【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药品分析方法，特别是涉及枸橼酸坦度螺酮的起始物料n-boc-哌嗪中亚硝胺杂质的检测方法。
技术介绍
1、枸橼酸坦度螺酮具有抗焦虑和抗抑郁的作用。其制备方法与丁螺环酮相似，合成起始物料包括哌嗪的n衍生物、取代酰胺或酸酐、含四个碳的脂肪链(an efficientsynthesis of buspirone and its analogues,jacek cybulski)，n-boc-哌嗪为常用起始物料。
2、在药物分析领域，亚硝胺类杂质属于ich m7(r2)(《评估和控制药物中dna反应性(致突变)杂质以限制潜在致癌风险》)指南中提及的“关注队列”物质。
3、目前所知，二甲基亚硝胺(ndma)、n-亚硝基二乙胺(ndea)等亚硝胺杂质可能通过亚硝化机理生成。即在一定条件下，胺类化合物尤其是仲胺，与亚硝酸钠(nano2)或其他亚硝化试剂反应产生亚硝胺类杂质。
4、亚硝化试剂可能引入来源有：亚硝酸盐、亚硝酸酯、亚硝酸、由亚硝酸盐制备的物质(如：叠氮化钠等)和胺类化合物的氧化等。
5、因此，n-boc-哌嗪很有可能通过如下途径生成亚硝胺杂质1-亚硝基哌嗪：
6、
7、亚硝胺引入途径主要有以下几种：
8、(一)由工艺引入亚硝胺类杂质的风险
9、在同一工艺步骤中使用了能引入仲胺和亚硝化试剂的物料(包括起始物料、溶剂、试剂、催化剂、中间体等)，有引入亚硝胺类杂质的较高风险。即使在不同的工艺步骤中分别使用能引入仲胺和亚硝化试剂的物料
10、(二)由污染引入的风险
11、原料药生产过程中使用了被亚硝胺类杂质污染的物料(起始物料、中间体、溶剂、试剂、催化剂等)可能带来亚硝胺类杂质的风险；使用回收的物料亦有引入亚硝胺类杂质的风险；在同一生产线生产不同的品种，交叉污染也可能成为引入亚硝胺类杂质的潜在原因。
12、(三)降解产生风险
13、某些药物本身会降解产生亚硝胺类杂质，如雷尼替丁在高温下会产生亚硝胺类杂质。
14、1-亚硝基哌嗪具有致突变性。ema公布该杂质的每日可接受摄入量(ai)为400ng/day，以该杂质在制剂(枸橼酸坦度螺酮片)中的限度严控起始物料n-boc-哌嗪中亚硝胺杂质的限度。
15、根据计算公式：
16、
17、式中：ai为每日可接受摄入量400ng；
18、枸橼酸坦度螺酮片每日最大用药量为60mg；
19、经计算杂质1-亚硝基哌嗪的限度为6.7ppm，将限度严控为6ppm。
20、目前亚硝胺杂质的检测方法包括柱层析和气相检测的方法，未检索到检测效率高、使用方便的液相检测方法的公开。因1-亚硝基哌嗪的保留较弱且限度较低，亟需开发一种可以准确、有效检测该杂质的液相方法。
21、另外，n-boc-哌嗪中可能含有的杂质如下：
22、
23、
24、以上杂质的存在可能影响所研究的亚硝胺杂质的准确定量，提高了分析工作的难度。
技术实现思路
1、为了填补检测该杂质的技术空白，本专利技术提供了枸橼酸坦度螺酮的起始物料n-boc-哌嗪中亚硝胺杂质的检测方法，所述亚硝胺杂质的结构式为：
2、
3、为了保证药品的安全和质量可控，实现有效的风险控制，本专利技术实现了对亚硝胺杂质进行严格控制的效果。本专利技术的技术方案如下：
4、枸橼酸坦度螺酮的起始物料n-boc-哌嗪中亚硝胺杂质的检测方法，
5、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以六氟磷酸钾溶液为流动相a；以乙腈为流动相b，进行线性梯度洗脱；所述六氟磷酸钾溶液的ph值范围为4.3～5.5。
6、优选的，所述六氟磷酸钾溶液的ph值为4.8。
7、优选的，所述六氟磷酸钾溶液的浓度范围为0.015mol/l～0.025mol/l，优选0.02mol/l。
8、优选的，梯度洗脱程序为：
9、在0～6分钟内，流动相a和流动相b的体积比保持95～100:5～0不变；在6～6.1分钟内，流动相a和流动相b的体积比线性渐变至10:90；在6.1～16分钟内，流动相a和流动相b的体积比保持10:90不变；在16～17分钟内，流动相a和流动相b的体积比保持由10:90线性渐变至95～100:5～0；在17～27分钟内，流动相a和流动相b的体积比保持95～100:5～0不变。
10、优选的，检测波长为235±2nm。
11、色谱柱柱温为30℃～45℃，优选35℃。
12、流动相流速范围为0.7ml/min～1.3ml/min，优选1ml/min。
13、优选的，色谱柱采用规格为ymc-triart c18，4.6mm×150mm，3μm或效能相当的色谱柱。
14、进一步的，所述检测方法还包括样品的配制：
