【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米制剂，具体涉及一种基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台及其制备方法和应用。
技术介绍
1、缺血性脑卒中是由脑血管血栓导致血流突然减少或中断所引起的脑组织损伤，约占临床脑卒中总发病率的87％，是全球死亡和残疾的主要原因。发病时，血栓梗死核心区的脑组织迅速坏死，周围血流低灌注区缺血半暗带则持续发生神经细胞凋亡和坏死。临床治疗以在患者发病4.5小时内静脉输注阿替普酶(recombinant tissue plasminogenactivator，rt-pa)溶栓为主。但由于缺血梗死核心的快速扩张及溶栓治疗时间窗的严格限制，导致仅有少数患者能有效接受溶栓治疗。且rt-pa难以应对血流再通后的继发性再灌注损伤，通过溶栓获益的患者不足3％，迫切需要协同治疗策略以提高临床疗效。神经保护及修复疗法以抑制缺血级联反应减轻脑损伤，从而延长再通治疗时间窗并改善缺血再灌注损伤。目前，临床已有研究探索神经保护及神经修复联合溶栓治疗的应用，如采用依达拉奉联合丁苯酚、醒脑静注射液或丹参注射液等改善接受溶栓治疗患者的早期神经功能。但临床联合用药往往仅局限在抗氧化类神经保护制剂的叠加使用，未能结合溶栓再通前后的病理特点提供针对性的用药策略，治疗模式单一，且药物之间的相互作用尚不明确，缺乏精准、连贯、综合治疗的用药方案。因此，设计“神经保护、溶栓再通、神经修复”的多阶段、全链式治疗体系是综合改善患者治疗预后的关键。
2、与仅针对缺血级联反应单一环节或单一病理靶点的药物相比，具有多靶点干预效应的中药多组分能全面调控缺血损伤级联
3、细胞外囊泡(extracellular vesicles，evs)是由真核原核细胞主动产生的一种生物活性纳米颗粒，具有双层脂质膜结构，在细胞之间运输各种生物分子并调节细胞间通讯。细胞外囊泡通过循环系统将生物活性分子转运到特定器官或组织的细胞中，在介导信号转导方面发挥关键作用。间充质干细胞evs(mesenchymal stem cell evs，mevs)具有天然炎症病灶归巢能力，能自主迁移至脑缺血病灶区域。与人工纳米载体相比，mevs具有生理屏障可穿透性、易装载药物及易修饰等优点，并具有良好的生物相容性。近年来，植物源性evs因其来源丰富、产率高等优势而受到广泛关注，其在形态、组成和功能上与哺乳动物evs相似。植物囊泡来源于天然植物，具有多组分、多功能的特点，容易被生物体吸收利用，可作为生物治疗剂和药物递送载体，有助于解决活性成分生物利用度差的问题。此外，由于植物没有人畜共患病原体，植物囊泡也具有非免疫原性和较高的安全性。但由于缺血性脑卒中病变环境的复杂性，导致evs靶向大脑输送药物的效率变低，且植物囊泡不具有细胞靶向特异性，仍需进一步的修饰与优化。
技术实现思路
1、专利技术目的：针对上述技术问题，本专利技术目的是提供一种基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台及其制备方法和应用。该仿生纳米平台包括前体仿生纳米粒和后置仿生纳米粒，可以联合鼻腔给药高效、快速入脑的特点，在溶栓治疗前，利用间充质干细胞细胞外囊泡的炎症趋向性将前体仿生纳米粒靶向递送至缺血病灶发挥神经保护作用，并快速释放生物正交基团。溶栓治疗后，再给予后置仿生纳米粒，通过组织原位生物正交反应，提高植物囊泡仿生纳米粒在缺血病灶的蓄积，并发挥神经修复效应。进而实现神经保护及修复药物在缺血病灶区域的时序递送效应，为治疗缺血性脑卒中提供一种新的多靶点、多层次、多阶段的联合治疗策略。
2、技术方案：为了达到上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，所述仿生纳米平台包括生物正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡包载神经保护中药组分形成的前体仿生纳米粒，以及生物正交配位基团修饰的植物囊泡包载神经修复中药组分形成的后置仿生纳米粒。所述生物正交基团能直接转移到靶组织中，并能和生物正交配位基团在生物体内进行连接。
4、所述中药神经保护组分通过上调抗凋亡相关蛋白，下调促凋亡相关蛋白的水平多环节阻断神经元细胞凋亡进程，并通过保护线粒体功能改善神经元细胞能量代谢，上调抗氧化物酶表达，增强细胞存活能力，抑制脑缺血梗死核心的扩张；所述中药神经修复组分通过促进m1促炎型小胶质细胞转变成m2抗炎型，逆转促炎与抗炎介质的失衡状态，减轻神经炎症损伤，并降低神经元细胞凋亡、修复受损的血脑屏障及促进血管生成，发挥促神经修复作用。
5、作为具体实施方案，所述间充质干细胞细胞外囊泡选自骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胚胎间充质干细胞来源的细胞外囊泡中的一种或几种；所述植物囊泡选自生姜、人参、姜黄、柠檬、葡萄柚来源的细胞外囊泡中的一种或几种。
6、作为具体实施方案，所述生物正交基团为四酰化的n-叠氮乙酰甘露糖胺、n-叠氮乙酰葡萄糖胺、n-叠氮乙酰半乳糖胺、四氮嗪中的一种或几种；所述生物正交配位基团为二苯并环辛炔、双环[6,1,0]壬炔、2-环辛炔-乙酸、反式环辛烯中的一种或几种。
7、作为具体实施方案，所述神经保护中药组分为黄芪甲苷、姜黄素、黄芩苷、小檗碱、红景天苷中的一种或几种；所述神经修复中药组分为丹酚酸b、丹参酮ⅱa、人参皂苷rg1、迷迭香酸、栀子苷中的一种或几种。
8、第二方面，本专利技术提供了所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台的制备方法，包括以下步骤：
9、(1)制备正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡；
10、(2)将神经保护中药组分与步骤(1)所得间充质干细胞细胞外囊泡混合均匀，超声，孵育，除去游离药物，即得所述前体仿生纳米粒；
