【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于活性肽，具体涉及一种dpp-iv活性抑制肽及其制备方法与应用。
技术介绍
1、目前用于治疗ⅱ型糖尿病的药物主要通过抑制α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-iv，dpp-iv)，调节患者体内血糖水平。dpp-iv是一种在体内发挥重要生理功能的酶类。广泛分布在一些组织和器官，如血浆、小肠、肾、肝脏以及胰岛的β细胞。其能阻断胰高血糖素样肽-1(glp-1)在小肠的转运。glp-1可增加胰岛素的分泌，抑制胰高血糖素的分泌，对胃排空有明显的抑制作用。dpp-iv抑制剂可通过抑制dpp-iv活性，降低glp-1及gip失活，增加机体内glp-1及gip含量，延长glp-1、gip持续时间。dpp-iv抑制剂的适应症主要是治疗ⅱ型糖尿病，但dpp-iv抑制剂的药物普遍存在一定的药物副作用，在使用dpp-iv抑制剂时，可能会引起严重的不良发应，如头痛、肝酶升高、上呼吸道感染和胰腺炎等。对于药物引起的不良反应，寻求一种安全有效的食源性功能食品预防和控制体内血糖水平正常已经引起了研究学者的广泛重视。其实，糖尿病患者除了用药物之外，通过平时的生活习惯和饮食规律也能够控制血糖的升高。此外，还可以通过从植物源动物源中提取dpp-iv抑制肽，如海藻、苋菜、豆类、乳蛋白、海洋鱼类及牛皮等。
2、玉米胚芽粕中的粗蛋白含量约为25％，其中可溶性蛋白约占整个玉米胚芽蛋白的80-88％。相较于蛋白组分主要为醇溶蛋白的玉米胚乳蛋白，玉米胚芽蛋白主要组分为可溶性的清蛋白和球蛋白(清蛋白(30％)、球蛋白(3
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种来源于玉米胚芽粕的dpp-iv活性抑制肽。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种dpp-iv活性抑制肽，所述dpp-iv活性抑制肽包括lspy(seq idno.1)、agfagdpr(seq id no.2)、enpilqpy(seq id no.3)和iipy(seq id no.4)中的至少一种。
4、本专利技术还提供了一种玉米胚芽蛋白酶解液，所述玉米胚芽蛋白酶解液中含有上述的dpp-iv活性抑制肽。
5、本专利技术还提供了上述玉米胚芽蛋白酶解液的制备方法，包括如下步骤：将玉米胚芽粕与碱性蛋白酶混合进行酶解，离心取上清液为所述玉米胚芽蛋白酶解液；所述酶解的温度为60℃，所述酶解的时间为3h，所述酶解的ph为7.5；所述碱性蛋白酶的用量以玉米胚芽粕中蛋白质量计为1000u/g蛋白。
6、本专利技术对于玉米胚芽粕的具体来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品均可。在本专利技术中，进行酶解前，优选的还包括将所述玉米胚芽粕与水混合配制成悬浊液的步骤，所述悬浊液的质量浓度优选为4％(以蛋白基计)。在本专利技术中，酶解结束后，优选的先需进行灭酶处理，再离心。所述灭酶处理的温度优选为100℃；所述灭酶处理的时间优选为10min。在本专利技术中，所述离心的转速优选为3000r/min，所述离心的时间优选为15min。
7、本专利技术还提供了一种dpp-iv活性抑制肽的筛选方法，在上述制备方法的基础上，还包括如下步骤：对所述dpp-iv活性抑制肽进行阴离子交换色谱分离，收集dpp-iv抑制活性最高的组分，得到阴离子交换层析液；对所述阴离子交换层析液进行反相色谱分离，收集dpp-iv抑制活性最高的组分，为dpp-iv活性抑制肽，所述dpp-iv活性抑制肽包括氨基酸序列为lspy、agfagdpr、enpilqpy和iipy中的至少一种。
8、在本专利技术中，所述阴离子交换色谱分离的离子交换剂优选为q-sepharosetmfastflow强阴离子交换剂，洗脱液优选为含1mol/mlnacl的20mmol/ltris-hcl，所述tris-hcl的ph优选为9.0，流速优选为2ml/min。在本专利技术中，所述反相色谱分离为先进行半制备型反相色谱分离，再进行分析型反相色谱分离。所述半制备型反相色谱分离的柱型为xselect csh c18 obd prep column；所述半制备型反相色谱分离的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为含0.065vol％tfa的2vol％乙腈水溶液，流动相b为含0.05vol％tfa的80vol％乙腈水溶液。所述分析型反相色谱分离的柱型为xselectpeptide csh c18column；所述分析型反相色谱分离的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为含0.065vol％tfa的2vol％乙腈水溶液，流动相b为含0.05vol％tfa的100vol％乙腈水溶液。
9、本专利技术还提供了上述dpp-iv活性抑制肽、上述玉米胚芽蛋白酶解液、上述制备方法或上述筛选方法在制备抑制dpp-iv活性产品或在制备降血糖产品中的应用。
10、在本专利技术中，所述产品的类型优选的包括食品或药品，当所述产品为食品时，上述dpp-iv活性抑制肽、上述玉米胚芽蛋白酶解液、上述制备方法或上述筛选方法所发挥的作用是有助于维持血糖健康水平。
11、本专利技术的有益效果：
