【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及烟草果胶裂解酶ntpl基因及其应用。
技术介绍
1、栽培烟草（nicotiana tabacum）作为全球重要的经济作物，其产量和品质直接影响相关产业的经济效益。烟草在栽培过程中经常面临多种自然灾害的威胁，诸如强风、暴雨和干旱等极端气候条件，可能导致植株损伤，尤其是叶片的折断和脱落。这不仅影响烟叶的产量，还可能导致烟叶品质下降，给农户带来显著的经济损失。因此，提升烟草的抗逆性尤其是提高叶片的附着力，对于稳定烟草产量和品质具有重要意义。
2、因此，通过烟草育种，挖掘提高叶片的附着力的基因，获得高附着力的烟草品种是目前有效的手段。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供烟草果胶裂解酶ntpl基因及其应用。
2、本专利技术提供了果胶裂解酶作为靶标在调控植物叶柄压力承受中的应用；
3、所述果胶裂解酶的氨基酸序列如seq id no:2所示。
4、所述调控包括提高或降低。
5、所述植物包括烟草。
6、本专利技术提供了植物育种或辅助育种的产品，其包括如下a）~c所示中的至少一种：
7、a）、以编码所述果胶裂解酶的核酸为模板的扩增引物、检测引物和/或靶向引物；
8、b）、靶向所述果胶裂解酶的干扰片段；
9、c）、靶向所述果胶裂解酶的grna；
10、d）、含有如b）所述干扰片段，或如c）所述grna的表达盒；
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12、f）、转化或转染如e）所述重组载体的宿主细胞；
13、g）、培养如f）所述的宿主细胞获得的混合物。
14、进一步的，本专利技术所述的产品中，
15、编码所述果胶裂解酶的核酸具有如seq id no:1所示的核苷酸序列。
16、本专利技术中，所述的核酸包括dna或rna，其可以是如seq id no:1所示的核苷酸序列；也可以是如seq id no:1所示的核苷酸序列的转录产物-rna；其根据实验目的不同对一次具体的实验中使用的模板或靶标为dna还是rna进行选取；本专利技术中，所述dna形式包括cdna、基因组dna或人工合成的dna。所述dna可以是单链的或是双链的。核酸可以包括具有不同功能的核苷酸序列，如编码区和非编码区如调控序列（例如启动子或转录终止子）。核酸在拓扑学上可以是线性或环状的。核酸可直接从天然来源获得，或者可由重组、酶法或化学技术辅助制备。
17、本专利技术提供了grna片段，grna片段为靶向目标基因的位于crispr/核酸内切酶系统（如crispr/cas9、crispr/cas12a、crispr/cas12b、crispr/cas13a和crispr/cas14a）编辑系统识别位点（pam位点）前20bp左右的片段；所述crispr/核酸内切酶系统编辑系统识别位点根据核酸内切酶的不同而产生区别，通常的，所述识别位点包括ngg（cas9）和/或ttn（cpf1）等；本专利技术的具体实施例中，利用crispr/cas9系统，其识别位点为ngg，所述n代表a、t、c或g碱基种的任意一种，所述ngg的位置可以在所述编码烟草果胶裂解酶的核酸的5’端、中间或3’端的任意位置，本专利技术对此不作限定；本专利技术中，以编码所述果胶裂解酶的核酸为靶标，利用crispr/cas9系统进行基因编辑，具体的，所述grna片段的靶区段的核苷酸序列如seq id no:3所示；
18、进一步的，本专利技术中，经crispr/cas9系统基因编辑后获得了烟草果胶裂解酶变体，其在seq id no:1所示核苷酸序列的461bp或462bp处的碱基t缺失，产生移码突变，导致果胶裂解酶功能的丧失。
19、本专利技术所述重组载体，是指重组的核酸载体，是一种重组dna分子，其包含期望的编码序列和对可操作连接的编码基因在具体宿主生物内的表达或完成对目的操作所必不可少的合适的核酸序列或元件。本专利技术的具体实施例中，将编码所述果胶裂解酶的核酸与pealy-myc101载体骨架连接，获得果胶裂解酶过表达载体（pealy-myc101-ntpl）；在本专利技术的另一些实施例中，将所述sgrna整合于crispr/cas9基因编辑载体，对所述果胶裂解酶进行敲除；达到基因功能沉默或丧失的目的。
