【技术实现步骤摘要】
本申请涉及一种经糖基修饰的融合蛋白、核酸分子、表达载体、宿主细胞及应用，涉及生物制药。
技术介绍
1、适应性免疫应答通常分为两大类：主要由循环抗体介导的体液免疫和由各种形式的细胞介导的细胞免疫。当宿主免疫系统对肿瘤抗原产生了耐受性，肿瘤抗原被识别为“自身抗原”，不被抗原呈递细胞(antigen-presenting cells，apc)识别，无法激活免疫系统来对抗肿瘤疾病，因此，将“新抗原”引入免疫系统是治疗癌症的一种方法。
2、前列腺癌(prostate cancer，pca)为世界上男性最高发的恶性肿瘤之一，目前雄激素剥夺疗法(adt)仍旧是晚期治疗的主要手段。但这类患者常常会获得转移性或者去势抵抗性，使肿瘤进展为恶行程度更高、预后更差的去势抵抗性前列腺癌(crpc)。目前已有多种雄激素受体阻滞剂(ar)相继被fda批准，用于治疗crpc，但疗效仍旧有限；此外，靶向前列腺腺癌标志物，如psma、pap等的抗体药物偶联物(adc)、嵌合抗原受体t细胞(car-t)等新型药物也在不断的进展中，作为前列腺癌治疗的替代手段。前列腺腺癌患者的传统或新型治疗仍旧具有巨大的挑战性，“重组”或“再激活”机体的免疫应答，或许可使前列腺癌患者治愈具有全新的契机。
3、树突状细胞(dentritic cell，dc)是功能最强大的apc，是肿瘤抗原特异t淋巴细胞和体液免疫应答启动的重要环节。将肿瘤抗原与抗体形成复合物后，抗体分子的fc片段与fc受体有较高的亲和力，使得与抗体结合的肿瘤抗原更容易与apc结合，激活b淋巴细胞和
4、人类fcγriia(hfcγriia)是一种激活型fc受体，当fcγriia与抗体fc段结合时，可传递激活信号，介导fc段效应因子功能，包括细胞溶解、吞噬、脱颗粒和细胞因子的产生；同时，fcγriia可对树突细胞成熟和抗原递呈进行调控，介导t细胞记忆效应，参与刺激保护性的cd8+t细胞反应，促进了对病毒感染的长期保护,从而达到即清除靶细胞，又维持持久免疫保护的效果。
5、为了深入了解fc片段和fcγriia的结合，许多研究者对fc片段的结构进行了改造。有研究者发现fc片段突变(g236a)在抑制fcγriib的基础上选择性激活fcγriia(两者具有96％的序列一致性)，提高由单核细胞来源的巨噬细胞介导的adcp。在fc片段的s239d/i332e突变中添加g236a可使fcγriia的结合提高70倍，fcγriia/fcγriib的结合比(激活/抑制比)提高13倍，增强巨噬细胞对抗体包被靶细胞的吞噬作用(richards j o,k.s.,lazar g a,et al.molecular cancer therapeutics,2008,7(8):2517-2527.,optimization of antibody binding to fcγriia enhances macrophage phagocytosisof tumor cells[j].molecular cancer therapeutics,2008.7(8):p.2517-2527)。还有研究者发现fc突变诱导了cd8+和cd4+t细胞的t细胞反应的激活(bournazos,s.et al.fc-optimized antibodies elicit cd8 immunity to viral respiratory infection,nature,vol 588 17december 2020)。因此，对fc片段的改造可能影响fc片段的效应功能，从而改变抗体的生物活性。
6、昆虫糖基化途径与高等真核生物不同，一般表达的重组n糖蛋白的糖链是简单的、没有唾液酸化的高/低甘露糖型，而不是哺乳动物在相同糖基化位置产生的唾液酸化的复合型糖链。这可能是由于其细胞具有高n-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性、低糖基转移酶活性及较少糖-核苷来源。免疫球蛋白g(igg)抗体的片段可结晶(fc)区引发的效应器功能会因天冬酰胺-297(asn-297)处末端唾液酸(sia)残基的存在而发生变化。研究发现，高唾液酸化会阻碍的与自然杀伤细胞(nk)上的fcγriiia的结合，导致adcc效力降低。sf9细胞表达的没有末端唾液酸残基的糖链也可以和甘露糖受体(cd206)结合，这可能增加了树突状细胞对糖蛋白的摄取和处理能力，从而增强了免疫反应(scallon b j,tam s h,mccarthy s g,et al.higher levels of sialylated fc glycans in immunoglobulin gmolecules canadversely impact functionality[j].molecular immunology,2007,44(7):1524-1534.)。
