【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机合成，具体而言，涉及一种3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法。
技术介绍
1、3′-位置保护的三磷酸单体可用于聚合酶催化的寡聚核苷酸的合成（例如，现有文献us7544794b1、cn113195720a）。合适的易离去3′-位置保护基团是避免3′-端发生自偶联或多重偶联的必要条件，其中，3′-onh2基团是最常用的，这是由于其体积小，可以被酶识别，并且容易被移除。3′-onh2-脱氧核糖核苷酸的合成已有多篇文献报道和专利，如xiaoyun lu et al. enzymatic dna synthesis by engineering terminaldeoxynucleotidyl transferase（通过工程末端脱氧核苷酸转移酶进行酶促 dna 合成）.acs catal. 2022, 12, 2988-2997.和us8034923b1等。现有文献us7544794b1和us8212020b2公开了以2′-脱氧核糖核苷酸为原料，合成3′-o-氨基-2′-脱氧核糖核苷酸的方法。该方法包括几个步骤，最值得注意的是：在保护5′-羟基后，利用mitsunobu条件翻转3′-羟基，然后以o-邻苯二酰亚胺的形式在3′-位插入带有保护基的-onh2基团，去保护后，用肟的形式保护nh2，然后在5′-位置进行磷酸化，最后除去氨基保护基。对于核糖核苷酸（rna单体），2′-位置上羟基的存在使得获得相应的3′-onh2核糖核苷酸更加困难。美国专利us20220041643a1公开了在一个rna单体的3′-位置上氨基的一个方
2、在此基础上，研究并开发出一种收率高且合成路线较短的3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，以解决现有技术中用于3′-onh2-脱氧核糖核苷酸的合成策略并不适用于核糖核苷酸，且3′-onh2-核糖核苷酸的合成路线长，收率低的问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了一种3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，该合成方法包括：
3、步骤s1，在第一溶剂中，使式（i）所示化合物与n,n-二甲基甲酰胺二甲缩醛进行第一反应，得到式（ii）所示化合物；
4、；
5、步骤s2，在第二溶剂中，使式（ii）所示化合物与4,4'-二甲氧基三苯甲基氯进行第二反应，得到式（iii）所示化合物；
6、；
7、步骤s3，在第三溶剂中，在碱性化合物存在下，使式（iii）所示化合物与二苯磷酰羟胺进行取代反应，得到式（iv）所示化合物；
8、；
9、步骤s4，在第四溶剂中，使甲胺与式（iv）所示化合物进行第一脱保护反应，得到式（v）所示化合物；
10、；
11、步骤s5，在第五溶剂中，使盐酸与式（v）化合物在十二硫醇的存在下进行第二脱保护反应，得到式（vi）所示化合物；
12、；
13、步骤s6，在第六溶剂中，使式（vi）所示化合物与二碳酸二叔丁酯进行反应，得到式（vii）所示化合物；
14、；
15、步骤s7，在磷酸三甲酯的存在下，使1,8-双二甲氨基萘与式（vii）所示化合物及三氯氧磷进行第一磷酸化反应，得到中间产物体系；中间产物体系与三丁基焦磷酸铵或三正丁胺进行第二磷酸化反应，得到式（viii）所示中间产物，调节ph至8～9，得到3′-onh2-核糖核苷酸，3′-onh2-核糖核苷酸具有式（ix）所示结构；
16、；
17、其中，r选自氢原子、c1～c6的烷基、硅基或；
18、qh选自以下结构中的任意一种：
19、、、、、；
20、qg选自以下结构中的任意一种：
21、、、、、；
22、g选自以下结构中的任意一种：
23、、、、。
24、进一步地，步骤s3中，碱性化合物与式（iii）所示化合物的摩尔比为（2～2.5）:1；二苯磷酰羟胺与式（iii）所示化合物的摩尔比为（1.5～2.5）:1；优选地，碱性化合物选自氢化钠、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠和磷酸钾组成的组中的一种或多种；优选地，第三溶剂选自甲苯、乙腈、1,4-二氧六环、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、n-甲基吡咯烷酮和四氢呋喃组成的组中的一种或多种。
25、进一步地，步骤s3中，取代反应的温度为0～40℃，时间为12～24h。
26、进一步地，步骤s4中，甲胺与式（iv）所示化合物的摩尔比为（70～80）:1；优选地，第四溶剂选自水；优选地，第一脱保护反应的温度为20～30℃，时间为2～3h。
27、进一步地，步骤s5中，盐酸与式（v）化合物的摩尔比为（8～11）:1，十二硫醇与式（v）化合物的摩尔比为（1.5～3）:1；优选地，第五溶剂选自二氯甲烷、1,4-二氧六环和乙酸乙酯成的组中的一种或多种；优选地，第二脱保护反应的温度为0～3℃，时间为0.5～2h。
28、进一步地，步骤s6中，二碳酸二叔丁酯与式（vi）所示化合物的摩尔比为（1.5～2）:1；优选地，步骤s6中的反应在ph为9～10的碱性条件下进行；更优选采用三乙胺进行步骤s6中ph的调节；优选地，第六溶剂选自dmf。
29、进一步地，步骤s7中，磷酸三甲酯与式（vii）所示化合物的重量比为（10～12）:1；1,8-双二甲氨基萘与式（vii）所示化合物的摩尔比为（1.5～2）:1；三氯氧磷与式（vii）所示化合物的摩尔比为（2～2.5）:1，三丁基焦磷酸铵或三正丁胺与式（vii）所示化合物的摩尔比为（3～4）:1。
