包含用于治疗癌症及感染性疾病的热休克蛋白或α2-巨球蛋白的组合物制备方法技术

本发明专利技术涉及预防和治疗感染性疾病及癌症的方法及组合物。本发明专利技术的方法包括将抗原细胞或病毒颗粒的一组抗原蛋白或抗原肽与一种或几种不同的热休克蛋白在体外形成复合物。该组抗原蛋白或抗原肽或用于产生抗原肽的蛋白制品至少包括抗原细胞或病毒颗粒中不同蛋白的至少５０％或是至少５０种不同的蛋白。抗原肽的制备方法包括用一种或几种蛋白酶消化抗原细胞、其细胞组分或病毒颗粒的蛋白制品，或将蛋白制品暴露于ＡＴＰ、盐酸胍和／或酸性条件中。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术要求2001年8月21日提交的美国临时专利申请No.60/313,629和2001年12月6日提交的No.60/337,222的权益，上述两项申请在此完整地引入作为参考。本专利技术是在政府的支持下完成的，国立卫生院授权号为CA/A184479。政府享有本专利技术的某些权利。1、引言本专利技术涉及预防和治疗感染性疾病，及原发性和转移性肿瘤疾病的方法和组合物。在感染性疾病及癌症的预防和治疗实践中，将包含来源于抗原细胞和/或其消化产物的胞浆及膜来源蛋白的组合物，与热休克蛋白和/或α2-巨球蛋白形成复合物，以增强对肿瘤及感染性病原(agent)的免疫应答。2、专利技术背景2.1热休克蛋白热休克蛋白(HSPs)，亦称为应激蛋白，最初鉴定为细胞在热休克反应时合成的蛋白。根据分子量的不同将HSPs分为五大家族HSP100、HSP90、HSP70、HSP60和smHSP。随后发现家族中的许多成员可在包括营养缺失、代谢紊乱、氧自由基、缺氧和细胞内病原体感染在内的其他应激性刺激反应中诱导产生(见Welch，1993，5，Scientific American，56-64；Young，1990，Annu.Rev.Immunol.，8401-420；Craig，1993，Science，2601902-1903；Gething等，1992，Nature 35533-45；Lindquist等，1988，Annu.Rev.Genetics 22631-677)。对热休克及其他生理性应激产生的细胞反应进行研究，发现HSPs不仅参与这些不利情况下的细胞保护，而且参与未应激细胞中的基本生化和免疫过程。HSPs可完成各种不同的分子伴侣功能。例如，定位于细胞胞浆、细胞核、线粒体或内质网的HSP70家族成员(Lindquist等，1988，Ann.Rev.Genetics，22631-677)参与正常细胞的蛋白转运、折叠和装配。HSPs可与蛋白或多肽结合，在酸性条件或有三磷酸腺苷存(ATP)存在的条件下释放所结合的蛋白或多肽(Udono和Srivastava，1993，J.Exp.Med.1781391-1396)。Srivastava等研究了针对甲基胆蒽所诱导近亲繁殖小鼠肉瘤的免疫应答(1998，Immunol.Today，978-83)。在这些研究中发现负责对这些肿瘤产生不同免疫原性的分子是96kDa的糖蛋白(gp96)和84～86kDa的细胞内蛋白(Srivastava等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，833407-3411；Ullrich等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，833121-3125)。用从特定肿瘤分离的gp96或p84/86接种小鼠可使该小鼠对这种特定的肿瘤产生免疫力，但对抗原截然不同的肿瘤则无免疫力。对编码gp96和p84/86的基因进行分离、鉴定，发现两者之间有着明显的同源性，显示gp96和p84/86分别为同一热休克蛋白在内质网和胞浆的存在形式(Srivastava等，1988，Immuogenetics，28205-207；Srivastava等，1991，Curr.Top.Microbiol.Immunol.，167109-123)。另外，发现HSP70可激发对其源性肿瘤的免疫应答，对抗原性截然不同的肿瘤则不能激发免疫应答。但是，和肽相脱离的HSP70丧失了其免疫原活性(Udono和Srivastava，1993，J.Exp.Med.