【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种与谷子籽粒脂肪含量相关的分子标记、kasp引物对及其应用。
技术介绍
1、人体内可合成某些饱和与单不饱和脂肪酸，但不能合成维持机体正常生长所需的一些脂肪酸(称为必需脂肪酸)，如亚油酸和亚麻酸等，只能从食物中获得。随着生活水平的提高，人们对食品的营养要求越来越高，植物中的饱和脂肪酸含量较动物脂肪少40％～50％，大大降低了人们由于长期摄入大量饱和脂肪酸进而引起高血压、冠心病的可能性。人们对脂肪的摄入由动物脂肪逐渐转向植物油，进而对饱和脂肪酸含量低、不饱和脂肪酸含量高的植物油的需求逐渐提高。
2、谷子，又称“粟”，脱壳后称为“小米”，是一种重要的杂粮作物，其籽粒富含均衡的蛋白质、碳水化合物和脂肪，还含有人体所需的氨基酸、磷、铁以及维生素(维生素a、b、c和d)等多种营养成分。小米中脂肪储存于胚芽和糊粉层，脂肪的平均含量为4.05％，高于稻米和小麦，低于玉米。小米中的脂肪含有丰富的亚油酸、亚麻酸和花生酸等人体必需脂肪酸，其中不饱和脂肪酸含量超过80％，具有抗炎、预防与治疗动脉硬化等多种功效。因此开发检测小米脂肪含量的有效分子标记，高效辅助选育具有高脂肪含量的小米是育种的迫切要求。
3、小米脂肪(粗脂肪)含量是复杂的数量性状，受多基因和各种环境条件控制。目前，仅验证了少量与大豆油脂合成、百粒重相关功能的qtl(quantitative trait locus)和基因，并且使用传统育种方法难以简单有效地提高小米粗脂肪含量。发掘谷子籽粒中脂肪相关的基因位点并开发相关分子标记，不仅
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种与谷子籽粒脂肪含量相关的分子标记、kasp引物对及其应用，快速筛选和鉴定谷子籽粒脂肪含量性状，提高高籽粒脂肪含量谷子的选育效率。
2、本专利技术提供了一种与谷子籽粒脂肪含量相关的分子标记，所述分子标记位于谷子基因组第5号染色体上第45054761bp处，且单核苷酸多态性为g/a。
3、优选的，所述分子标记位于如seq id no.1所示核苷酸序列的151bp处，且单核苷酸多态性为g/a。
4、本专利技术还提供了一种鉴定上述技术方案所述分子标记的kasp引物对，包括正向引物1、正向引物2和反向引物；
5、所述正向引物1包括如seq id no.2所示的核苷酸序列；所述seq id no.2所示的核苷酸序列的5'端含有荧光标记1；
6、所述正向引物2包括如seq id no.3所示的核苷酸序列；所述seq id no.3所示的核苷酸序列的5'端含有荧光标记2；
7、所述反向引物包括如seq id no.4所示的核苷酸序列；
8、所述荧光标记1和荧光标记2产生的颜色不同。
9、优选的，所述荧光标记1为fam标记；所述荧光标记2为hex标记。
10、本专利技术还提供了一种鉴定上述技术方案所述分子标记的试剂盒，所述试剂盒包含上述技术方案所述kasp引物对。
11、本专利技术还提供了上述技术方案所述分子标记或kasp引物对或试剂盒在下述一项或多项中的应用：
12、(1)鉴定或辅助鉴定谷子籽粒脂肪含量；
13、(2)区分高籽粒脂肪含量谷子和低籽粒脂肪含量谷子品系或品种；
14、(3)培育或辅助培育具有高或低的籽粒脂肪含量性状的谷子单株、株系、品系或品种；
15、(4)筛选或辅助筛选具有高或低的籽粒脂肪含量性状的谷子单株、株系、品系或品种；
16、(5)制备用于检测谷子或谷子杂交后代的籽粒脂肪含量性状的产品；
17、(6)制备用于区分高籽粒脂肪含量谷子和低籽粒脂肪含量谷子的产品；
18、(7)制备用于培育或辅助培育具有高或低的籽粒脂肪含量性状的谷子单株、株系、品系或品种的产品；
19、(8)制备用于筛选或辅助筛选具有高或低的籽粒脂肪含量性状的谷子单株、株系、品系或品种的产品。
20、本专利技术还提供了一种鉴定谷子籽粒脂肪性状的方法，包括如下步骤：
21、以待鉴定谷子的基因组dna为模板，利用上述技术方案所述kasp引物对进行pcr扩增，得到扩增产物；
22、对所述扩增产物进行荧光检测，根据荧光信号进行判定：
23、若只检测到正向引物f1对应的荧光信号，则所述待鉴定谷子的基因分型结果为gg，所述待鉴定谷子具低籽粒脂肪含量性状；
24、若只检测到正向引物f2对应的荧光信号，则所述待鉴定谷子的基因分型结果为aa，所述待鉴定谷子具有高籽粒脂肪含量性状；
25、若同时检测到正向引物f1和正向引物f2对应的荧光信号，则所述待鉴定谷子的基因分型结果为ga，所述待鉴定谷子具有高籽粒脂肪含量性状。
