【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于有机硒检测相关，更具体地说，特别涉及一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法。
技术介绍
1、高硒玉米胚芽粉是一种富含硒元素的功能性食品原料，因其具有良好的抗氧化、免疫调节等健康功效，逐渐受到广泛关注，硒是一种必需的微量元素，适量摄入对人体健康具有重要意义，高硒玉米胚芽粉由于其丰富的营养成分及较高的硒含量，已被广泛应用于食品和保健品领域。
2、然而，现有技术中，针对高硒玉米胚芽粉中有机硒的检测方法还存在一些问题，常规的检测方法，如原子荧光光度法和色谱分析技术，虽然灵敏度较高，但在面对复杂基质时，检测的准确性和重复性往往不足，此外，样品处理过程中，硒的氧化、重金属离子的干扰以及有机硒的提取效率低下，都会对最终的检测结果造成不利影响，这些问题使得高硒玉米胚芽粉中有机硒的检测面临诸多挑战，急需开发一种高效、准确的检测方法，以确保检测结果的可靠性，进而充分发挥高硒玉米胚芽粉的健康功效。
3、本专利技术旨在解决上述问题，通过优化酶解、离心、沉淀和检测步骤，提出一种高效的高硒玉米胚芽粉中有机硒含量的检测方法，以提高检测精度和重复性，并确保复杂基质中有机硒的准确测定。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，用于克服现有技术中的上述缺陷。
2、本专利技术一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法的目的与功效，由以下具体技术手段所达成：
3、一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，包括以下步骤：
4
5、s2：向离心管中加入酶解缓冲液，再加入胰蛋白酶和蛋白酶k，混匀后进行超声酶解提取，提取过程如下：
6、s21：酶解缓冲液的选择：使用三(羟甲基)氨基甲烷-hcl缓冲溶液，浓度为0.03～0.06mol/l，ph值控制在7.2～7.5之间，以维持最佳的酶活性；
7、s22：酶的种类和用量：胰蛋白酶的用量为50～100mg，蛋白酶k的用量为8～15mg，以确保对蛋白质的高效分解；
8、s23：超声条件：提取温度控制在40～50℃，提取时间为1.5～2小时，超声功率为200～250w，以提高酶解效率；
9、s24：添加硫代硫酸钠作为保护剂，以防止样品中硒的氧化和损失；
10、s25：在酶解过程中，加入edta（二钠乙二胺四乙酸）作为螯合剂，用量为0.01～0.05mol/l，以去除样品中可能存在的重金属离子干扰；
11、s3：提取后样品离心，转速为10000～12000rpm，时间为20～30分钟，温度保持在4℃以下，取上清液；
12、s4：利用色谱-质谱联用系统和原子荧光光度计测定上清液中的总硒含量，并通过改进的差减法计算有机硒含量，具体步骤如下：
13、s41：使用特定的选择性沉淀剂（如磷酸钠或硝酸银）预处理上清液，以沉淀并过滤掉无机硒；
14、s42：将滤液中的有机硒以氢化物形式转化，通过原子荧光光度计检测，排除干扰后的信号即为有机硒含量；
15、s43：采用外标法与内标法结合的方式进行校准，确保检测结果的准确性和灵敏度。
16、进一步的技术方案，酶解过程中，超声条件包括采用间歇性超声提取方式，每次超声提取30分钟，间隔10分钟，循环3次，以进一步提高酶解效率和有机硒的提取率。
17、进一步的技术方案，在离心过程中，加入硝酸银作为选择性沉淀剂，使用浓度为0.1～0.2mol/l，预处理后通过0.22μm微孔滤膜过滤，并加入上清液体积0.5～2倍的甲醇，以去除无机硒并提高滤液的纯净度。
18、进一步的技术方案，在s4步骤中，外标法的标准硒形态采用硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸，内标法的校准物质为甲基硒代半胱氨酸，以提高检测结果的稳定性和重复性。
19、进一步的技术方案，在酶解处理前对样品进行液氮预冷处理，冷冻温度为～196℃，冷冻时长为15分钟，粉碎过程中采用双层隔热装置保温，以防止有机硒因温度波动而挥发。
20、进一步的技术方案，酶解缓冲液还包括1%～2%的甘油，作为稳定剂以保护酶活性。
21、进一步的技术方案，所述色谱-质谱联用系统中，流动相为甲醇和柠檬酸二铵缓冲液，甲醇体积分数为2%，缓冲液浓度为5～10mmol/l。
22、进一步的技术方案，外标法采用的标准硒形态包括硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸，标准溶液浓度为0、20、50、100ug/l。
23、进一步的技术方案，在色谱-质谱分析中采用的色谱柱为c18色谱柱，尺寸为2.1mmx 50mm，粒径为1.7μm，以实现对硒化合物的高效分离。
24、进一步的技术方案，所述样品在进行色谱-质谱分析前，使用0.22μm的水相滤膜过滤，以去除可能存在的微粒杂质，防止堵塞色谱柱。
25、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
