【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肽类合成领域，具体涉及一种甘精二肽的制备方法。
技术介绍
1、肽类药物是一类具有重要药用价值的化合物，多肽药物具有高选择性、低免疫原性、生物活性强等诸多优势，其在内分泌系统、肿瘤、感染、神经等多个领域均展现出广泛的应用前景。
2、司美格鲁肽(semaglutide)是一种胰高糖素样肽(glp-1)受体激动剂，由诺和诺德开发，2017年12月，美国食品与药物管理局(fda)批准司美格鲁肽注射液上市，用于成人2型糖尿病患者的血糖控制。2021年6月，司美格鲁肽的减肥适应症获fda批准上市，成为首个用于体重管理的每周1次glp-1受体激动剂。司美格鲁肽的多肽氨基酸序列为：his-aib-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-val-ser-ser-tyr-leu-glu-gly-gln-ala-ala-lys(aeea-aee--glu-octadecanedioicmono-t-butylester)-glu-phe-ile-ala-trp-leu-val-arg-gly-arg-gly-oh
3、从司美格鲁肽序列中看出有gly-arg二肽出现。在司美格鲁肽制备过程中，fmoc-gly-arg(pbf)-oh可作为引入该序列的片段中间体。目前未发现文献中有制备高纯度甘精二肽的方法。固相合成或其它方式得到的产品纯度较低，经纯化后纯度只有98％，收率较低。
技术实现思路
1、为克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种能大批量生
2、为了解决上述问题，本专利技术提供的技术方案如下：
3、一种甘精二肽的制备方法，包括如下步骤：
4、(1)以n-芴甲氧羰基甘氨酸为原料，在偶联试剂的参与下与n-羟基琥珀酰亚胺，在有机溶剂中反应；反应结束后，直接将反应液降温搅拌大量固体析出抽滤，得活性酯粗品fmoc-gly-osu；所述步骤(1)所得粗品中加入乙酸乙酯打浆，抽滤固体用0-5℃乙酸乙酯淋洗，烘干后得合格的n-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯；
5、(2)以四氢呋喃为反应溶剂，n-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯与胍基受保护的精氨酸arg(pbf)-oh在有机碱参与下反应，反应结束后，生成fmoc-gly-arg(pbf)-oh甘精二肽。
6、进一步的，在步骤(1)中还包括采用乙酸乙酯低温对粗品fmoc-gly-osu活性酯的打浆纯化的步骤，具体方式为：直接将反应液降温至-5～0℃搅拌大量固体析出抽滤，得活性酯粗品，所得粗品中加入乙酸乙酯在10～15℃下打浆1～2小时，抽滤固体用冷乙酸乙酯淋洗，烘干后得合格的n-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯(fmoc-gly-osu)；
7、进一步的，在步骤(1)中所述反应溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、二氧六环、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺或氯仿中的一种；
8、进一步的，在步骤(1)中所述n-芴甲氧羰基甘氨酸与n-羟基琥珀酰亚胺的反应时间为30min～12h；反应温度-5～25℃；更进一步的优选时间范围为1～6h，优选反应温度为-5～5℃。
9、进一步的，在步骤(1)中所述反应中间体粗品fmoc-gly-osu活性酯与乙酸乙酯的质量比为1:4.5～10。
10、进一步的，在步骤(1)中所述n-芴甲氧羰基甘氨酸，n-羟基琥珀酰亚胺与偶联试剂的摩尔比为1:1:1.0～2.0，优选1:1:1.1～1.5。所述步骤(1)中的偶联试剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(edci)。
11、进一步的，在步骤(1)中所述反应中间体粗品fmoc-gly-osu活性酯与乙酸乙酯的质量比为1:5～10。
12、进一步的，在步骤(2)中所述n-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯与胍基受保护的精氨酸的反应时间为30min～14h，反应温度0～30℃；更进一步的优选时间范围为4～10h，优选反应温度5～15℃。
13、进一步的，在步骤(2)中所述n-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯与胍基受保护的精氨酸的摩尔比为：1:1.0～1.5，优选摩尔比为1:1.0～1.3。
14、进一步的，所述步骤(2)还包括如下后处理步骤：
15、s1：反应结束，浓缩回收四氢呋喃，加入乙酸乙酯/水使用无机酸调节ph至3～4，萃取完成后加水搅洗酯层；
16、s2：将步骤s1所得的酯层浓缩，所得油状物粗品用乙酸乙酯/正庚烷搅拌降温结晶、甩滤，至产品合格。
