【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米生物，具体涉及一种植物源仿凋亡细胞外囊泡及其制备方法和应用。
技术介绍
1、根据激活方式的不同将巨噬细胞分为两类：经典激活的(m1型)及替代激活的(m2型)。经典激活的(m1型)受干扰素-γ(ifn-γ)和/或微生物刺激(如脂多糖lps)诱导。m1巨噬细胞表现为促炎性表型，并产生细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、白细胞介素-1β(il-1β)和il-6，对宿主抵抗病原体至关重要。替代激活的(m2型)受白细胞介素-4(il-4)、il-13或il-10诱导，通常与组织修复和重塑相关。m2巨噬细胞产生抗炎细胞因子，如il-10和转化生长因子-β(tgf-β)，以及促进组织修复的细胞外基质蛋白。当感染或炎症严重到足以影响一个器官时，巨噬细胞首先表现出m1表型，释放tnf-α，il-1β，il-12和il-23对抗刺激。但是，如果m1期继续，就会造成组织损伤。因此，m2巨噬细胞分泌大量il-10和tgf-β抑制炎症，有助于组织修复、重塑、血管新生和保持稳态。
2、植物源外囊泡(plant-derived nanovesicles,pnvs)是一种来自植物细胞的脂质双层膜纳米囊泡，直径为30-150nm，可以在细胞外分泌并传递多种生物活性分子，如蛋白质、核酸、次生代谢产物等，具有高生物相容性和稳定性。越来越多的证据表明，植物来源的纳米囊泡可以进入哺乳动物细胞，并介导植物-动物跨界基因调控，这表明植物来源的纳米囊泡在调节人体基本生物过程中具有潜在的医学应用，如免疫系统调节、药物和核酸递送。近年来，越来
3、凋亡细胞外囊泡(apoptotic vesicles，apovs)，即细胞凋亡过程中产生的囊泡，是细胞间通讯的重要媒介，在细胞的生长发育、衰老、更新、肿瘤发生、免疫调节等多种生物学过程中发挥着重要作用。apovs表面的凋亡信号(如磷脂酰丝氨酸ps)与表面受体相结合，调节极化与功能，促进其向m2型转化。这一过程增强的吞噬和抗炎能力，促使其释放抗炎因子如il-10和tgf-β，同时抑制tnf-α、il-6等炎症因子，从而有效抑制炎症并促进组织修复。因此，apovs作为靶向生物活性材料在调节炎症反应和损伤修复治疗具有广阔前景。
4、但是，这同时也面临着一些显著的问题和挑战。现阶段应用于治疗疾病的apovs主要来源于哺乳动物，对于其潜在毒性，包括免疫原性、脱靶效应等，仍需进一步研究和评估。现有的生产方法，主要使用生物反应器(bioreactor)等设备进行大规模细胞培养，但在生物反应器中大规模生产时，如培养基成分、细胞类型、培养时间这些因素的控制可能更加困难，生物反应器中的分离纯化的操作也较为复杂，导致制备得到的apovs的生物活性具有一定波动，从而影响其治疗效果。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种植物源仿凋亡细胞外囊泡的制备及其应用。
2、本专利技术提供了一种植物源仿凋亡细胞外囊泡的制备方法，包括如下步骤：
3、s1、从植物组织提取出植物源外囊泡；
4、s2、将步骤s1所述的植物源外囊泡与含磷脂酰丝氨酸(ps)的溶液共融合，得到植物源仿凋亡细胞外囊泡。
5、本专利技术的植物源仿凋亡细胞外囊泡的制备方法，以天然的植物源外囊泡为原料，经过磷脂酰丝氨酸(ps)修饰，提升了外囊泡的免疫调节能力，为植物源外囊泡仿生修饰提供科学依据。与细胞培育的凋亡细胞外囊泡制备方法相比，本专利技术的制备方法操作简单，制备得到的植物源仿凋亡细胞外囊泡的生物活性比较稳定，对于炎症疾病具有很好治疗效果。
6、进一步，所述制备方法，还包括如下步骤：
7、s3、将步骤s2所述植物源仿凋亡细胞外囊泡以孔径为50nm～400nm挤出过膜，得到相应粒径大小的植物源仿凋亡细胞外囊泡。
8、进一步，步骤s2所述ps为l-α-磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(dpps)或二油酰基磷脂酰丝氨酸(dops)。
9、进一步，步骤s2所述共融合的方法为将步骤s1所述植物源外囊泡与含ps的脂质体(psls)混合，在30～40℃下反应30min～120min。
10、进一步，所述植物源外囊泡与psls混合的数量比为3～6：1～3。
11、进一步，所述psls的制备方法，包括以下步骤：将磷脂与胆固醇溶解混匀、蒸干，得到脂质薄膜；将所述脂质薄膜水化，以功率100w～1000w超声1～30min，得到所述psls。
12、进一步，所述磷脂包括磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰肌醇(pi)中的一种或几种，以及ps。
13、进一步，所述ps与psls的摩尔比为0.5～3.0：7.0～9.5。
14、本专利技术还提供了一种植物源仿凋亡细胞外囊泡，该植物源仿凋亡细胞外囊泡为采用本专利技术提供的制备方法制备得到的植物源仿凋亡细胞外囊泡。
15、本专利技术的植物源仿凋亡细胞外囊泡，来源于天然植物，与哺乳动物细胞来源的凋亡细胞外囊泡相比，具有良好的生物相容性，不易引起机体免疫排斥反应；经过磷脂酰丝氨酸(ps)修饰后，与天然的植物源外囊泡相比，本专利技术的植物源仿凋亡细胞外囊泡，其巨噬细胞靶向性、抑制巨噬细胞炎症反应和改善ra的效果得到了显著提升。
16、本专利技术还提供了一种植物源仿凋亡细胞外囊泡在治疗炎症药物中的应用。
17、为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本专利技术。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种植物源仿凋亡细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2所述PS为L-α-磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(DPPS)或二油酰基磷脂酰丝氨酸(DOPS)。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2所述共融合的方法为将步骤S1所述植物源外囊泡与含PS的脂质体(PSLs)混合，在30～40℃下反应30min～120min。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述植物源外囊泡与PSLs混合的数量比为3～6：1～3。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述PSLs的制备方法，包括以下步骤：将磷脂与胆固醇溶解混匀、蒸干，得到脂质薄膜；将所述脂质薄膜水化，以功率100W～1000W超声1～30min，得到所述PSLs。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)中的一种或几种，
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述PS与PSLs的摩尔比为0.5～3.0：7.0～9.5。
9.一种植物源仿凋亡细胞外囊泡，由权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到。
10.一种如权利要求9所述的植物源仿凋亡细胞外囊泡在治疗炎症药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种植物源仿凋亡细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s2所述ps为l-α-磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(dpps)或二油酰基磷脂酰丝氨酸(dops)。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s2所述共融合的方法为将步骤s1所述植物源外囊泡与含ps的脂质体(psls)混合，在30～40℃下反应30min～120min。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述植物源外囊泡与psls混合的数量比为3～6：1～3。
6.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员：张光林，曾戎，陈洁，李翔，于白音，
申请(专利权)人：韶关学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。