【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及环脂肽类化合物的分离，尤其涉及一种serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法及其结构。
技术介绍
1、环脂肽类化合物serrawettin w2的一般结构包括五个氨基酸(亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸)，与一个β-羟基脂肪酸分子结合而成(分子量为731.93)。serrawettin w2生物合成途径由swra基因编码。在沙雷氏菌中研究了serrawettin w2的生物合成，并确定了一个杂聚酮合酶(pks)-nrps基因簇，推定其参与serrawettin w2的生物合成。serrawettin w2的生物合成途径是基于pks和nrps编码基因的存在而确定的。首先，由pks swrefg和其它未确定的蛋白质合成的c10脂肪酸链做为前体物质，并以脂肪酰基辅酶a的形式释放。其次，swra编码核心肽链，它总共包含五个模块。据预测，swra启动模块将催化脂肪酰基辅酶a和亮氨酸的缩合，启动后，链的延长是由其它三个与丝氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸相关的线性结构域介导的。最后，寡肽被转移到最后一个模块的c端的活性位点异亮氨酸上。
2、serrawettin w2是一种由五个氨基酸和一个脂肪酸链组成的化合物，它的结构多样性是第一、第四或第五个氨基酸以及脂肪酸链的长度(c8、c10或c12)的不同所致，这些结构类似物的分子量在703.3至759.3之间。
3、实验室保藏的菌株serratia surfactantfaciens yd25t(简称yd25)是从中国福建省永定的连续种植烟草根际
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术公开了一种serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法及其结构。
2、为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：
3、serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法，包括以下步骤：
4、s1、从kb培养基中通过液体发酵得到菌株yd25的粗提物，用硅胶柱层析进行初步分离，并利用tlc对粗提物的组成进行分析；将具有相似组成的部分进行合并，得到主要的化合物组分；
5、s2、对得到的化合物组分进行hplc检测，确定分离的重点目标化合物；
6、s3、通过精细的柱层析过程，对关键组分进行进一步的纯化，精选合适的流动相体系和比例去除杂质，提高目标化合物的纯度；
7、s4、采用葡聚糖凝胶柱层析技术进一步提纯，最终通过半制备型hplc获得高纯度的单体化合物。
8、进一步地，步骤s1中，选用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂体系作为流动相进行柱层析分离。
9、进一步地，步骤s2中，在进行了多次反复的反相柱层析后得到了含主要化合物的组分，每组组分的主要化合物均为不同的物质。
10、进一步地，步骤s3中，精细的柱层析过程包括硅胶柱层析、凝胶柱层析以及反相柱层析，多轮反复交叉使用。
11、进一步地，步骤s4中，半制备hplc采用等度洗脱的方式，半制备型hplc的流动相程序为：甲醇质量分数为85％，0-45min等度洗脱，温度为35℃，流速为2ml/min。
12、本专利技术还公开了采用上述的分离纯化方法得到的serrawettin w2类结构类似物。
13、本专利技术还公开了上述serrawettin w2类结构类似物的结构，采用核磁共振和质谱分析对serrawettin w2类结构类似物进行结构鉴定，单体化合物均为环脂肽serrawettinw2类化合物，将所有化合物根据脂肪酸碳链的长度不同分为三类，分别为：
14、脂肪酸链为c8的化合物sw-9和sw-11；
15、脂肪酸链为c10的化合物sw-2、sw-3、sw-4、sw-5和sw-10；
16、脂肪酸链为c12的化合物sw-6、sw-7和sw-8。
17、本专利技术的有益效果是，通过多级发酵的方法对菌株yd25的代谢产物进行了累积；采用薄层色谱、柱层析和半制备型液相色谱等多种手段对serrawettin w2及其结构类似物进行了分离纯化；并利用高分辨质谱、二级质谱和核磁分析等技术进行了结构鉴定。
18、serrawettin w2及其结构类似物的分离纯化，是通过硅胶柱层析、sephadex lh-20凝胶柱层析、c18反相柱层析和半制备型液相色谱等多种技术手段对发酵粗品进行了一系列多级的分离纯化；同时采用薄层色谱和液相色谱方法对目标化合物进行追踪以提高其分离精度和效率；最终纯化得到sw-2至sw-1110个单体化合物。
19、serrawettin w2及其结构类似物的结构鉴定，本专利技术中对分离纯化后得到的10个化合物sw-2至sw-11分别进行了质谱与核磁检测，并通过hresims确认了化合物的相对分子质量，ms/ms技术推测了化合物的化学结构，利用1d-nmr谱(1h谱、13c谱和dept谱)和2d-nmr谱(hsqc、hmbc、1h-1h cosy、noesy)技术确定了化合物的结构，鉴定其均为环脂肽serrawettin w2类化合物。将所有化合物根据脂肪酸碳链的长度不同分为三类，分别为：
20、脂肪酸链为c8的化合物sw-9和sw-11；
21、脂肪酸链为c10的化合物sw-2、sw-3、sw-4、sw-5和sw-10；
22、脂肪酸链为c12的化合物sw-6、sw-7和sw-8。
23、通过多级发酵和分离纯化获得了环脂肽serrawettin w2结构类似物，并对其化学结构进行了鉴定，为环本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Serrawettin W2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种Serrawettin W2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤S1中，选用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂体系作为流动相进行柱层析分离。
3.如权利要求2所述的一种Serrawettin W2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤S2中，在进行了多次反复的反相柱层析后得到了含主要化合物的组分，每组组分的主要化合物均为不同的物质。
4.如权利要求3所述的一种Serrawettin W2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤S3中，精细的柱层析过程包括硅胶柱层析、凝胶柱层析以及反相柱层析，多轮反复交叉使用。
5.如权利要求4所述的一种Serrawettin W2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤S4中，半制备HPLC采用等度洗脱的方式，半制备型HPLC的流动相程序为：甲醇质量分数为85％，0-45min等度洗脱，温度为35℃，流速为2mL/min。
6.采用权利要求5所述的分离纯化方法
7.一种权利要求6所述的Serrawettin W2类结构类似物的结构，其特征在于，采用核磁共振和质谱分析对Serrawettin W2类结构类似物进行结构鉴定，单体化合物均为环脂肽serrawettin W2类化合物，将所有化合物根据脂肪酸碳链的长度不同分为三类，分别为：
...【技术特征摘要】
1.一种serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤s1中，选用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂体系作为流动相进行柱层析分离。
3.如权利要求2所述的一种serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤s2中，在进行了多次反复的反相柱层析后得到了含主要化合物的组分，每组组分的主要化合物均为不同的物质。
4.如权利要求3所述的一种serrawettin w2类结构类似物的分离纯化方法，其特征在于，步骤s3中，精细的柱层析过程包括硅胶柱层析、凝胶柱层析以及反相柱层析，多轮反复...
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