【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种持留状态沙门氏菌复苏模型的构建方法。
技术介绍
1、沙门氏菌，作为一种广泛分布的革兰氏阴性食源性致病菌，其对食品安全和公共卫生构成了严峻的挑战。这种细菌能够通过污染肉类、蛋类和乳制品等食品，传播给人类，引起一系列严重的疾病，包括伤寒、急性肠胃炎和败血症。特别地，当沙门氏菌侵入血液组织时，其引发地系统性炎症可能导致致命后果。
2、在食品加工储藏过程中，沙门氏菌可能会遇到极端ph、限制营养物质、低温和高渗透压等不利环境。这些条件会促使沙门氏菌进入持留状态。持留状态是沙门氏菌面对不利于自身生存环境条件时，所采取的一种适应性生存策略。在这种状态下，沙门氏菌生长缓慢或进入休眠状态，并且这种表型是不可以遗传的。当不利环境消失后，处于持留状态的沙门氏菌能够复苏，重新对周围环境和人类安全构成威胁。目前鲜少见有关持留状态细菌复苏的研究。
3、持留状态细菌复苏模型对了解以及预防持留状态细菌复苏的重要数据基础。因此，通过测定持留状态沙门氏菌复苏过程中od600值变化，对数据进行模型拟合。该模型为持留状态细菌复苏模型的研究提供了数据支撑。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种持留状态沙门氏菌复苏模型的构建方法，可以通过模型了解持留状态沙门氏菌的复苏情况，模型值与实验数据偏差较小，可较好的拟合持留状态细菌复苏与时间关系。
2、本专利技术采用的技术方案是：
3、一种持留状态沙门氏菌复苏模型的构建方法，所述方法包括以下步骤：.
4、(
5、(2)向步骤(1)培养的沙门氏菌菌液中加入环丙沙星母液，培养；
6、(3)将步骤(2)培养所得的菌液离心，所得沉淀物即为含有持留状态沙门氏菌的物质，沉淀物中的活菌即为持留状态沙门氏菌；
7、(4)向lb肉汤培养基中加入步骤(3)离心得到的持留状态沙门氏菌，培养复苏；
8、(5)在步骤(5)复苏的过程中，从0分钟开始，每隔5分钟用酶标仪测其od600值。
9、(6)用式(1)的非线性模型进行沙门氏菌持留菌复苏曲线拟合
10、y＝c+a1e-at+a2e-bt (1)
11、其中，t为培养复苏时间，单位为分钟；a为正常状态细胞的生长率；b为从持留状态到正常状态的转换率；c为达到平稳时菌液od600值；a1为影响正常状态细胞生长的潜在因素；a2为影响持留状态细胞复苏的潜在因素；y为t时菌液的od600值，a，b分别为非线性方程待拟合的参数；
12、非线性拟合求出a、b。
13、非线性拟合求出a、b后，可以得到持留菌复苏od600值变化与时间的关系如下式(2)，
14、y＝c+a1e-at+a2e-bt＝0.21787-0.08087×e-0.02116t-0.004×e-98.57626t (2)
15、进一步，本专利技术使用鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)，编号atcc14028，由国家轻工业食品质量监督检测南京站提供。
16、步骤(1)中，所述的沙门氏菌菌液的制备方法为将沙门氏菌过夜活化得到活化液，再将沙门氏菌活化液加入到低水分活度lb肉汤培养基中在37℃培养至菌数为108cfu/ml。
17、步骤(1)中，所述的低水分活度lb肉汤培养基的制备方法为调整lb肉汤培养基中nacl的质量分数为2％。
18、步骤(2)中，所述的环丙沙星母液中，环丙沙星的浓度为1000μg/ml以上，优选为1280μg/ml，溶剂为0.7vt％磷酸水溶液。
19、步骤(2)中，控制环丙沙星母液的加入量，使其终浓度为环丙沙星对沙门氏菌最低抑菌浓度的25-100倍，优选为50倍。
20、步骤(3)中，所述的沙门氏菌持留菌的分离方法为将50倍最低抑菌浓度的环丙沙星溶液加入到沙门氏菌菌液中，在37℃下培养4小时，再离心得到沙门氏菌持留菌。
21、步骤(4)中，沙门氏菌持留菌复苏培养条件温度为37℃。
22、步骤(5)中，测定不同时间下持留状态沙门氏菌的复苏情况，每隔5分钟取出100μl菌液，采用酶标仪，设置吸光值为600nm测其od600值。
23、一般每个时间点做3次重复实验，取3次实验平均值。
24、本研究中细菌的od600值变化以平均值及标准偏差的形式表示，以microsoftexcel 2021进行数据处理。本研究以origin 2021软件中非线性拟合功能对数据拟合。
25、本专利技术还提供一种持留状态沙门氏菌复苏模型，如下式(2)所示：
26、y＝c+a1e-at+a2e-bt＝0.21787-0.08087×e-0.02116t-0.004×e-98.57626t (2)
27、其中，t为培养复苏时间，单位为分钟；a为正常状态细胞的生长率；b为从持留状态到正常状态的转换率；c为达到平稳时菌液od600值；a1为影响正常状态细胞生长的潜在因素；a2为影响持留状态细胞复苏的潜在因素；y为t时菌液的od600值。
28、本专利技术在建立模型时发现，在持留状态沙门氏菌复苏过程中，随时间延长，持留状态沙门氏菌的复苏呈现非线性规律，复苏呈现趋势十分平缓。本专利技术中利用非线性方程拟合细菌od600值与时间关系，两者呈现较为显著的非线性关系，模型的校正相关系数r2为0.99142，残差平方和较低，表明模型预测值与实验数据偏差较少，可以较好的拟合细菌od600值与时间关系。
29、本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种持留状态沙门氏菌复苏模型的构建方法，并通过该模型能够准确、客观、定量的反应持留状态沙门氏菌持留菌的复苏情况，为持留状态沙门氏菌复苏相关研究提供数据基础，有利于持留状态沙门氏菌的控制和风险预警、评估。
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1.一种持留状态沙门氏菌复苏模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的低水分活度LB肉汤的制备方法为调整LB肉汤培养基中NaCl的质量分数为2％。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的沙门氏菌菌液的制备方法为将沙门氏菌过夜活化得到活化液，再将活化液加入到低水分活度LB肉汤培养基中培养至菌数为108CFU/mL。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的环丙沙星母液中，环丙沙星的浓度为1280μg/mL以上，溶剂为0.7vt％磷酸水溶液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，控制环丙沙星母液的加入量，使其最终浓度为环丙沙星最低抑菌浓度的50倍。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中持留状态沙门氏菌的复苏温度为37℃。
7.按照权利要求1所述的方法建立得到持留状态沙门氏菌复苏模型，其特征在于如下式(2)
【技术特征摘要】
1.一种持留状态沙门氏菌复苏模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的低水分活度lb肉汤的制备方法为调整lb肉汤培养基中nacl的质量分数为2％。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的沙门氏菌菌液的制备方法为将沙门氏菌过夜活化得到活化液，再将活化液加入到低水分活度lb肉汤培养基中培养至菌数为108cfu/ml。
4.如权利要求1所述的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔晓文，俞皖，王刘玺，杨天羽，王煜，郭梦凡，李雪娜，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：
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