【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，尤其涉及一种增强dc-cik细胞因子分泌能力的培养方法。
技术介绍
1、dc-cik细胞，即树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养的细胞，是一种结合了树突状细胞(dc)的抗原呈递功能和cik细胞的杀伤功能的免疫细胞。dc细胞能够有效地将肿瘤抗原提呈给t细胞，而cik细胞则具有强大的抗肿瘤活性。
2、dc-cik细胞在肿瘤免疫治疗中显示出巨大的潜力，它们能够有效地识别并攻击肿瘤细胞，同时通过分泌细胞因子增强免疫反应。这种细胞疗法被认为是肿瘤过继免疫治疗的首选方案之一。然而，尽管dc-cik细胞在肿瘤治疗中显示出潜力，但现有的制备方法存在一些局限性，如cik细胞培养环境不利于dc细胞生长、dc细胞成熟慢、生存期短等问题，这些问题限制了dc-cik细胞的扩增和杀伤功能。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种增强dc-cik细胞因子分泌能力的培养方法，增强dc-cik细胞的细胞因子分泌能力，可以显著提高其对肿瘤细胞的杀伤效果，并增强免疫记忆效应。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种增强dc-cik细胞因子分泌能力的培养方法，包括如下步骤：
4、(1)将结肠癌细胞进行培养，得到培养后的结肠癌细胞；
5、(2)将培养后的结肠癌细胞和dc-cik细胞混合后共培养，得到共培养产物；
6、(3)在共培养产物中加入brefeldina溶液和莫能菌
7、(4)将阻断产物离心，将沉淀重悬后封闭，得到细胞因子分泌能力增强的dc-cik。
8、作为优选，步骤(1)中所述的结肠癌细胞为sw480结肠癌细胞。
9、作为优选，步骤(1)中所述结肠癌细胞在培养前需要进行预培养；
10、所述预培养的方法包括如下步骤：
11、a、将结肠癌细胞在35～39℃、4～6％co2条件下静置44～52h，将培养基更换为含有8～12％fbs的1640培养基；
12、b、等到细胞融合度达到75～85％时，进行细胞传代；
13、c、去掉培养液上清，用pbs清洗细胞后用胰酶消化；
14、d、加入含有8～12％fbs的1640培养基，离心后重悬，得到预培养后的sw480结肠癌细胞；
15、所述离心的条件为：300～500g离心5～10min。
16、作为优选，步骤(1)中所述培养的条件为35～39℃、4～6％co2，所述培养的时间为22～26h。
17、作为优选，步骤(2)中所述培养后的结肠癌细胞和dc-cik细胞的数量比为1：0.8～1.2。
18、作为优选，步骤(2)中所述共培养的条件为35～39℃、4～6％co2，所述培养的时间为18～22h。
19、作为优选，步骤(3)中所述brefeldina溶液的终浓度为3～5mg/ml，所述莫能菌素溶液的终浓度为3～5mg/ml，所述阻断的时间为4～5h。
20、作为优选，步骤(4)中所述离心的条件为：280～320g、4～6min，所述重悬时采用fbs进行重悬。
21、作为优选，步骤(4)中所述封闭时采用humanbd fc block，所述封闭的时间为8～12min。
22、本专利技术提供了一种增强dc-cik细胞因子分泌能力的培养方法，包括如下步骤：(1)将结肠癌细胞进行培养，得到培养后的结肠癌细胞；(2)将培养后的结肠癌细胞和dc-cik细胞混合后共培养，得到共培养产物；(3)在共培养产物中加入brefeldina溶液和莫能菌素溶液进行阻断，得到阻断产物；(4)将阻断产物离心，将沉淀重悬后封闭，得到细胞因子分泌能力增强的dc-cik。本专利技术利用结肠癌细胞对dc-cik细胞的刺激作用，通过特定的培养条件共刺激，从而得到增强细胞因子分泌能力的dc-cik细胞。增强了细胞因子分泌能力，显著提高其对肿瘤细胞的杀伤效果，并增强免疫记忆效应。
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1.一种增强DC-CIK细胞因子分泌能力的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述的结肠癌细胞为SW480结肠癌细胞。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述结肠癌细胞在培养前需要进行预培养；
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养的条件为35～39℃、4～6％CO2，所述培养的时间为22～26h。
5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述培养后的结肠癌细胞和DC-CIK细胞的数量比为1：0.8～1.2。
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述共培养的条件为35～39℃、4～6％CO2，所述培养的时间为18～22h。
7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述Brefeldin A溶液的终浓度为3～5mg/mL，所述莫能菌素溶液的终浓度为3～5mg/mL，所述阻断的时间为4～5h。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征
9.根据权利要求1～8任意一项所述的培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述封闭时采用Human BD Fc Block，所述封闭的时间为8～12min。
...【技术特征摘要】
1.一种增强dc-cik细胞因子分泌能力的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述的结肠癌细胞为sw480结肠癌细胞。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述结肠癌细胞在培养前需要进行预培养；
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养的条件为35～39℃、4～6％co2，所述培养的时间为22～26h。
5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述培养后的结肠癌细胞和dc-cik细胞的数量比为1：0.8～1.2。
6.根据权利要求5所述的培...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢院荣，张军，叶茂，王仕米，余泳瑜，
申请(专利权)人：广东壹加再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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