【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于生物医学，具体涉及一种pir-hsa-164586和myh9的新用途，通过促进a549细胞迁移，促进nsclc(非小细胞肺癌)进展，作为nsclc的治疗靶点。
技术介绍
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技术介绍
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1、人体血清外泌体中的pir-hsa-164586在nsclc患者血清外泌体和细胞中均表达上调，对肺癌的早期诊断有重要价值。此外，pir-hsa-164586定位于细胞核，可促进nsclc细胞增殖、转移和血管生成，但抑制其凋亡。基于此，pir-hsa-164586的作用机制可能对治疗nsclc提供新思路，定位于细胞核中的非编码小rna可以通过与蛋白质或rna结合形成复合物参与癌症进展。为了进一步研究pir-hsa-164586在nsclc中的作用，首先通过rnapulldown实验获得与pir-hsa-164586相关的蛋白，然后进行了蛋白质质谱分析、rip实验和分子对接，发现并证明了一种名为myh9(肌球蛋白重链9)的蛋白质与pir-hsa-164586存在相互作用且与nsclc发生有关。
2、myh9参与了包括细胞迁移、侵袭、粘附、胞质分裂和极化、细胞形状的维持和信号转导等生物过程，其异常表达与多种癌症的进展密切相关，例如，myh9依赖性极化通过加速粘着斑组装促进结直肠癌转移；myh9可以通过增强癌症干细胞性肝细胞癌进展；myh9通过激活akt-mtor信号传导对nsclc中的干细胞样特性产生影响。
3、piwi相互作用rna(pirna)属于一类小型非编码rna(ncrna)，长度范围为2
4、pirna-54265血清来源的异常表达可以作为检测和诊断人类早期结直肠癌的新型生物标志物。
5、探索pirna与myh9之间的相互作用时：首先，通过核醣核酸交互作用沉降(rnapulldown)实验获得与pir-hsa-164586结合的蛋白，进行蛋白质谱分析；然后，通过核醣核酸结合蛋白免疫共沉淀(rnabindingproteinimmunoprecipitation，rip)实验，验证pir-hsa-164586与靶标蛋白myh9的结合关系，通过分子对接实验证明pir-hsa-164586与靶标蛋白myh9间存在结合位点；最后，通过qrt-pcr、蛋白免疫印迹和组织免疫荧光染色实验基于mrna水平和蛋白水平验证pir-hsa-164586对下游靶标蛋白的调控作用，通过transwell回补实验证明myh9与pir-hsa-164586能够发挥协同作用影响a549细胞的迁移。
6、据此可以说明pir-hsa-164586能够正向调控myh9的表达；pir-hsa-164586能够与myh9发挥协同作用，通过促进a549细胞的迁移，促进nsclc进展；pir-hsa-164586和myh9能够作为nsclc潜在的治疗靶点，有潜力成为新的治疗药物。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术涉及的pir-hsa-164586和myh9的新用途为基于pir-hsa-164586通过调控myh9的表达，促进nsclc转移，作为nsclc的治疗靶点。
2、本专利技术涉及的myh9由rnapulldown实验获得，通过蛋白质质谱分析、分子对接和rip实验验证。
3、本专利技术涉及的pir-hsa-164586能够正向调控myh9的表达，通过分别对空白对照组(nc)、敲低pir-hsa-164586组(kd)和过表达pir-hsa-164586组(oe)进行qrt-pcr、蛋白免疫印迹和组织免疫荧光染色实验验证。
4、本专利技术涉及的pir-hsa-164586和myh9相互结合，能够在nsclc细胞株中上调myh9的表达，验证实验如下：
5、分别敲除pir-hsa-164586和myh9后，通过transwell实验证实nsclc细胞的迁移数目均显著受到抑制，同时敲低pir-hsa-164586和myh9能够进一步抑制a549细胞的迁移数目；
6、过表达pir-hsa-164586能够显著增加a549细胞的迁移数目，同时敲低myh9后，a549细胞的迁移数目显著下降；
7、表明pir-hsa-164586和myh9结合能够促进a549细胞的迁移，增加nsclc转移能力。
8、本专利技术与现有技术相比，基于pir-hsa-164586与myh9相互结合发挥作用：pir-hsa-164586调控myh9的表达，发挥促进nsclc转移的作用，作为nsclc的治疗靶点，成为潜在的治疗药物。
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1.一种piR-hsa-164586和MYH9的新用途，其特征在于，作为NSCLC的治疗靶点。
2.根据权利要求1所述的piR-hsa-164586和MYH9的新用途，其特征在于，原理是piR-hsa-164586通过调控MYH9的表达，促进NSCLC转移。
3.根据权利要求1或2所述的piR-hsa-164586和MYH9的新用途，其特征在于，MYH9由RNApulldown实验获得，通过蛋白质质谱分析、分子对接和RIP实验验证。
4.根据权利要求1或2所述的piR-hsa-164586和MYH9的新用途，其特征在于，piR-hsa-164586正向调控MYH9的表达，通过分别对空白对照组、敲低piR-hsa-164586组和过表达piR-hsa-164586组进行qRT-PCR、蛋白免疫印迹和组织免疫荧光染色实验验证。
5.根据权利要求1或2所述的piR-hsa-164586和MYH9的新用途，其特征在于，piR-hsa-164586和MYH9相互结合，在NSCLC细胞株中上调MYH9的表达，验证实验如下：
【技术特征摘要】
1.一种pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，作为nsclc的治疗靶点。
2.根据权利要求1所述的pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，原理是pir-hsa-164586通过调控myh9的表达，促进nsclc转移。
3.根据权利要求1或2所述的pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，myh9由rnapulldown实验获得，通过蛋白质质谱分析、分子对接和rip实验验证。
4.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐文华，唐艳，孔晓颖，韩丹，张良，王晓敏，王崇旺，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：
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