26、通过在酶解过程中使用优化的缓冲液、酶用量和超声条件，并结合edta和硫代硫酸钠作为保护剂和螯合剂，能够显著提高样品中有机硒的提取率，这些措施有效减少了样品在处理过程中的硒氧化及重金属离子的干扰，保证了样品的完整性和稳定性，最终，结合差减法和内外标法的使用，大大提高了检测的精度和准确性，使得即使在复杂基质下也能得到可靠的有机硒含量数据。
27、该方法在保持高灵敏度和高精度的同时，操作流程简便、易于实施，超声酶解的优化、合理的离心处理以及成熟的原子荧光光度计检测技术，使得该方法可以在实验室条件下广泛应用于不同种类的富硒食品及其制品的有机硒检测，此外，利用选择性沉淀和氢化物形式转化的步骤，有效避免了传统方法中的基质干扰问题，使得检测过程更加适用于各种复杂样品的分析。
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1.一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，酶解过程中，超声条件包括采用间歇性超声提取方式，每次超声提取30分钟，间隔10分钟，循环3次，以进一步提高酶解效率和有机硒的提取率。
3.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在离心过程中，加入硝酸银作为选择性沉淀剂，使用浓度为0.1～0.2mol/L，预处理后通过0.22μm微孔滤膜过滤，并加入上清液体积0.5～2倍的甲醇，以去除无机硒并提高滤液的纯净度。
4.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在S4步骤中，外标法的标准硒形态采用硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸，内标法的校准物质为甲基硒代半胱氨酸，以提高检测结果的稳定性和重复性。
5.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在酶解处理前对样品进行液氮预冷处理，冷冻温度为～196℃，冷冻时长为15分钟，粉碎过程中采用双层隔热装置保温，以防止有机
6.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，酶解缓冲液还包括1%～2%的甘油，作为稳定剂以保护酶活性。
7.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在色谱-质谱联用系统中，流动相为甲醇和柠檬酸二铵缓冲液，甲醇体积分数为2%，缓冲液浓度为5～10mmol/L。
8.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，外标法采用的标准硒形态包括硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸，标准溶液浓度为0、20、50、100ug/L。
9.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在色谱-质谱分析中采用的色谱柱为C18色谱柱，尺寸为2.1mm x 50mm，粒径为1.7μm，以实现对硒化合物的高效分离。
10.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，样品在进行色谱-质谱分析前，使用0.22μm的水相滤膜过滤，以去除可能存在的微粒杂质，防止堵塞色谱柱。
...【技术特征摘要】
1.一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，酶解过程中，超声条件包括采用间歇性超声提取方式，每次超声提取30分钟，间隔10分钟，循环3次，以进一步提高酶解效率和有机硒的提取率。
3.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在离心过程中，加入硝酸银作为选择性沉淀剂，使用浓度为0.1～0.2mol/l，预处理后通过0.22μm微孔滤膜过滤，并加入上清液体积0.5～2倍的甲醇，以去除无机硒并提高滤液的纯净度。
4.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在s4步骤中，外标法的标准硒形态采用硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸，内标法的校准物质为甲基硒代半胱氨酸，以提高检测结果的稳定性和重复性。
5.根据权利要求1所述的一种高硒玉米胚芽粉的有机硒含量检测方法，其特征在于，在酶解处理前对样品进行液氮预冷处理，冷冻温度为～196℃，冷冻时长为15分钟，粉碎过程中采用双层隔热装置保温，以防...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱新科，王新瑞，王帅，刘厚民，范世萍，刘强，梁慧霞，刘绣华，马凡怡，宋孟迪，张亚宏，王宏磊，
申请(专利权)人：瑞之恩生物科技河南有限公司，
类型：发明
国别省市：
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