20、在本说明书中，“质粒”和“载体”有时可以交换通用，因为质粒是当前最普遍使用的载体形式。然而，本专利技术意图包括表达载体的这样的其它形式，其发挥等价作用，其在本领域是已知的或将变为已知的，包括但不限于：质粒，噬菌体颗粒，病毒载体和/或仅为潜在的基因组插入物。
21、所述转化的方法包括：化学转化和电转化；所述转染的方法包括磷酸钙共沉淀、人工脂质体法、病毒转染。所述的病毒转染包括腺病毒转染、腺相关病毒转染、慢病毒转染、农杆菌介导的转染等。本专利技术的具体实施例中，为利用农杆菌介导，进行转染，获得突变植株，用于本专利技术所述的果胶裂解酶功能的研究。
22、本专利技术提供了试剂盒，其包括本专利技术所述的产品和辅料。
23、进一步的，所述辅料包括：dna提取试剂、dna反转录试剂、转化或转染试剂、培养基、抗生素和/或缓冲液中的至少一种。
24、本专利技术提供了所述的产品或所述的试剂盒在植物育种或辅助植物育种中的应用。
25、进一步的，所述植物育种包括调控植物叶片的附着力；
26、所述调控包括提高和/或降低；
27、本专利技术的具体实施例中，所述植物为烟草，通过氨基酸序列如seq id no:2所示的果胶裂解酶的功能缺失或降低烟草叶柄压力承受能力；通过表达来提高烟草叶柄压力承受能力。
28、本专利技术提供了植物育种或辅助植物育种的方法，其包括利用本专利技术所述的产品或本专利技术所述的试剂盒进行植物育种。
29、本专利技术首次通过试验发现氨基酸序列如seq id no:2所示的果胶裂解酶功能缺失突变株的叶柄压力承受能力降低，落叶数量升高，过表达的突变株叶柄压力承受能力升高，落叶数量降低；为调控烟草叶柄的机械强度提供了新的手段，为烟草分子育种提供新的策略，对于稳定烟草产量和品质具有重要意义。
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1.果胶裂解酶作为靶标在调控植物叶柄压力承受中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控包括升高或降低。
3.根据权利要求1或2任一项所述的应用，其特征在于，所述植物包括烟草。
4.植物育种或辅助育种的产品，其特征在于，包括如下A）~C所示中的至少一种：
5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，编码所述果胶裂解酶的核酸具有如SEQ IDNO:1所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
7.试剂盒，其特征在于，包括权利要求4~6任一项所述的产品和辅料。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述辅料包括：DNA提取试剂、DNA反转录试剂、转化或转染试剂、培养基、抗生素和/或缓冲液中的至少一种。
9.权利要求求4~6任一项所述的产品或权利要求7或8所述的试剂盒在植物育种或辅助植物育种中的应用。
10.植物育种或辅助植物育种的方法，其特征在于，包括利用权利要求4~6任一项所述的产
...【技术特征摘要】
1.果胶裂解酶作为靶标在调控植物叶柄压力承受中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控包括升高或降低。
3.根据权利要求1或2任一项所述的应用，其特征在于，所述植物包括烟草。
4.植物育种或辅助育种的产品，其特征在于，包括如下a）~c所示中的至少一种：
5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，编码所述果胶裂解酶的核酸具有如seq idno:1所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述grna的核苷酸序列如seq...
【专利技术属性】
技术研发人员：王帅斌，张银霞，杨小年，蒲文宣，高军平，陈凯，黄平俊，张新要，何鑫玺，彭宇，
申请(专利权)人：湖南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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