【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种乳铁蛋白纳米药物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、目前，乳腺癌已取代肺癌成为全球第一大癌症，可通过手术、放疗、化疗、内分泌治疗和靶向治疗等方法治疗乳腺癌，但是大部分化疗药物在杀死肿瘤细胞的同时对正常组织也造成严重损害，限制了其临床应用。纳米给药系统可在分子水平上对药物的递送和释放进行控制，通过改善药物溶解度和药动学特征，实现药物在肿瘤部位的被动或主动靶向释药，从而增强药物疗效并显著降低药物的全身毒副作用；但是最新的临床数据分析结果表明，纳米制剂仅仅提高了化疗的安全性，并没有显著提高化疗药物的抗肿瘤效果。通过化学动力学疗法与其他疗法(如放疗、光热疗法、光动力疗法、免疫疗法等)的联合应用，通常能够达到单一治疗方法无法实现的治疗效果，并且不同肿瘤杀伤机制的联合应用能够克服多药耐药性，减少用药剂量。
2、双氢青蒿素(dha)作为铁死亡和免疫原性细胞死亡(icd)的诱导剂，研究表明它可以诱导铁死亡并调节免疫功能以对抗肿瘤由于其铁死亡和免疫疗法的双重作用，dha一直被认为是一种极好的抗肿瘤剂。值得注意的是，fe2+由于dha所需的内过氧化物桥断裂，dha发挥其治疗作用至关重要。由于肿瘤细胞的增殖和生长，fe2+在癌细胞中极度消耗，不利于dha破坏内过氧化物桥，发挥治疗作用。另一个障碍是dha的水溶性差，血液循环半衰期短，极大地限制了其在抗肿瘤中的应用解决铁缺乏的问题在肿瘤细胞中，dha的水溶性成为一项关键指标。解决fe2+在肿瘤细胞中缺乏的问题和dha的水溶性成为关键的问题。
3、本
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一是提供一种乳铁蛋白纳米药物，由乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素制成，乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素的质量比为1：1：1-30：1：1。优选地，乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素的质量比为6：1：1-14：1：1。
2、本专利技术的目的之二是提供上述乳铁蛋白纳米药物的制备方法，分别将双氢青蒿素和氯化血红素溶于不同的有机溶剂中，然后将两种溶液混合，在搅拌条件下将混合溶液加至乳铁蛋白水溶液中，超声，制得乳铁蛋白纳米药物。
3、进一步地，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、乙醇、甲醇、丙酮和四氢呋喃。
4、更进一步地，所述双氢青蒿素溶于乙醇，所述氯化血红素溶于二甲基亚砜。
5、进一步地，所述有机溶剂和水的体积比为1：1：4-1：1：16。
6、进一步地，所述搅拌速度为200-800r/min，超声条件为50-200w、3-10min。
7、在本专利技术的一个实施例中，双氢青蒿素、氯化血红素的乳铁蛋白的质量比为1:1:10，无水乙醇、二甲基亚砜和水的体积比为1:1:14。
8、本专利技术的目的之三是提供上述乳铁蛋白纳米药物在制备肿瘤治疗药物中的应用。优选地，所述肿瘤为乳腺癌。
9、本专利技术以乳铁蛋白为载体，双氢青蒿素和氯化血红素通过反溶剂法进入到乳铁蛋白的内部疏水腔，形成蛋白纳米药物，两药协同抗肿瘤效果更加显著。双氢青蒿素为具有活性羟基的青蒿素衍生物，氯化血红素为天然血红素的体外纯化形式，乳铁蛋白是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白，这三种物质对于正常细胞均没有毒性，并且在作用机制上起到了“1+1大于2”的协同抗肿瘤效果。
10、本专利技术选用乳铁蛋白作为制剂的载体，可以增强药物的溶解度和生物利用度，增强的生物稳定性和保留性，以及通过主动靶向递送提高到达预期位点的能力。同时乳铁蛋白也具有一定的抗肿瘤活性以及免疫调节功能。
11、乳铁蛋白受白蛋白-紫杉醇纳米颗粒成功的启发，基于蛋白质的纳米医学的最新进展产生了用于治疗癌症和病毒感染等具有挑战性的疾病的新疗法。然而，缺乏特异性药物靶向、药代动力学差、药物过早释放和脱靶毒性仍然是临床上的巨大挑战。因此，开发了替代的基于蛋白质的纳米药物来克服这些挑战。在这方面，乳铁蛋白(lf)是转铁蛋白家族的一种糖蛋白，可以特异性识别肿瘤细胞膜上过表达的转铁蛋白受体，它提供了一种有前途的可生物降解的耐受性良好的材料，可作为活性治疗和药物纳米载体使用。lf的主要药理作用，包括抗癌、抗病毒和免疫调节作用。