17、进一步的，在步骤(2)中所述后处理s2中结晶溶剂乙酸乙酯/正庚烷的体积比为1:1～2。结晶溶剂体积(ml)：油状物粗品质量(g)比为6～8：1，优选的7～7.5：1。
18、进一步的，在步骤(2)中有机碱为n-乙基二异丙胺。所述步骤s1的无机酸为盐酸。
19、本专利技术中化合物的中文命名与结构式有冲突的，以结构式为准；结构式有明显错误的除外。
20、本专利技术提供的一种甘精二肽的制备方法，该方法为以n-芴甲氧羰基甘氨酸为原料与n-羟基琥珀酰亚胺在偶联试剂作用下生成活性酯；生成的活性酯与胍基受保护的精氨酸arg(pbf)-oh在有机碱的作用下制备得到一种甘精二肽，其结构为fmoc-gly-arg(pbf)-oh。本专利技术制备的活性酯fmoc-gly-osu可直接降温从反应溶剂中析出，粗品活性酯采用乙酸乙酯低温打浆的方式提高了纯度，有效去除脲类等副产。最终的产品甘精二肽具有纯度高，产率高的优点，同时操作简单、设备要求低适用于大规模的工业化生产。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种甘精二肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)反应时间为30min～12h；反应温度-5～25℃；所述降温温度为-5～0℃。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)乙酸乙酯打浆具体为：在10～15℃下打浆1～2小时；活性酯粗品Fmoc-Gly-OSu与乙酸乙酯的质量比为1:4.5～10。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的反应有机溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、二氧六环、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺或氯仿中的一种；所述步骤(1)中的偶联试剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)N-芴甲氧羰基甘氨酸，N-羟基琥珀酰亚胺与偶联试剂的摩尔比为1:1:1.0～2.0；所用有机溶剂量与N-芴甲氧羰基甘氨酸的体积重量比(ml/g)为7～10:1。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)反应时间为30min～14h，反应温度0～30℃。
7.如权利
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)N-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯与胍基受保护的精氨酸摩尔比为：1:1.0～1.5；所述步骤(2)中的有机碱为N-乙基二异丙胺，N-芴甲氧羰基甘氨酸羟基琥珀酰亚胺酯与有机碱的摩尔比为0.7～0.8:1。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤S1的无机酸为盐酸，乙酸乙酯/水质量比为1：0.5～0.6。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)后处理步骤S2中结晶溶剂乙酸乙酯/正庚烷的体积比为1:1～2，降温温度为0-5℃，结晶溶剂体积：油状物粗品质量比为6～8：1。
...【技术特征摘要】
1.一种甘精二肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)反应时间为30min～12h；反应温度-5～25℃；所述降温温度为-5～0℃。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)乙酸乙酯打浆具体为：在10～15℃下打浆1～2小时；活性酯粗品fmoc-gly-osu与乙酸乙酯的质量比为1:4.5～10。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的反应有机溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、二氧六环、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺或氯仿中的一种；所述步骤(1)中的偶联试剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)n-芴甲氧羰基甘氨酸，n-羟基琥珀酰亚胺与偶联试剂的摩尔比为1:1:1.0～2.0；所用有机溶剂量与n-芴甲氧羰基甘氨酸的体积重量比(...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玉琴，詹玉进，郭健，曹焕岩，
申请(专利权)人：常州吉恩药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。