7、除了大量的人的免疫球蛋白，非人源化的抗体加抗原作为治疗型疫苗也已经有成功的例子，比如ca-125+小老鼠的igg1，oregovomab(m.brewer,r.angioli,g.scambia,etal.,front-line chemo-immunotherapy with carboplatin-paclitaxel usingoregovomab indirect immunization in...,gynecologic oncology,https://doi.org/10.1016/j.ygyno.2019.12.024)，这个例子表明小鼠的igg可以增加其携带的抗原的免疫应答。有的研究者把小鼠igg1的fc片段直接接上各种抗原，比如hbv-mfc，也已经产生了不错的效果(allan ma et al.a dendritic cell receptor-targeted chimericimmunotherapeutic protein(c-hbv)for the treatment of chronic hepatitis b,human vaccines&immunotherapeutics2020,vol.16,no.4,756–778)。
8、相对文献中有许多对人的免疫球蛋白的fc片段进行改造的报道，然而对小鼠的免疫球蛋白fc片段的改造的报道相对较少，工程改造能不能增加递呈效应，我们认为有必要进行小鼠免疫球蛋白的fc片段的工程改造的研究。
技术实现思路
1、本申请提供一种经糖基修饰的融合蛋白，包括鼠源fc变体和前列腺癌肿瘤抗原，其中，鼠源fc变体是通过对鼠源igg1 fc片段进行改造后得到的，有助于提高鼠源fc片段与dc细胞的结合和dc活化，包括特异性t细胞的增殖和活化。
2、本申请还提供一种编码上述融合蛋白的核酸分子，以及包括该核酸分子的表达载体、宿主细胞。
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【技术保护点】
1.一种经糖基修饰的融合蛋白，其特征在于，包含鼠源Fc变体和前列腺癌肿瘤抗原，所述融合蛋白提高与DC细胞的结合和DC活化，包括特异性T细胞的增殖和活化；
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述鼠源Fc变体的氨基酸序列如SEQID NO:2或SEQ ID NO:3所示。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述糖基化修饰中，糖基来源于甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺和岩藻糖中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述糖基化修饰中，所述糖基连接形成的糖链结构选自高甘露糖型、寡甘露糖型、岩藻糖型中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述前列腺癌肿瘤抗原为PAP。
6.根据权利要求1～5任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包含蛋白标签。
7.根据权利要求1～6任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包含连接肽。
8.一种编码权利要求1～7任一项所述的融合蛋白的核酸分子。
9.一种重组表达载体，其特征在于，包括权
10.一种宿主细胞，其特征在于，包括权利要求9所述的重组表达载体。
11.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1～7任一项所述的融合蛋白和药学上可接受的载体。
12.权利要求1～7任一项所述的融合蛋白在制备用于治疗前列腺癌的药物方面的应用。
13.权利要求1～7任一项所述的融合蛋白在制备用于治疗表达PAP肿瘤抗原的任一肿瘤的药物方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种经糖基修饰的融合蛋白，其特征在于，包含鼠源fc变体和前列腺癌肿瘤抗原，所述融合蛋白提高与dc细胞的结合和dc活化，包括特异性t细胞的增殖和活化；
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述鼠源fc变体的氨基酸序列如seqid no:2或seq id no:3所示。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述糖基化修饰中，糖基来源于甘露糖、n-乙酰葡萄糖胺和岩藻糖中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述糖基化修饰中，所述糖基连接形成的糖链结构选自高甘露糖型、寡甘露糖型、岩藻糖型中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述前列腺癌肿瘤抗原为pap。
6.根据权利要求1～...
【专利技术属性】
技术研发人员：史跃年，俞波，陆汉新，
申请(专利权)人：凯米生物医药成都有限公司，
类型：发明
国别省市：
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