【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血糖测定，具体涉及一种测定血清葡萄糖浓度的方法。
技术介绍
1、血清葡萄糖测定主要是通过化验血清当中葡萄糖的含量，从而达到了解葡萄糖代谢是否正常的目的。血清葡萄糖就是血糖，主要是指血液当中葡萄糖的浓度，血清葡萄糖主要来源于食物，比如淀粉、乳糖、麦芽糖、肉内肌糖原、甘蔗等等，这一类的物质进入人体之后会被人体消化吸收转化为葡萄糖，被人体储存在肝脏或者肌肉内，会通过血液的方式给输送到组织器官中氧化分解，为人体提供充足的生命活动能量。正常情况下，血清葡萄糖的正常值应在3.89-6.11mmol/l，葡萄糖的数值如果不在此范围内，则说明葡萄糖代谢异常，当空腹的血糖超过此范围时，一般会被诊断为糖尿病或糖尿病前期，如果血糖值低于正常范围则说明消耗过多。
2、传统葡萄糖浓度测定方法有高效液相色谱法、离子色谱法、分光光度法、生物传感器法、荧光法等；碘化钾作转化物质，基于罗丹明系列荧光猝灭法测定血清葡萄糖浓度，最低检测限1.0×10-8 mol/l，然而过程复杂，中间不确定性因素增加。目前血糖的检测方法通常使用试剂盒法，以双酶法为代表，在医疗卫生、食品检验检疫等领域得到广泛应用。通过葡萄糖氧化酶(god) 催化氧化葡萄糖生成h2o2，在过氧化酶催化作用下，h2o2进一步与4-氨基安替比林/苯酚发生显色反应，显色液在可见光区500nm 波长处吸光度决定血样葡萄糖浓度。然而该试剂盒选用两种酶，导致成本增加，难以保存，4-氨基安替比林属于芳香伯胺类物质，具有急性毒性和致畸性，摩尔吸光系数偏小，光灵敏性差存放时段有限；苯酚以第三催
3、针对上述问题，亟需本领域技术人员提出一种测试过程简单、成本低廉、稳定安全、系统误差小以及不受血清本色影响的测定血清葡萄糖浓度的方法。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述技术问题，提供了一种测定血清葡萄糖浓度的方法。解决了现有技术中过程复杂、成本高昂、不稳定、有毒、系统误差过大且易受血清本色影响的问题。
2、本专利技术的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，包括如下步骤：
3、s1：配置溶液：分别配置15ku/l的葡萄糖氧化酶、1mmol/l葡萄糖标准溶液、0.1mol/l的碘化钾溶液、0.5mol/l的硫酸溶液；
4、s2：建立葡萄糖工作标准曲线：用分光光度计测定不同浓度的葡萄糖反应液在选定波长360nm处的吸光度值,由吸光度值与葡萄糖浓度之间的对应关系建立葡萄糖工作曲线，计算葡萄糖工作曲线方程斜率k；（l/mmol·cm）
5、s3：采集血清标本：血清标本包括临床血清（用于临床检验）和质控血清（用于实验教学）；
6、s4：分析检测：将血清标本和葡萄糖氧化酶试剂加入10 ml比色管中，37℃孵育30min，再加入s1中 ki溶液和硫酸溶液，37℃反应20min后，定容，蒸馏水作参比，测定其在步骤s2所选波长（360nm）处的吸光度值，并扣除酶空白；
7、s5：计算血清中葡萄糖浓度：将步骤s4所测吸光度值与步骤s2所建立工作曲线进行对照，根据计算血清中葡萄糖浓度，其中a为吸光度；k为葡萄糖工作曲线方程斜率，k=11.54l/mmol·cm；v为反应体系总体积；v 为样品体积。
8、进一步地，所述步骤s1中配置15ku/l的葡萄糖氧化酶的具体步骤为称取30mg葡萄糖氧化酶标准品(50u/mg，sigma公司），用10ml二次蒸馏水溶解，4℃低温保存。
9、进一步地，所述步骤s1中配置1mmol/l葡萄糖标准溶液的具体步骤为称取一水葡萄糖固体19.8mg，用100ml二次蒸馏水溶解。
10、进一步地，所述步骤s1中配置0.1mol/l的碘化钾溶液的具体步骤为称取碘化钾固体1g，直接放到小试剂瓶，加水到60 ml标线，振荡溶解，随用随配。
11、进一步地，所述步骤s1中配置0.5mol/l的硫酸溶液的具体步骤为准确吸取2.7 ml浓硫酸至100 ml超纯水中混匀。
12、进一步地，所述步骤s4中将100μl血清标本和50μl的15ku/l葡萄糖氧化酶溶液加入10 ml比色管中，37℃孵育30 min，再加入s1中 0.50ml的ki溶液和2.00ml的硫酸溶液，37℃反应20min 后，定容，蒸馏水作参比，测定其在步骤s2所选波长（360nm）处的吸光度值，扣除酶空白。
13、更进一步地，所述步骤s4中测定吸光度值a的过程中光程d为1cm，入射光波长λ为360nm。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
15、本专利技术方法中使用葡萄糖氧化酶催化氧化血清中的葡萄糖从而产生h2o2，在硫酸介质中h2o2与i-发生氧化还原反应生成i2，用紫外可见分光光度计测定吸光度，从而计算血清中葡萄糖的含量。本专利技术方法操作过程简单、成本低、所使用试剂安全无害，存放时间长，适合商用试剂盒的研发；光灵敏性好，最低检测限为2.72×10-6 mol/l；抗干扰能力强，选择性好，可有效消除溶解氧及血清共存物质的干扰，不受血清本色的影响。
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1.一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置15KU/L的葡萄糖氧化酶的具体步骤为称取30mg葡萄糖氧化酶标准品，用10ml二次蒸馏水溶解，4℃低温保存。
3.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置1mmol/L葡萄糖标准溶液的具体步骤为称取一水葡萄糖固体19.8mg，用100ml二次蒸馏水溶解。
4.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置0.1mol/L的碘化钾溶液的具体步骤为称取碘化钾固体1g放到小试剂瓶，加水到60 mL标线，振荡溶解，随用随配。
5.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置0.5mol/L的硫酸溶液的具体步骤为吸取2.7 mL浓硫酸至100 mL超纯水中混匀。
6.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤S4中将100μL血清标本和50μL的
7.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤S4中测定吸光度值A的过程中光程d为1cm，入射光波长λ为360nm。
...【技术特征摘要】
1.一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤s1中配置15ku/l的葡萄糖氧化酶的具体步骤为称取30mg葡萄糖氧化酶标准品，用10ml二次蒸馏水溶解，4℃低温保存。
3.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤s1中配置1mmol/l葡萄糖标准溶液的具体步骤为称取一水葡萄糖固体19.8mg，用100ml二次蒸馏水溶解。
4.根据权利要求1所述的一种测定血清葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述步骤s1中配置0.1mol/l的碘化钾溶液的具体步骤为称取碘化钾固体1g放到小试剂瓶，加水到60 ml标线，振荡溶解，随用随配。
【专利技术属性】
技术研发人员：白莹，陈嘉琦，董娜，张爱菊，张小林，
申请(专利权)人：甘肃医学院，
类型：发明
国别省市：
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