨、水解乳蛋白、酶解酪蛋白、蔗糖、硫脲、明胶、海藻糖、d-山梨醇、甘氨酸和精氨酸按不同比例制成5种保护剂配方，得到5种耐热保护剂，通过选择不同冻干曲线进行冻干，得到最佳冻干保护剂；
16、s5、配苗
17、将第一抗原液和第二抗原液使用pbs溶液进行稀释，同时加入复合佐免疫佐剂进行搅拌混匀后，并与耐热保护剂按3：1的比例进行混合，然后定量分装进行冻干，得到高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗。
18、使用本技术方案的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗时，通过采用悬浮培养工艺制备的抗原疫苗，可以有效提高病毒毒价，通过抗原稀释和耐热保护剂的按比例配苗，保障了疫苗安全性同时提高了疫苗抗原效率，通过攻毒实验，证明高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗免疫猪对毒株具有良好的保护作用，用于对猪群进行hp-prrs的预防保护。
19、进一步地，所述s1中所使用的生物反应器细胞接种前应用温热的培养基经无菌过滤后注入生物反应器罐体，对其进行多次沌润洗，待微载体完全沉降后排出上清液。
20、进一步地，所述s1中胰酶溶液的预热温度为37度。
21、进一步地，所述s2中的冻融温度为-40度。
22、进一步地，所述s4中的冻干曲线包括4种冻干曲线，每种冻干曲线包括预冻阶段、升华干燥阶段和解析干燥阶段。
23、进一步地，所述s3中的滤棒采用pp2材质深层过滤滤芯。
24、进一步地，所述s2中的最佳接毒时间为细胞生长第四日，最佳收毒时间为接毒后的70—74小时。
25、进一步地，所述pbs溶液的ph值为7.2。
26、(3)有益效果
27、综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
28、1、本专利技术通过采用提取第一抗原液和第二抗原液进行混合，并加入猪α干扰素配合氢氧化铝佐剂得到复合免疫佐剂，采用悬浮培养工艺制备的抗原疫苗，可以有效提高病毒毒价，达到同时预防高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和副猪嗜血杆菌病的效果，避免发生混合感染的情况，同时借助复合免疫佐剂，大大提高了疫苗免疫调节效果，增强疫苗效果，通过抗原稀释和耐热保护剂的按比例配苗，保障了疫苗安全性同时提高了疫苗抗原效率，通过攻毒实验，证明高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗免疫猪对毒株具有良好的保护作用，用于对猪群进行hp-prrs的预防保护；
29、2、本专利技术通过微载体悬浮培养技术提高了生产效率和稳定性，同时降低了生产成本并提高了疫苗质量，通过对耐热保护剂的选择和冻干曲线的优化，实现了对疫苗在2-8℃的长期保存，解决了疫苗不便存放和存放成本高的弊端。
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1.高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于，包括以下制作步骤：
2.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述S1中所使用的生物反应器细胞接种前应用温热的培养基经无菌过滤后注入生物反应器罐体，对其进行多次沌润洗，待微载体完全沉降后排出上清液。
3.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述S1中胰酶溶液的预热温度为37度。
4.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述S2中的冻融温度为-40度。
5.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述S4中的冻干曲线包括4种冻干曲线，每种冻干曲线包括预冻阶段、升华干燥阶段和解析干燥阶段。
6.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述S2中的滤棒采用PP2材质深层过滤滤芯。
7.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述S2中
8.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述PBS溶液的PH值为7.2。
...【技术特征摘要】
1.高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于，包括以下制作步骤：
2.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述s1中所使用的生物反应器细胞接种前应用温热的培养基经无菌过滤后注入生物反应器罐体，对其进行多次沌润洗，待微载体完全沉降后排出上清液。
3.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述s1中胰酶溶液的预热温度为37度。
4.根据权利要求1所述的高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂活疫苗，其特征在于：所述s2中的冻融温度为-40度。
5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：姬星宇，张蒙蒙，张先锋，余社会，丁丽萍，李厚伟，周晓琳，王彦辉，
申请(专利权)人：商丘美兰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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