【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业育种，具体涉及一种采用ems诱变剂创制大花海棠耐寒突变体的方法。
技术介绍
1、大花海棠“比哥”begoniaⅹbenariensis‘big’是多年生草本花卉，隶属于秋海棠科begoniaceae c.agardh，秋海棠属begonial.。秋海棠属为多年生草本植物。由于其叶片形状多样、叶色鲜艳、叶纹丰富、花朵艳丽，且部分品种具有香味而著称，是一种极具开发前景的草本观赏植物，其中一些品种还可作药用、食用、饮用或作为动物饲料。秋海棠属植物作为一种广泛应用的花卉之一，具有很高的观赏价值和科学研究价值。
2、大花海棠为多年生草本植物，花期长且在温暖环境下可全年开花，然而其耐寒性差，气温15℃以上仍可正常生长。气温低于10℃时，植株停止生长，叶片易被冻伤而枯萎。当温度降至0℃，植株将出现大量死亡现象。我国南方冬季最低气温一般在零下5℃左右，在露天种植秋海棠属植物时，通常面临无法安全越冬的困境，导致大量植株死亡。因此，培育耐寒性强的新品种大花海棠迫在眉睫。目前通过杂交育种的方法筛选耐寒性强的大花海棠，这不仅需要漫长的周期，还需要面对在控制多基因的数量性状及隐性基因上积累多重抗性基因遗传优化过程中的挑战；而常规的化学诱变或辐射诱变因其突变的方向性是难以预测和控制的，所以往往很难筛选到符合目标性状的植株，即使筛选到耐寒植株，其在低温环境的存活率也很难令人满意。
3、综上所述，目前急需提供一种制备耐低温大花海棠的新方法。
技术实现思路
1、本专利技术的
2、本专利技术所采用的技术方案是：本专利技术提供了一种采用ems诱变剂创制大花海棠耐寒突变体的方法。包括以下步骤：
3、制备大花海棠的四周愈伤组织；在无菌环境下将四周愈伤组织进行甲基磺酸乙酯处理，处理后切除四周愈伤组织上受损部位，得到接种组织，所述处理的条件是在体积分数为0.2％～0.6％的甲基磺酸乙酯中，避光浸泡2h～4h；接种组织接种至不定芽分化培养基上培养，然后转移至生根培养基上培养，获得大花海棠突变体；将大花海棠突变体接种至羟脯氨酸生根苗培养基培养，再转移至不含羟脯氨酸的生根苗培养基中恢复培养，获得耐羟脯氨酸变异植株，所述羟脯氨酸生根苗培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1mmol～1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg～1.2mg萘乙酸、30g～32g蔗糖和7g～8g琼脂；所述不含羟脯氨酸的生根苗培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1mmol～1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg～1.2mg萘乙酸、30g～32g蔗糖和7g～8g琼脂；将耐羟脯氨酸变异植株培养至成苗，低温胁迫，复温，获得大花海棠耐寒突变体，所述低温胁迫的条件为：-5℃～-8℃，连续低温胁迫12h～13h。
4、优选地，所述处理的条件是在体积分数为0.4％的甲基磺酸乙酯中，浸泡4h，转速70rpm。
5、优选地，所述羟脯氨酸生根苗培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg萘乙酸、30g蔗糖和7g琼脂。
6、优选地，所述大花海棠为绿叶红花型大花海棠。
7、优选地，所述复温的条件为：在24小时内温度匀速升高至25℃。
8、优选地，制备所述四周愈伤组织的步骤为：采取大花海棠嫩叶，清洗，在无菌环境消毒清洗后，切成1cm2～1.5cm2的叶片，叶片的叶面朝上接种到诱导愈伤组织培养基中，预培养28天～29天，获得四周愈伤组织。
9、优选地，所述在无菌环境消毒清洗的过程为：将大花海棠嫩叶用无菌水清洗一遍，用体积分数70％～75％酒精消毒30s～40s，加入质量分数0.1％～0.15％的hgcl2消毒8min～10min，弃去hgcl2，灭菌水清洗3～5次，每次洗涤时间3min～5min，吸干大花海棠嫩叶表面水分。
10、优选地，所述分化培养基的配方为：每升ms液体培养基中加入1mg～1.2mg的6-苄氨基腺嘌呤、0.2mg～0.3mg萘乙酸、30g～32g蔗糖、7g～8g的琼脂；所述生根培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1mg～1.2mg萘乙酸、30g～32g蔗糖和7g～8g琼脂。
11、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
12、本专利技术提供了一种采用ems诱变剂创制大花海棠耐寒突变体的方法，包括以下步骤：在无菌环境下将四周愈伤组织进行甲基磺酸乙酯处理，处理后切除四周愈伤组织上受损部位，得到接种组织，所述处理的条件是在体积分数为0.2％～0.6％的甲基磺酸乙酯中，避光浸泡2h～4h；接种组织接种至不定芽分化培养基上培养，然后转移至生根培养基上培养，获得大花海棠突变体；将大花海棠突变体接种至羟脯氨酸生根苗培养基培养，再转移至不含羟脯氨酸的生根苗培养基中恢复培养，获得耐羟脯氨酸变异植株，所述羟脯氨酸生根苗培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1mmol～1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg～1.2mg萘乙酸、30g～32g蔗糖和7g～8g琼脂；所述不含羟脯氨酸的生根苗培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1mmol～1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg～1.2mg萘乙酸、30g～32g蔗糖和7g～8g琼脂；将耐羟脯氨酸变异植株培养至成苗，低温胁迫，复温，获得大花海棠耐寒突变体，所述低温胁迫的条件为：-5℃～-8℃，连续低温胁迫12h～13h。
13、本专利技术通过设置ems诱变的处理时间及诱变浓度，保证了半数致死率和诱变效率，继续对ems诱变愈伤组织得到的生根苗的培养基中加入不同浓度hyp，进行hyp定向筛选抗寒植株，得到最适合的hyp选择压，提高了突变体筛选效率也得到了耐寒性更强的植株。本专利技术通过添加耐羟脯氨酸筛选变异植株进一步结合低温胁迫、受害表型鉴定，可快速确定耐寒变异植株。通过本专利技术所述方法制备的大花海棠抗寒性强且适宜在我国长三角地区大范围推广，同时也为后续秋海棠属植物育种研究提供新材料。
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1.一种采用EMS诱变剂创制大花海棠耐寒突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理的条件是在体积分数为0.4％的甲基磺酸乙酯中，浸泡4h，转速70rpm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羟脯氨酸生根苗培养基的配方为：每升1/2MS液体培养基中加入1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg萘乙酸、30g蔗糖和7g琼脂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大花海棠为绿叶红花型大花海棠。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复温的条件为：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备所述四周愈伤组织的步骤为：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述在无菌环境消毒清洗的过程为：
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化培养基的配方为：
【技术特征摘要】
1.一种采用ems诱变剂创制大花海棠耐寒突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理的条件是在体积分数为0.4％的甲基磺酸乙酯中，浸泡4h，转速70rpm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羟脯氨酸生根苗培养基的配方为：每升1/2ms液体培养基中加入1.5mmol羟脯氨酸、1.0mg萘乙酸、30g蔗糖和7g琼脂。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：高俊山，赵怡，张文静，陈彩霞，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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