【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及文库构建领域，尤其涉及tn5转座酶在文库构建中的应用。
技术介绍
1、基因组测序在过去的20年里经历了巨大的发展，从一种很少使用的研究工具发展成为一种在临床环境中具有广泛应用的方法。从罕见疾病到癌症，基因组学正在改变我们的生物学知识。基因组学研究工具已解决以前无法诊断疾病的病因，鉴定出跟癌症相关的驱动基因发生的突变，使我们对许多疾病病理生理学有一个全新的理解。基于下一代测序(ngs)常见基因组学工具有靶向基因组(tgp)，全外显子组测序(wes)以及全基因组测序(wgs)。靶向基因组(tgp)是对一定数量的基因进行测序。全外显子组测序(wes)是利用设计好的探针试剂盒将坐标已知的全基因组外显子区域的dna捕捉并富集后，进行高通量测序的基因组分析方法。对于人类基因组来说，外显子区域大概占到基因组的1％，大概在30m左右。与分析基因组有限部分的外显子组测序或靶向重测序等聚焦方法不同，全基因组测序(wgs)是分析整个基因组的全面方法，它能提供整个基因组的全面视图，它是鉴定致病性变异和新基因组组装等探索性应用的理想选择。因此，wgs是最全面的ngs形式之一，有可能识别出更多的生物标志物。wgs获得的遗传信息有助于更好地了解癌症和发现新的生物标志物，从而为未来的患者提供个体化治疗以及精准医疗的价值。
2、全基因组测序(whole genome sequencing，wgs)是利用高通量测序平台对一种生物的基因组中的全部基因进行测序，测定其dna的碱基序列。利用该技术可在全基因组水平上检测单核苷酸变异(snv)、插
3、目前wgs建库所需的基因组dna最少为300ng，基于酶学法wgs建库试剂盒需要的基因组dna起始量最低也要50ng。这些方法都不适用于癌症组学研究一些基因组dna量比较低的样本(1～10ng)，比如显微切割样本或者穿刺样本。
4、因此，亟需一种所需基因组dna量较低的测序方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了tn5转座酶在文库构建中的应用。本专利技术提供的方法可以满足1～10ng基因组dna进行全基因组建库测序的需求，可以解决目前技术无法满足低起始量文库构建的问题。为癌症基因组学研究提供一个低起始文库构建的手段。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了tn5转座酶在文库构建中的应用。
4、上述应用中，所述tn5转座酶制备成tn5 transposomes。
5、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述tn5转座酶的添加量是0.01u/μl～0.2u/μl。
6、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述tn5 transposomes的制备方法包括以下步骤：将测序接头包埋进tn5转座酶中，形成tn5转座子；具体反应系统为：1u/μl的tn5转座酶20μl、50μm退火处理的接头5μl，总计25μl，以上反应体系充分混匀后，25℃恒温1h，即获得tn5转座酶，-20℃保存备用。
7、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述接头为华大基因测序平台的双接头序列，参考专利wo2016058127a1，具体的接头序列包括，双接头序列a、双接头序列b和双接头序列c。其中，双接头序列a为seq id no:1所示序列；双接头序列b为seq id no:2所示序列，双接头序列c为seq id no:3所示序列。
8、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，seq id no:1的序列为：5’-ctgtctcttatacacatct-3’。
9、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，seq id no:2的序列为5’-tcgtcggcagcgtcagatgtgtataagagacag-3’。
10、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，seq id no:3的序列为5’-gtctcgtgggctcggagatgtgtataagagacag-3’。
11、本专利技术还提供了tn5转座酶在制备转座反应体系、文库构建试剂和/或试剂盒中的应用。
12、本专利技术还提供了转座反应体系，包括：5x td buffer和0.01u/μl～0.2u/μltn5转座酶。
13、在本专利技术的一些实施方案中，上述转座反应体系包括：
14、5x td buffer 10μl
15、tn5转座酶 1μl
16、nf h2o 补水到50μl。
17、本专利技术还提供了文库构建试剂，包括上述转座反应体系。
18、本专利技术还提供了试剂盒，包括上述转座反应体系和/或上述文库构建试剂以及可接受的助剂或载体。
19、本专利技术还提供了上述转座反应体系、上述文库构建试剂和/或上述试剂盒在文库构建中的应用。
20、本专利技术还提供了文库的构建方法，取待测样品转座反应后，末端修复、扩增、环化、纯化后，获得所述文库；
21、所述转座反应采用上述转座反应体系、上述文库构建试剂中的所述转座反应体系或上述试剂盒中的所述转座反应体系；
22、所述待测样品和所述tn5转座酶的质量体积比为1:(0.1～3)。
23、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述待测样品的添加量为1ng时，所述tn5转座酶稀释20倍；所述待测样品的添加量为5ng～10ng时，所述tn5转座酶稀释10倍。
24、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述tn5转座酶的原始浓度为0.5～1.5u/μl。
25、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述转座反应的条件包括55℃，反应5min。
26、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述转座反应包括1.8x磁珠纯化的步骤。
27、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述末端修复采用末端反应体系；所述末端反应体系包括：neb buffer 2、klenow fragment(3’->5’exo-)、tagmented dna和dntp mix；和/或
28、所述扩增采用扩增体系；所述扩增体系包括：kapa hifi hotstart ready mix和引物；和/或
29、所述环化采用环化反应体系；所述环化反应体系包括：ta buffer、atp、ad153splint oligo和t4 dna ligas本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.Tn5转座酶在制备转座反应体系、文库构建试剂和/或试剂盒中的应用。
2.转座反应体系，其特征在于，包括：5X TD buffer和0.01U/μL～0.2U/μLTn5转座酶。
3.文库构建试剂，其特征在于，包括如权利要求2所述的转座反应体系。
4.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的转座反应体系和/或如权利要求3所述的文库构建试剂以及可接受的助剂或载体。
5.如权利要求2所述的转座反应体系、如权利要求3所述的文库构建试剂和/或如权利要求4所述的试剂盒在文库构建中的应用。
6.文库的构建方法，其特征在于，取待测样品转座反应后，末端修复、扩增、环化、纯化后，获得所述文库；
7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述末端修复采用末端反应体系；所述末端反应体系包括：NEB buffer 2、Klenow fragment(3’->5’exo-)、TagmentedDNA和dNTPMix；和/或
8.如权利要求6或7所述构建方法获得的文库。
9.如权利要求8所述的文库在制
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤基因组的检测量为1～10ng。
...【技术特征摘要】
1.tn5转座酶在制备转座反应体系、文库构建试剂和/或试剂盒中的应用。
2.转座反应体系，其特征在于，包括：5x td buffer和0.01u/μl～0.2u/μltn5转座酶。
3.文库构建试剂，其特征在于，包括如权利要求2所述的转座反应体系。
4.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的转座反应体系和/或如权利要求3所述的文库构建试剂以及可接受的助剂或载体。
5.如权利要求2所述的转座反应体系、如权利要求3所述的文库构建试剂和/或如权利要求4所述的试剂盒在文库构建中的应用。
6.文库的构...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐讯，罗慧娟，林鹏辉，彭丽花，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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