【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及提高玉米赤霉烯酮水解酶的热稳定性和酸稳定性的方法及t217c-g242c系列突变体、应用。
技术介绍
1、玉米赤霉烯酮(zearalenone，zen)是谷物和农作物中常见的一种具有类雌激素样作用的非甾体类霉菌毒素，又被称为f-2毒素，主要由禾谷镰刀菌(fusariumgraminearum)、黄色镰刀菌(fusarum culmorum)和克地镰刀菌(fusarum crookwellense)等真菌产生，在生产实践中对畜牧业造成严重的危害。
2、微生物降解zen是通过微生物代谢所产生的一种或多种酶协作对毒素进行降解，条件温和，特异性强，不破坏原有营养成分且效率高，是一种环保、高效、实用性强的处理方法。但目前所发现的赤霉烯酮水解酶活性均较低，阻碍了赤霉烯酮水解酶的大规模工业化生产及应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供热稳定性和酸稳定性提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体。
2、本专利技术的再一目的是提供上述玉米赤霉烯酮水解酶突变体的编码基因。
3、本专利技术的再一目的是提供包含上述玉米赤霉烯酮水解酶突变体编码基因的重组载体。
4、本专利技术的再一目的是提供包含上述玉米赤霉烯酮水解酶突变体编码基因的重组菌株。
5、本专利技术的再一目的是提供一种制备热稳定性和酸稳定性提高的玉米赤霉烯酮水解酶的方法。
6、本专利技术的再一目的是提供上述玉米赤霉烯酮水解酶突变体的应用。>
7、本专利技术对玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2进行突变，得到热稳定性和酸稳定性提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其中，母本玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2的氨基酸序列如seq idno:1所示：
8、msttratktvttkdgikwhveqegngpdivlvpdglgecqmfdkpmsiiaasgfrvttfdmpgmsrsrdappetyrdvtghklagyvdtlleelkipiasvwgcssgattvlalcaafpervrnamphelptvnpasvtgmeekdpavisqemaavsrsysggteawdalgpevharlhdnyvrwargypvtippsaptksevlhkrpvdwtvgggtptamffdniviavkeglnigllpgghfpyvshpeafaeyvvetcrkyi。
9、根据本专利技术的具体实施方式，将玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2的第217位和第242位氨基酸由苏氨酸和甘氨酸突变为半胱氨酸得到突变体t217c-g242c或者第76位氨基酸由精氨酸突变为谷氨酰胺得到突变体r76q。
10、根据本专利技术的具体实施方式，将玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2的第217位、第242位和第76位氨基酸由苏氨酸、甘氨酸和精氨酸突变为半胱氨酸、半胱氨酸和谷氨酰胺得到突变体t217c-g242c/r76q。
11、根据本专利技术的具体实施方式，所述玉米赤霉烯酮水解酶突变体t217c-g242c的氨基酸序列seq id no:2所示：
12、msttratktvttkdgikwhveqegngpdivlvpdglgecqmfdkpmsiiaasgfrvttfdmpgmsrsrdappetyrdvtghklagyvdtlleelkipiasvwgcssgattvlalcaafpervrnamphelptvnpasvtgmeekdpavisqemaavsrsysggteawdalgpevharlhdnyvrwargypvtippsaptksevlhkrpvdwtvgggcptamffdniviavkeglnigllpgchfpyvshpeafaeyvvetcrkyi。
13、根据本专利技术的具体实施方式，所述玉米赤霉烯酮水解酶突变体r76q的氨基酸序列seq id no:3所示：
14、msttratktvttkdgikwhveqegngpdivlvpdglgecqmfdkpmsiiaasgfrvttfdmpgmsrsrdappetyqdvtghklagyvdtlleelkipiasvwgcssgattvlalcaafpervrnamphelptvnpasvtgmeekdpavisqemaavsrsysggteawdalgpevharlhdnyvrwargypvtippsaptksevlhkrpvdwtvgggtptamffdniviavkeglnigllpgghfpyvshpeafaeyvvetcrkyi。
15、根据本专利技术的具体实施方式，所述玉米赤霉烯酮水解酶突变体t217c-g242c/r76q的氨基酸序列seq id no:4所示：
16、msttratktvttkdgikwhveqegngpdivlvpdglgecqmfdkpmsiiaasgfrvttfdmpgmsrsrdappetyqdvtghklagyvdtlleelkipiasvwgcssgattvlalcaafpervrnamphelptvnpasvtgmeekdpavisqemaavsrsysggteawdalgpevharlhdnyvrwargypvtippsaptksevlhkrpvdwtvgggcptamffdniviavkeglnigllpgchfpyvshpeafaeyvvetcrkyi。
17、本专利技术提供了编码上述玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2的基因。根据本专利技术的具体实施方式，玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2的基因序列如seq id no：5所示：
18、atgtccaccaccagagccaccaagactgttaccaccaaggatggaattaagtggcatgttgagcaagaaggaaacggtccagacattgtgttggttccagatggtttgggtgagtgtcaaatgtttgataagcccatgtccattattgcagcctccggttttagagtcactacctttgatatgccaggtatgagtagatccagagatgctcctccagaaacttacagagatgttaccggtcataagctggctggttacgttgacactttgcttgaggaattgaagattccaattgcttctgtttggggttgttcctctggtgctactactgttctggccttgtgtgctgcttttccagaaagagttagaaatgccatgccacacgagttgccaactgttaacccagcttctgttactggtatggaggagaaggaccctgctgttatttctcaagaaatggctgctgtttcaagatcatatagtggtggtactgaagcctgggatgctttaggaccagaagttcatgctagacttcatgataattacgttagatgggctagaggttacccagtgactattccaccatctgccccaaccaagtctgag本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提高热稳定性和酸稳定性的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。
2.一种提高玉米赤霉烯酮水解酶的热稳定性和酸稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的玉米赤霉烯酮水解酶ZHDM2进行以下突变:
3.玉米赤霉烯酮水解酶基因，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮水解酶基因编码权利要求1所述的提高热稳定性和酸稳定性的玉米赤霉烯酮水解酶突变体。
4. 根据权利要求3所述的玉米赤霉烯酮水解酶基因，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮水解酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示。
5.包含权利要求3所述玉米赤霉烯酮水解酶基因的重组表达载体。
6.包含权利要求3所述玉米赤霉烯酮水解酶基因的重组表达菌株。
7.一种制备热稳定性和酸稳定性提高的玉米赤霉烯酮水解酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
8.权利要求1所述的
9.权利要求1所述的提高热稳定性和酸稳定性的玉米赤霉烯酮水解酶突变体用于水解玉米赤霉烯酮的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种提高热稳定性和酸稳定性的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4所示。
2.一种提高玉米赤霉烯酮水解酶的热稳定性和酸稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将氨基酸序列如seq id no:1所示的玉米赤霉烯酮水解酶zhdm2进行以下突变:
3.玉米赤霉烯酮水解酶基因，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮水解酶基因编码权利要求1所述的提高热稳定性和酸稳定性的玉米赤霉烯酮水解酶突变体。
4. 根据权利要求3所述的玉米赤霉烯酮水解酶基因，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：涂涛，李岚雪，柏映国，罗会颖，姚斌，田健，秦星，王晓璐，王亚茹，王苑，张杰，苏小运，张红莲，黄火清，于会民，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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