【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于黄原胶制备。更具体地，本专利技术涉及一种用于培养转基因野油菜黄单胞菌的发酵营养液以及生产黄原胶的方法。
技术介绍
1、黄原胶(xanthan gum，xg)又名汉生胶、黄胞胶，是一种酸性多糖。目前，它主要是通过野油菜黄单胞菌(xanthomonas campestris)，以玉米淀粉、蔗糖等碳水化合物为主要原料，经过好氧深层发酵得到。黄原胶的基本结构为3种单糖组成的重复单元，分别为葡萄糖、甘露糖和葡萄糖醛，其比例为2∶2∶1。由于独特的结构，其具有良好的增稠性、悬浮性和乳化稳定性，成为一种具有巨大商业收益及潜在价值的多功能微生物多糖，在石油开采微生物驱油技术中的驱油剂制备方面有重要的作用。
2、但由于微生物驱油技术本身具有限制因素，加之大多油田具有较差的地质条件和较大的开发难度，微生物驱油技术在油田应用中仍存在一些问题亟待解决。例如，黄原胶的生产工艺主要是利用微生物发酵，包括种子培养、菌种发酵、以及发酵液后处理等一系列过程，但由于转基因野油菜黄单胞菌的增值率不高、现有菌株的产量受到限制，并且影响了其应用和推广。
3、有鉴于此，亟需提供一种用于培养转基因野油菜黄单胞菌的发酵营养液配方以及生产黄原胶的优化方法，以便在保持良好性能的前提下，提高黄原胶的产量。
技术实现思路
1、为了至少解决如上所提到的一个或多个技术问题，本申请在多个方面中提出了对现有技术进行改进的方案。
2、在第一方面中，本申请涉及一种发酵营养液，其包括：可溶性糖类、柠檬
3、根据本申请的一个实施方式，所述蔗糖的含量为30-50g/l，所述柠檬酸的含量为1.5-3g/l，所述nh4no3的含量为1-2g/l，所述kh2po4的含量为2-3g/l，所述mgcl2的含量为0.3-1g/l，所述na2so4的含量为50-150mg/l，所述h3bo3的含量为2-10mg/l，所述fecl3的含量为10-30mg/l。
4、根据本申请的一个实施方式，在所述发酵营养液中还加入4-8mg/l的zno、10-30mg/l的caco3和0.1-0.16ml/l的浓hcl，并通过添加氢氧化钠而将所述发酵营养液的ph值调为7.0。
5、在第二方面中，本申请涉及一种发酵营养液，其包括：可溶性糖类和无机培养液成分；所述可溶性糖类包括葡萄糖，所述无机培养液成分包括(nh4)3po4、mgso4和kh2po4。
6、根据本申请的一个实施方式，所述葡萄糖的含量为15-30g/l，所述(nh4)3po4的含量为1.0-3g/l，所述mgso4的含量为0.05-0.15g/l，所述kh2po4的含量为2-3g/l。
7、根据本申请的一个实施方式，在所述发酵营养液中还加入1-5g/l的caco3，并通过添加氢氧化钠而将所述发酵营养液的ph值调为7.0。
8、在第三方面中，本申请涉及一种黄原胶的生产方法，其包括以下步骤：
9、1)发酵培养步骤：将转基因野油菜黄单胞菌置于发酵营养液中培养，先后经过平板培养，ii级纯化培养，iii、iv级接种培养；
10、2)预处理步骤：对步骤1)所得到的含有菌株的发酵营养液进行巴氏灭菌，再先后加入溶菌酶和中性蛋白酶，搅拌酶解后过滤；
11、3)黄原胶分离步骤：对步骤2)所得到的含有菌株的发酵营养液加入naoh调节ph值至碱性，加入cacl2充分搅拌后形成黄原胶-钙盐混合物；脱水烘干形成块状物，醇洗后加入hcl；之后再脱水烘干并研磨成粉；醇洗后过滤并收集悬浊液，离心获得黄原胶。
12、根据本申请的一个实施方式，步骤1)中的发酵营养液为上述第一方面的发酵营养液或者第二方面的发酵营养液。
13、根据本申请的一个实施方式，步骤2)满足以下条件下任一项：
14、步骤2)中所加入溶菌酶的重量百分比为总量的0.01％～0.05％；
15、步骤2)中所加入中性蛋白酶的重量百分比为总量的0.1％～0.5％。
16、根据本申请的一个实施方式，步骤3)中所加入cacl2的含量为10-20g/l。
17、具体实施方式
18、下面将结合本专利技术实施例中的具体实施方式，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
19、应当理解，本专利技术的说明书和权利要求书中使用的术语“包括”和“包含”指示所描述特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素、组件和/或其集合的存在或添加。
20、还应当理解，在此本专利技术说明书中所使用的术语仅仅是出于描述特定实施例的目的，而并不意在限定本专利技术。如在本专利技术说明书和权利要求书中所使用的那样，除非上下文清楚地指明其它情况，否则单数形式的“一”、“一个”及“该”意在包括复数形式。还应当进一步理解，在本专利技术说明书和权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合，并且包括这些组合。