15、供试品溶液：取本品加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含n-boc-哌嗪15mg的溶液。
16、对照品溶液：取亚硝胺杂质对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含0.09μg的溶液。
17、进一步的，所述溶剂为1％磷酸三钾水溶液。ph值范围为11.5～12.5，配制方法为称取磷酸三钾1g，加100ml水溶解，摇匀，即得。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
19、1，枸橼酸坦度螺酮的起始物料n-boc-哌嗪含有仲胺结构，可能会有相关亚硝胺杂质存在的风险，为了保证药品的安全和质量可控，实现有效的风险控制，必须对亚硝胺杂质进行控制；基于此，本专利技术对起始物料n-boc-哌嗪进行了亚硝胺杂质分析，开发了检测方法并制定了控制策略。
20、2，针对1-亚硝基哌嗪杂质保留较弱，用常规流动相基本无保留的问题，本专利技术中采用离液剂六氟磷酸钾溶液作为流动相a，乙腈作为流动相b，避免使用离子对试剂时系统平衡时间长，方法难以重复的问题。并且对于对照品溶液中杂质的保留时间和加标供试品中杂质保留时间不一致的问题，通过调节溶剂至特定ph值解决。
21、3，本专利技术所述方法专属性强，检测灵敏度和准确度高，线性良好，可准确测定n-boc-哌嗪中含有的亚硝胺杂质1-亚硝基哌嗪，不仅克服了目前常用气质联用或液质联用方法检测亚硝胺杂质的技术壁垒，而且降低了检测成本，同时含有的其他杂质不影响亚硝胺杂质的准确检出。
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1.枸橼酸坦度螺酮的起始物料N-Boc-哌嗪中亚硝胺杂质的检测方法，其特征在于，所述亚硝胺杂质的结构式为：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸钾溶液的pH值为4.8。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸钾溶液的浓度范围为0.015mol/L～0.025mol/L，优选0.02mol/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，梯度洗脱程序为：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为235±2nm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱柱温为30℃～45℃，优选35℃。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相流速范围为0.7ml/min～1.3ml/min，优选1ml/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱采用规格为YMC-Triart C18，4.6mm×150mm，3μm或效能相当的色谱柱。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测方法还包括样品的配制：
10.根
...【技术特征摘要】
1.枸橼酸坦度螺酮的起始物料n-boc-哌嗪中亚硝胺杂质的检测方法，其特征在于，所述亚硝胺杂质的结构式为：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸钾溶液的ph值为4.8。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸钾溶液的浓度范围为0.015mol/l～0.025mol/l，优选0.02mol/l。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，梯度洗脱程序为：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为235±2nm。
6.根据权利要求1所述的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：林利华，姜明明，王婷婷，孙孝丽，乜伟伟，孙迎基，李铁军，
申请(专利权)人：山东泰合医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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