26、优选的，所述基因组dna包括叶片基因组dna。
27、优选的，所述pcr扩增的体系以10μl计，包括：higeno 2×probe mixa溶液5μl，100μmol/l snpprimermix溶液0.14μl，基因组dna4～50ng和余量的无菌水；
28、所述snpprimermix溶液中100μmol/l正向引物1、100μmol/l正向引物2和100μmol/l反向引物的体积比为1：1：3。
29、优选的，所述pcr扩增的程序为：95℃预变性10min；95℃变性20s，55℃～61℃延伸40s，10个循环；95℃变性20s，55℃延伸40s，31个循环。
30、有益效果：
31、本专利技术提供了一种与谷子籽粒脂肪含量相关的分子标记，位于谷子基因组第5号染色体上第45054761bp处，且单核苷酸多态性为g/a；当谷子的基因型为aa或ga时，具有高籽粒脂肪含量性状；当谷子的基因型为gg型时，具有低籽粒脂肪含量性状。本专利技术所述分子标记与谷子籽粒脂肪含量相关，能将高籽粒脂肪含量谷子和低籽粒脂肪含量谷子区分开。
32、本专利技术基于上述分子标记开发kasp引物对，能够对谷子籽粒脂肪含量相关进行选择，只需通过简单的基因组dna提取、pcr扩增、kasp基因分型检测，即可完成对样品的快速且高通量检测，区分高籽粒脂肪含量谷子和低籽粒脂肪含量谷子，用于鉴定谷子籽粒脂肪含量性状是切实有效的，可应用谷子育种及高品质遗传改良应用研究，为提谷子脂肪含量的育种应用提供一种新选择。
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1.一种与谷子籽粒脂肪含量相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于谷子基因组第5号染色体上第45054761bp处，且单核苷酸多态性为G/A。
2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的151bp处，且单核苷酸多态性为G/A。
3.一种鉴定权利要求1或2所述分子标记的KASP引物对，其特征在于，包括正向引物1、正向引物2和反向引物；
4.根据权利要求3所述的KASP引物对，其特征在于，所述荧光标记1为FAM标记；所述荧光标记2为HEX标记。
5.一种鉴定权利要求1或2所述分子标记的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求3或4所述KASP引物对。
6.权利要求1或2所述分子标记或权利要求3或4所述KASP引物对或权利要求5所述试剂盒在下述一项或多项中的应用：
7.一种鉴定谷子籽粒脂肪性状的方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述基因组DNA包括叶片基因组DNA。
9.根据权利要求7
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃预变性10min；95℃变性20s，55℃～61℃延伸40s，10个循环；95℃变性20s，55℃延伸40s，31个循环。
...【技术特征摘要】
1.一种与谷子籽粒脂肪含量相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于谷子基因组第5号染色体上第45054761bp处，且单核苷酸多态性为g/a。
2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于如seq id no.1所示核苷酸序列的151bp处，且单核苷酸多态性为g/a。
3.一种鉴定权利要求1或2所述分子标记的kasp引物对，其特征在于，包括正向引物1、正向引物2和反向引物；
4.根据权利要求3所述的kasp引物对，其特征在于，所述荧光标记1为fam标记；所述荧光标记2为hex标记。
5.一种鉴定权利要求1或2所述分子标记的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求3或4所述kasp引物对。
6.权利要求1或2所述分子标记或权...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯思宇，陈龙，孙朝霞，韩渊怀，袁佳琦，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：
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