30、进一步地，步骤s1中，n,n-二甲基甲酰胺二甲缩醛与式（i）所示化合物的摩尔比为（2.5～3）:1；优选地，第一反应的温度为50～60℃，时间为15～20h；优选地，第一溶剂选自dmf。
31、进一步地，步骤s2中，4,4'-二甲氧基三苯甲基氯与式（ii）所示化合物的摩尔比为（0.95～1）:1；优选地，第二溶剂选自吡啶。
32、进一步地，第二反应的温度为20～30℃，时间为1～3h。
33、应用本专利技术的技术方案，本申请上述合成方法采用亲电nh2供体试剂（二苯磷酰羟胺，）通过亲核取代反应在3′-位置引入-onh2保护基团，再依次进行第一脱保护反应和第二脱保护反应及步骤s6的反应（g基团在3′-onh2上进行连接）。最后，通过磷酸化反应在5′-位置构建三磷酸部分（步骤s7），最后去除g基团的保护得到目标产物3′-onh2核糖核苷酸，即式（ix）所示结构的化合物。本申请上述合成方法制得的目标产物收本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：
2.根据权利要求1所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述碱性化合物与所述式（III）所示化合物的摩尔比为（2～2.5）:1；所述二苯磷酰羟胺与所述式（III）所示化合物的摩尔比为（1.5～2.5）:1；和/或，
3.根据权利要求1所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述取代反应的温度为0～40℃，时间为12～24h。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述甲胺与所述式（IV）所示化合物的摩尔比为（70～80）:1；和/或，
5.根据权利要求4所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述盐酸与所述式（V）化合物的摩尔比为（8～11）:1，所述十二硫醇与所述式（V）化合物的摩尔比为（1.5～3）:1；和/或，
6.根据权利要求5所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征
7.根据权利要求6所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，采用三乙胺进行所述步骤S6中pH的调节。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S7中，所述磷酸三甲酯与所述式（VII）所示化合物的重量比为（10～12）:1；所述1,8-双二甲氨基萘与所述式（VII）所示化合物的摩尔比为（1.5～2）:1；所述三氯氧磷与所述式（VII）所示化合物的摩尔比为（2～2.5）:1，所述三丁基焦磷酸铵或所述三正丁胺与所述式（VII）所示化合物的摩尔比为（3～4）:1。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛与所述式（I）所示化合物的摩尔比为（2.5～3）:1；和/或，
10.根据权利要求1至3中任一项所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述4,4'-二甲氧基三苯甲基氯与所述式（II）所示化合物的摩尔比为（0.95～1）:1；和/或，
11.根据权利要求10所述的3′-ONH2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述第二反应的温度为20～30℃，时间为1～3h。
...【技术特征摘要】
1.一种3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：
2.根据权利要求1所述的3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述碱性化合物与所述式（iii）所示化合物的摩尔比为（2～2.5）:1；所述二苯磷酰羟胺与所述式（iii）所示化合物的摩尔比为（1.5～2.5）:1；和/或，
3.根据权利要求1所述的3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述取代反应的温度为0～40℃，时间为12～24h。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s4中，所述甲胺与所述式（iv）所示化合物的摩尔比为（70～80）:1；和/或，
5.根据权利要求4所述的3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s5中，所述盐酸与所述式（v）化合物的摩尔比为（8～11）:1，所述十二硫醇与所述式（v）化合物的摩尔比为（1.5～3）:1；和/或，
6.根据权利要求5所述的3′-onh2-核糖核苷酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s6中，所述二碳酸二叔丁酯与所述式（vi）所示化合物的摩尔比为（1.5～2）:1；和/或，
【专利技术属性】
技术研发人员：熊正常，肖毅，维沙尔·库马尔，王乔丹，苑晴晴，何颖，
申请(专利权)人：凯莱英生命科学技术天津有限公司，
类型：发明
国别省市：
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