，1781391-1396)。这些观察结果表明单独的热休克蛋白本身不具备免疫原性，但可与抗原肽形成非共价复合物，该复合物激发对该抗原肽的特异性免疫应答(Srivastava等，1993，Adv.Cancer Res.，62153-177；Udono等，1994，J.Immunol.，1525398-5403；Suto等，1995，Science，2691585-1588)。从肿瘤细胞提纯的HSPs和肽的非共价复合物可用于治疗和预防癌症，其见于1996年4月11日提交的WO96/10411号PCT出版物和1997年3月20日提交的WO97/10001号PCT出版物(分别为于1998年5月12日公布的No.5,750,119号美国专利和于1998年11月17日公布的No.5,837,251号美国专利，将其完整在此引入作为参考)。HSP-肽复合物的分离和纯化已有描述，如从病原体感染细胞分离，并应用于诸如病毒、包括细菌、原生动物、真菌和寄生虫在内的其他细胞内病原体等所致感染的治疗和预防(实例见1995年9月21日提交的WO95/24923号PCT出版物)。也可将应激蛋白和抗原肽形成复合物来制备免疫原性应激蛋白-抗原复合物，1997年3月20日提交的WO97/10001号PCT出版物(于2000年2月29日公布的No.6,030,618号美国专利)描述了该类化合物在癌症和感染性疾病治疗和预防中的应用。1997年3月20日提交的WO97/10002号PCT出版物(同时见于1999年11月16日公布的No.5,985,270号美国专利)描述了使用应激蛋白-抗原复合物在体外致敏用于过继免疫治疗的抗原呈递细胞。2.2.α2-巨球蛋白α2-巨球蛋白是包含C3、C4、C5补体成分的结构相关蛋白超家族的成员。人类血浆蛋白α2-巨球蛋白(α2M)是720kDa的同源四聚体蛋白，最初认为它是蛋白酶及血浆和炎性流体蛋白酶清道夫分子(综述见Chu和Pizzo，1994，Lab.Invest.，71792)。α2M以包含1474个氨基酸残基的前体形式合成。前23个氨基酸充当信号肽，将其切割后产生包含1451个氨基酸残基的成熟蛋白(Kan等，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，822282-2286)。α2M以共价结合的方式与含亲核氨基酸侧链的蛋白和肽链混杂地结合(Chu等，1994，Ann.N.Y.Acad.Sci.，737291-307)，并将它们导向表达α2M受体(α2MR)的细胞(Chu和Pizzo，1993，J.Immunol.，15048)。α2M和α2M受体的结合由α2M羧基端部分介导(Holtet等，1994，FeBS Lett.，344242-246)，关键的残基已得以鉴定(Nielsen等，1996，J.Biol.Chem.，27112909-12912)。众所周知，α2M具有抑制蛋白酶的活性，它通过多个结合位点与各种蛋白酶结合(例如Hall等，1981，Biochem.Biophys.Res.Commun.，100(1)8-16)。蛋白酶与α2M的相互作用，导致复杂的结构重排，称作“转化”。这是蛋白酶被硫酯捕获后在α2M的“饵(bait)”区内切割的结果。构象的改变暴露出受体结合所需的残基，使α2M-蛋白酶复合物可以与α2MR结合。甲胺可以诱导与蛋白酶类似的构象改变和切割。α2M在未切割前的形态不能被其受体识别，这种形态称为“慢形态”(s-α2M)。切割后的形态则称为“快形态”(f-α2M)(综述见Chu等，1994，Ann.N.Y.Acad.Sci.，737291-307)。最近也发现α2MR可与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备热休克蛋白与抗原蛋白复合物的方法，该方法包括将一组来源于抗原细胞或病毒颗粒的抗原蛋白与一种或几种不同的热休克蛋白在体外形成复合物，其中该组抗原蛋白分别包含抗原细胞或病毒颗粒，或存在于抗原细胞的细胞组分中不同蛋白的至少５０％，或至少５０种不同蛋白。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：PK斯里瓦斯塔瓦，
申请(专利权)人：康涅狄格大学健康中心，
类型：发明
国别省市：US[美国]