12、本专利技术首次从玉米胚芽粕中分离纯化获得了具有显著抑制dpp-iv活性以及降血糖功效的dpp-iv活性抑制肽，其中lspy抑制dpp-iv的ic50为0.9385mg/ml，agfagdpr抑制dpp-iv的ic50为1.293mg/ml，enpilqpy抑制dpp-iv的ic50为3.177mg/ml，iipy抑制dpp-iv的ic50为3.491mg/ml。本专利技术提供的dpp-iv活性抑制肽可作为包括食品和药品在内的具有降血糖功能产品的添加剂。
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1.一种DPP-IV活性抑制肽，其特征在于，所述DPP-IV活性抑制肽包括氨基酸序列如SEQID NO.1～SEQ ID NO.4所示中的至少一种。
2.一种玉米胚芽蛋白酶解液，其特征在于，所述玉米胚芽蛋白酶解液中含有权利要求1所述的DPP-IV活性抑制肽。
3.权利要求2所述玉米胚芽蛋白酶解液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将玉米胚芽粕与碱性蛋白酶混合进行酶解，离心取上清液为所述玉米胚芽蛋白酶解液；所述酶解的温度为60℃，所述酶解的时间为3h，所述酶解的pH为7.5；所述碱性蛋白酶的用量以玉米胚芽粕中蛋白质量计为1000U/g蛋白。
4.一种DPP-IV活性抑制肽的筛选方法，其特征在于，在权利要求3所述制备方法的基础上，还包括如下步骤：对所述玉米胚芽蛋白酶解液进行阴离子交换色谱分离，收集DPP-IV抑制活性最高的组分，得到阴离子交换层析液；对所述阴离子交换层析液进行反相色谱分离，收集DPP-IV抑制活性最高的组分，为DPP-IV活性抑制肽，所述DPP-IV活性抑制肽包括权利要求1所述的DPP-IV活性抑制肽。
5.根据权利要
6.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述反相色谱分离为先进行半制备型反相色谱分离，再进行分析型反相色谱分离。
7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述半制备型反相色谱分离的柱型为XSelect CSH C18 OBD Prep Column；所述半制备型反相色谱分离的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为含0.065vol％TFA的2vol％乙腈水溶液，流动相B为含0.05vol％TFA的80vol％乙腈水溶液。
8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述分析型反相色谱分离的柱型为XSelectPeptide CSH C18 Column；所述分析型反相色谱分离的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为含0.065vol％TFA的2vol％乙腈水溶液，流动相B为含0.05vol％TFA的100vol％乙腈水溶液。
9.权利要求1所述DPP-IV活性抑制肽、权利要求2所述玉米胚芽蛋白酶解液、权利要求3所述制备方法或权利要求4～8任意一项所述筛选方法在制备抑制DPP-IV活性产品中的应用。
10.权利要求1所述DPP-IV活性抑制肽、权利要求2所述玉米胚芽蛋白酶解液、权利要求3所述制备方法或权利要求4～8任意一项所述筛选方法在制备降血糖产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种dpp-iv活性抑制肽，其特征在于，所述dpp-iv活性抑制肽包括氨基酸序列如seqid no.1～seq id no.4所示中的至少一种。
2.一种玉米胚芽蛋白酶解液，其特征在于，所述玉米胚芽蛋白酶解液中含有权利要求1所述的dpp-iv活性抑制肽。
3.权利要求2所述玉米胚芽蛋白酶解液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将玉米胚芽粕与碱性蛋白酶混合进行酶解，离心取上清液为所述玉米胚芽蛋白酶解液；所述酶解的温度为60℃，所述酶解的时间为3h，所述酶解的ph为7.5；所述碱性蛋白酶的用量以玉米胚芽粕中蛋白质量计为1000u/g蛋白。
4.一种dpp-iv活性抑制肽的筛选方法，其特征在于，在权利要求3所述制备方法的基础上，还包括如下步骤：对所述玉米胚芽蛋白酶解液进行阴离子交换色谱分离，收集dpp-iv抑制活性最高的组分，得到阴离子交换层析液；对所述阴离子交换层析液进行反相色谱分离，收集dpp-iv抑制活性最高的组分，为dpp-iv活性抑制肽，所述dpp-iv活性抑制肽包括权利要求1所述的dpp-iv活性抑制肽。
5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述阴离子交换色谱分离的离子交换剂为q-sepharosetm fastflow强阴离子交换剂，洗脱液为含1mol/ml nacl的20mmol/ltris-hcl，所述tris-...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓兰，郑喜群，李冠龙，高翔，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：
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