12、将双氢青蒿素(dha)和氯化血红素(hemin)负载在乳铁蛋白上，当纳米药物到达肿瘤组织。进入癌细胞内的溶酶体被降解，释放出dha和hemin，hemin通过与细胞内gsh(在肿瘤细胞中高表达)反应，生产的fe2+可诱导fenton/fenton样反应，通过促进ros生成来增强铁死亡。同时，由于gsh耗竭，gpx4活性受到抑制，这进一步导致了铁死亡。之后，dha的内过氧化物桥在fe2+存在断裂，产生有毒的碳中心自由基ros，进一步诱导铁死亡。ros的大量产生也导致了细胞凋亡。重要的是，hemin/dha的双管齐下刺激氧化应激，导致icd的高免疫激活。可促进树突状细胞(dcs)成熟，增强cd4和cd8 t细胞的浸润，促进巨噬细胞极化。此外，dha还被用作免疫调节剂，以抑制treg细胞并刺激宿主免疫反应的有益方面。然后，dha可以通过抑制gpx4来诱导癌细胞铁死亡途径，而血红素是血液中运输氧气的重要成分，可以被血红素加氧酶-1(ho-1)分解，从而增加细胞内fe2+浓度以进一步诱导癌细胞的铁死亡。同时，dha可以增强ho-1的活性，进一步促进来自hemin的fe2+的释放。因此，本专利技术为潜在的临床应用提供了级联铁死亡肿瘤治疗策略。
13、有益效果
14、(1)本专利技术组建纳米粒是全新构思，即本专利技术提供的乳铁蛋白载体纳米粒。双氢青蒿素和氯化血红素联合使用，其优势在于既可以利用乳铁蛋白的靶向作用主动运输至肿瘤组织，又可以实现在肿瘤组织中的响应性释药，实现多机制杀伤肿瘤。
15、(2)该自组装纳米粒粒径为90-100nm，粒径均一，在血液中可稳定存在。
16、(3)具有肿瘤靶向性，特异性识别肿瘤细胞膜上过表达转铁蛋白受体，而后通过内吞作用进入肿瘤细胞的溶酶体当中，乳铁蛋白纳米粒在溶酶体中进一步水解释放氯化血红素和双氢青蒿素。乳铁蛋白纳米粒在ph＝7.4条件下，24h后仅有4％双氢青蒿素和8％氯化血红素释放，在ph＝4.5，24h后有85％双氢青蒿素和90％的氯化血红素释放。
17、(4)该乳铁蛋白纳米粒中含有的双氢青蒿素和氯化血红素能够实现化学动力学疗法和免疫疗法的协同抗肿瘤效果。接受乳铁蛋白纳米粒给药的小鼠，其肿瘤体积与重量明显小于接受单独双氢青蒿素与氯化血红素给药的小鼠。
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1.一种乳铁蛋白纳米药物，其特征在于，由乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素制成，乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素的质量比为1：1：1-30：1：1。
2.根据权利要求1所述的乳铁蛋白纳米药物，其特征在于，乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素的质量比为6：1：1-14：1：1。
3.权利要求1或2所述的乳铁蛋白纳米药物的制备方法，其特征在于，分别将双氢青蒿素和氯化血红素溶于不同的有机溶剂中，然后将两种溶液混合，在搅拌条件下将混合溶液加至乳铁蛋白水溶液中，超声，制得乳铁蛋白纳米药物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、乙醇、甲醇、丙酮和四氢呋喃。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述双氢青蒿素溶于乙醇，所述氯化血红素溶于二甲基亚砜。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂和水的体积比为1：1：4-1：1：16。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌速度为200-800r/min，超声条件为50-200W、3-10min。
...【技术特征摘要】
1.一种乳铁蛋白纳米药物，其特征在于，由乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素制成，乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素的质量比为1：1：1-30：1：1。
2.根据权利要求1所述的乳铁蛋白纳米药物，其特征在于，乳铁蛋白、双氢青蒿素和氯化血红素的质量比为6：1：1-14：1：1。
3.权利要求1或2所述的乳铁蛋白纳米药物的制备方法，其特征在于，分别将双氢青蒿素和氯化血红素溶于不同的有机溶剂中，然后将两种溶液混合，在搅拌条件下将混合溶液加至乳铁蛋白水溶液中，超声，制得乳铁蛋白纳米药物。
4.根据权利要求3...
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