21、如在本说明书和权利要求书中所使用的那样，术语“如果”可以依据上下文被解释为“当...时”或“一旦”或“响应于确定”或“响应于检测到”。类似地，短语“如果确定”或“如果检测到[所描述条件或事件]”可以依据上下文被解释为意指“一旦确定”或“响应于确定”或“一旦检测到[所描述条件或事件]”或“响应于检测到[所描述条件或事件]”。
22、在本专利技术中，所使用的材料或试剂，如无特别说明，均可从常规商业途径获取。
23、本专利技术从野油菜黄单胞菌(xanthomonas campestris)菌株的产黄原胶的dna片段通过crispr/cas技术手段，通过重组质粒植入农杆菌，获得产量高的农杆菌(agrobacterium)，并将该重组农杆菌菌株命名为agrobacterium-xg(也就是上文所称的“转基因野油菜黄单胞菌”)。野油菜黄单胞菌/xanthomonas campestris来源：武汉市灰藻生物科技有限公司，货号:hzb140304。
24、作为本申请的一种实施方式，本申请提供了一种用于培养转基因野油菜黄单胞菌的发酵营养液i，其包括：可溶性糖类、柠檬酸和无机培养液成分；所述可溶性糖类包括蔗糖，所述无机培养液成分包括nh4no3、kh2po4、mgcl2、na2so4、h3bo3和fecl3。
25、优选地，所述蔗糖的含量为30-50g/l，所述柠檬酸的含量为1.5-3g/l，所述nh4no3的含量为1-2g/l，所述kh2po4的含量为2-3g/l，所述mgcl2的含量本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种发酵营养液，其包括：可溶性糖类、柠檬酸和无机培养液成分；所述可溶性糖类
2.根据权利要求1所述的发酵营养液，其特征在于，所述蔗糖的含量为30-50g/L，所述柠檬酸的含量为1.5-3g/L，所述NH4NO3的含量为1-2g/L，所述KH2PO4的含量为2-3g/L，所述MgCl2的含量为0.3-1g/L，所述Na2SO4的含量为50-150mg/L，所述H3BO3的含量为2-10mg/L，所述FeCl3的含量为10-30mg/L。
3.根据权利要求1或2所述的发酵营养液，其特征在于，在所述发酵营养液中还加入4-8mg/L的ZnO、10-30mg/L的CaCO3和0.1-0.16ml/L的浓HCl，并通过添加氢氧化钠而将所述发酵营养液的pH值调为7.0。
4.一种发酵营养液，其包括：可溶性糖类和无机培养液成分；所述可溶性糖类包括葡萄糖，所述无机培养液成分包括(NH4)3PO4、MgSO4和KH2PO4。
5.根据权利要求4所述的发酵营养液，其特征在于，所述葡萄糖的含量为15-30g/L，所述(NH4)3PO4的含量为1.0-3
6.根据权利要求4或5所述的发酵营养液，其特征在于，在所述发酵营养液中还加入1-5g/L的CaCO3，并通过添加氢氧化钠而将所述发酵营养液的pH值调为7.0。
7.一种黄原胶的生产方法，其包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中的发酵营养液为权利要求1-3中任一项的发酵营养液或者权利要求4-6中任一项的发酵营养液。
9.根据权利要求7或8所述的生产方法，其特征在于，步骤2)满足以下条件下任一项：
10.根据权利要求7或8所述的生产方法，其特征在于，步骤3)中所加入CaCl2的含量为10-20g/L。
...【技术特征摘要】
1.一种发酵营养液，其包括：可溶性糖类、柠檬酸和无机培养液成分；所述可溶性糖类
2.根据权利要求1所述的发酵营养液，其特征在于，所述蔗糖的含量为30-50g/l，所述柠檬酸的含量为1.5-3g/l，所述nh4no3的含量为1-2g/l，所述kh2po4的含量为2-3g/l，所述mgcl2的含量为0.3-1g/l，所述na2so4的含量为50-150mg/l，所述h3bo3的含量为2-10mg/l，所述fecl3的含量为10-30mg/l。
3.根据权利要求1或2所述的发酵营养液，其特征在于，在所述发酵营养液中还加入4-8mg/l的zno、10-30mg/l的caco3和0.1-0.16ml/l的浓hcl，并通过添加氢氧化钠而将所述发酵营养液的ph值调为7.0。
4.一种发酵营养液，其包括：可溶性糖类和无机培养液成分；所述可溶性糖类包括葡萄糖，所述无机培养液成分包括(nh4)3po4、mgso4和k...
【专利技术属性】
技术研发人员：何磊，靳丙辉，于景景，于阅，曾金雨，
申请(专利权)人：北京鼎安时代科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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