11、(3)制备植物囊泡；
12、(4)将神经修复中药组分与步骤(3)所得植物囊泡混合均匀，超声，孵育，制备得到植物囊泡包载神经修复中药组分的仿生纳米粒；
13、(5)将步骤(4)所得仿生纳米粒通过共价结合方式表面修饰将生物正交配位基团，除去游离药物，即得所述后置仿生纳米粒。
14、作为具体实施方案，步骤(1)中，所述制备正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡的方法包括如下步骤：
15、取间充质干细胞，利用糖代谢标记法获得生物正交基团修饰的间充质干细胞，收集细胞培养上清本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述仿生纳米平台包括生物正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡包载神经保护中药组分形成的前体仿生纳米粒，以及生物正交配位基团修饰的植物囊泡包载神经修复中药组分形成的后置仿生纳米粒，所述生物正交基团和生物正交配位基团能够在生物体内进行连接。
2.根据权利要求1所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述间充质干细胞细胞外囊泡选自骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胚胎间充质干细胞来源的细胞外囊泡中的一种或几种；所述植物囊泡选自生姜、人参、姜黄、柠檬、葡萄柚来源的细胞外囊泡中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述生物正交基团为四酰化的N-叠氮乙酰甘露糖胺、N-叠氮乙酰葡萄糖胺、N-叠氮乙酰半乳糖胺、四氮嗪中的一种或几种；所述生物正交配位基团为二苯并环辛炔、双环[6,1,0]壬炔、2-环辛炔-乙酸、反式环辛烯中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台
5.权利要求1-4任一项所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述制备正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡的方法包括如下步骤：
7.根据权利要求5所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述制备植物囊泡的方法包括如下步骤：
8.根据权利要求5所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台的制备方法，步骤(2)中，所述间充质干细胞细胞外囊泡以其中蛋白含量计，所述神经保护中药组分与间充质干细胞细胞外囊泡的质量比为2:(4-6)；所述超声的条件为：超声破碎时间为2s开/5s关，4-6min，超声功率为120-130W；所述孵育的条件为：37±2℃条件下，孵育时间为55-65min；
9.权利要求1-4任一项所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台在制备治疗缺血性脑卒中及再灌注损伤药物中的应用；优选的，所述药物为鼻腔给药药物。
10.前体仿生纳米粒与后置仿生纳米粒联用在制备治疗缺血性脑卒中及再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述前体仿生纳米粒主要是由生物正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡包载神经保护中药组分形成，所述后置仿生纳米粒主要是生物正交配位基团修饰的植物囊泡包载神经修复中药组分形成，所述生物正交基团和生物正交配位基团能够在生物体内进行连接；优选的，所述药物为鼻腔给药药物。
...【技术特征摘要】
1.一种基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述仿生纳米平台包括生物正交基团修饰的间充质干细胞细胞外囊泡包载神经保护中药组分形成的前体仿生纳米粒，以及生物正交配位基团修饰的植物囊泡包载神经修复中药组分形成的后置仿生纳米粒，所述生物正交基团和生物正交配位基团能够在生物体内进行连接。
2.根据权利要求1所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述间充质干细胞细胞外囊泡选自骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胚胎间充质干细胞来源的细胞外囊泡中的一种或几种；所述植物囊泡选自生姜、人参、姜黄、柠檬、葡萄柚来源的细胞外囊泡中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述生物正交基团为四酰化的n-叠氮乙酰甘露糖胺、n-叠氮乙酰葡萄糖胺、n-叠氮乙酰半乳糖胺、四氮嗪中的一种或几种；所述生物正交配位基团为二苯并环辛炔、双环[6,1,0]壬炔、2-环辛炔-乙酸、反式环辛烯中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台，其特征在于，所述神经保护中药组分为黄芪甲苷、姜黄素、黄芩苷、小檗碱、红景天苷中的一种或几种；所述神经修复中药组分为丹酚酸b、丹参酮ⅱa、人参皂苷rg1、迷迭香酸、栀子苷中的一种或几种。
5.权利要求1-4任一项所述的基于生物正交时序靶向递送中药组分的仿生纳米平台的制备方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：王若宁，李佳乐，江颖宇，史明慧，朱安然，狄留庆，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。