【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于合成生物学，具体涉及一种高产的基因工程重组人iv型胶原蛋白、其生产方法和用途。
技术介绍
1、胶原蛋白是一种生物高分子蛋白，是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％。胶原蛋白种类较多，常见类型为ⅰ型、ⅱ型、ⅲ型、ⅴ型和ⅺ型。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。
2、当前，基因工程重组表达是生产胶原蛋白的重要方法之一。特别是重组人胶原，其氨基酸组成与人体的氨基酸组成一致，被认为最接近人体天然合成的胶原蛋白，具有生物相容性好、安全性高。开发出的商业化重组人胶原蛋白产品广泛应用于医学美容、化妆品、医疗器械、保健品等领域。
3、目前重组胶原的生产中主要存在以下问题：1)易降解，由于现有的表达体系下重组胶原不能像天然胶原那样形成稳定的三螺旋结构，易被生产体系中的蛋白酶降解；2)难纯化，胶原易降解导致制备的重组胶原纯化过程中除了宿主蛋白干扰之外还需要去除大量的降解蛋白，增加了纯化的难度，使得高纯度的目的蛋白制备变得困难；3)产量低，因为降解问题的存在，使得重组胶原蛋白的产量偏低，远未达到人们的预期。一般认为，在使用商业化的表达宿主和表达载体的情况下，分子量7万以上的重组胶原蛋白的产量达到10g/l已经是相当高产。因此，量产的重组胶原种类偏少，严重制约了重组胶原的进一步应用。
4、随着重组胶原的市场接受度的逐渐提高，重组胶原的市场需求逐渐的增大，因此能够
5、可以通过构建天然胶原蛋白的截短蛋白或截短肽来获得重组胶原蛋白。截短蛋白在天然胶原蛋白中的位置的不确定性以及长度的不确定性，使得理论上重组胶原蛋白的种类有几千万种。然而，关于这些重组胶原蛋白中的哪些能够具有更高的分泌产量，一直缺少有效的理论指导，必须通过大量的实验验证筛选出最好的结果，这就是目前重组胶原蛋白量产种类少的最主要的原因。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术中存在的技术问题，本专利技术的目的在于，提供一种分泌产量高、安全性好且生物活性强的重组人iv型胶原蛋白。
2、本专利技术包括：
3、1.一种重组人iv型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
4、seq id no:1
5、
6、
7、2.编码项1所述的重组人iv型胶原蛋白的核酸。所述核酸的核苷酸序列例如可以如seq id no:2所示。
8、3.包含项2所述的核酸的表达载体。
9、4.导入了项3所述的表达载体的宿主细胞。所述宿主细胞优选为真核细胞，例如可以为毕赤酵母。
10、5.一种生产项1所述的重组人iv型胶原蛋白的方法，其包括培养项4所述的宿主细胞使其分泌表达所述重组人iv型胶原蛋白，然后进行分离纯化。
11、6.根据项5所述的方法，其中，所述分离纯化采用选自盐析、色谱层析、亲和层析、酸碱沉淀、膜分离中的一种或几种的组合。优选色谱层析与膜分离的组合，或离子交换层析与膜分离的组合。
12、7.根据项1所述的重组人iv型胶原蛋白在制备化妆品或医疗器械中的用途。
13、8.根据项8所述的用途，其中，所述化妆品或医疗器械用于改善皮肤泛红、修护敏感肌肤。
14、9.根据项8所述的用途，其中，所述化妆品或医疗器械被制成适于施用于皮肤的形式，例如面膜、面霜、喷雾、精华水等。
15、本专利技术的有益效果在于：
16、1.产量高：在本
，一般认为，在使用商业化的表达宿主和表达载体的情况下，分子量7万以上的重组胶原蛋白的产量达到10g/l已经是相当高产。而本专利技术提供了一种新的氨基酸序列组成的重组人iv型胶原蛋白，该重组人iv型胶原蛋白为人iv型胶原蛋白α1链的截短蛋白，无需使用特殊的表达元件和手段，该重组人iv型胶原蛋白仅通过商业化毕赤酵母表达系统胞外分泌表达的产量即可高达18g/l，显著高于本
认为的重组胶原蛋白的高产水平，也显著高于人iv型胶原蛋白α1链全长或其它截短蛋白。胞外蛋白sds-page检测结果显示，目标蛋白占比达70％以上，且通过简单的超滤脱色后纯度可达80％。
17、2.细胞毒性明显小于人iv型胶原蛋白α1链全长(见实施例3)。
18、3.促细胞粘附活性及改善皮肤泛红、修护敏感肌功效明显优于人iv型胶原蛋白α1链全长链(见实施例3、实施例4)。
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1.一种重组人IV型胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。
2.编码权利要求1所述的重组人IV型胶原蛋白的核酸；所述核酸的核苷酸序列例如可以如SEQ ID No:2所示。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入了权利要求3所述的表达载体的宿主细胞；所述宿主细胞优选为真核细胞，例如可以为毕赤酵母。
5.一种生产权利要求1所述的重组人IV型胶原蛋白的方法，其包括培养权利要求4所述的宿主细胞使其分泌表达所述重组人IV型胶原蛋白，然后进行分离纯化。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述分离纯化采用选自盐析、色谱层析、亲和层析、酸碱沉淀、膜分离中的一种或几种的组合；优选色谱层析与膜分离的组合，或离子交换层析与膜分离的组合。
7.根据权利要求1所述的重组人IV型胶原蛋白在制备化妆品、外用药品或医疗器械中的用途。
8.根据权利要求8所述的用途，其中，所述化妆品、外用药品或医疗器械用于改善皮肤泛红、修护敏感肌肤。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，所述化妆品、外用药品或
...【技术特征摘要】
1.一种重组人iv型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
2.编码权利要求1所述的重组人iv型胶原蛋白的核酸；所述核酸的核苷酸序列例如可以如seq id no:2所示。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入了权利要求3所述的表达载体的宿主细胞；所述宿主细胞优选为真核细胞，例如可以为毕赤酵母。
5.一种生产权利要求1所述的重组人iv型胶原蛋白的方法，其包括培养权利要求4所述的宿主细胞使其分泌表达所述重组人iv型胶原蛋白，然后进行分离纯化。
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【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，贺颖，段志广，殷诗玉，严钰博，
申请(专利权)人：西安巨子生物基因技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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