【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析方法，具体而言，涉及一种替考拉宁组分解析的液质分析方法。
技术介绍
1、目前，分析化学药品组分及杂质的方法多为高效液相色谱法(hplc)。但是，在采用hplc分析发酵产生的家族化合物(如替考拉宁)时，因替考拉宁存在组分及杂质众多，且其在放置期间容易出现各组分相互转化的现象，并且难以获得所有组分及杂质的标准品用于逐个成分的定性及定量，从而会导致检测定性不充分，检测范围存在不足。同时，由于已有的高效液相色谱法的色谱条件与液质联用方法的仪器不兼容，因此，有必要提供一种新的替考拉宁的分析方法，以改善上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于开发了一种替考拉宁组分解析的液质分析方法，以解决现有技术中药典方法与质谱方法色谱条件不兼容，难以进行替考拉宁组分及杂质的分离与鉴定的问题。
2、为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种替考拉宁组分解析的液质分析方法，包括以下步骤：步骤s1，采用一维hplc方法，对待测样品进行分析，确定检出量大于鉴定限0.25％的组分及杂质的峰位及其出峰顺序，并分别进行富集，得到组分富集样、杂质富集样；步骤s2，采用二维lc-hrms方法，在正离子模式下对组分富集样及杂质富集样进行一级全扫描，分别得到各个物质的准分子离子峰并计算其分子式，再对各个准分子离子峰分别进行二级扫描，以得到其对应的主要碎片离子，进而得到各化合物的结构及其ms2裂解途径；其中，一维hplc的流动相包括a1相和b1相，a1相为磷酸盐溶液和乙腈的混
3、进一步地，一维hplc的色谱条件为：检测波长254nm；采用thermo ods-hypersil色谱柱；所用流动相包括a1相和b1相，a1相为磷酸盐溶液和乙腈体积比为90:10的混合溶液，b1相为磷酸盐溶液和乙腈体积比为30:70的混合溶液；二维lc-hrms的色谱条件为：检测波长210nm，254nm；采用agilent zorbax sb-c18色谱柱；所用流动相包括a2相和b2相，a2相为甲酸水溶液，b2相为乙腈。
4、进一步地，磷酸盐溶液通过以下方法制备：取无水磷酸二氢钠3.0g，加水溶解制成1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调节ph至6.0±0.05，再用0.45μm滤膜过滤；甲酸水溶液通过以下方法制备：取1.0ml甲酸至1000ml超纯水中，摇匀，超声。
5、进一步地，hplc采用梯度洗脱程序，其包括顺次进行的第一洗脱过程、第二洗脱过程、第三洗脱过程、第四洗脱过程和第五洗脱过程；第一洗脱过程的处理时间为20～40min，在第一洗脱过程中，a1相的体积用量由100％逐渐减少为50％，b1相的体积用量由0％逐渐增加为50％；第二洗脱过程的处理时间为0.5～1.5min，在第二洗脱过程中，a1相的体积用量由50％逐渐减少为10％，b1相的体积用量由50％逐渐增加为90％；第三洗脱过程的处理时间为3～5min，在第三洗脱过程中，a1相的体积用量为10％，b1相的体积用量为90％；第四洗脱过程的处理时间为0.5～1.5min，在第四洗脱过程中，a1相的体积用量由10％逐渐增加为100％，b1相的体积用量由90％逐渐减少为0％；第五洗脱过程的处理时间为7～11min，在第五洗脱过程中，a1相的体积用量为100％，b1相的体积用量为0％。
6、进一步地，lc-hrms采用梯度洗脱程序，其包括顺次进行的第六洗脱过程、第七洗脱过程、第八洗脱过程和第九洗脱过程；第六洗脱过程的处理时间为2～4min，在第六洗脱过程中，a2相的体积用量由95％逐渐减少为0％，b2相的体积用量由5％逐渐增加为100％；第七洗脱过程的处理时间为2～4min，在第七洗脱过程中，a2相的体积用量为0％，b2相的体积用量为100％；第八洗脱过程的处理时间为0.005～0.015min，在第八洗脱过程中，a2相的体积用量由0％逐渐增加为95％，b2相的体积用量由100％逐渐减少为5％；第九洗脱过程的处理时间为1.5～2.5min，在第九洗脱过程中，a2相的体积用量为95％，b2相的体积用量为5％。
7、进一步地，hplc中，待测样品的进样量为15～25μl。
8、进一步地，lc-hrms中，组分富集样的进样量为0.5～1.0μl，杂质富集样的进样量为24～26μl。
9、进一步地，lc-hrms的柱温为20～30℃，样品盘温度为2～8℃。
10、进一步地，lc-hrms中，离子源的喷雾温度为275～400℃，离子源喷雾电压为负3000～正3500v。
11、进一步地，lc-hrms的质谱条件为：一级质谱分辨率为70000；二级质谱分辨率为35000；鞘气压力为5～75arb；辅助气压力为0～20arb；扫描范围为50～750m/z；100～3500m/z；一级质谱离子累积时间为100ms；二级质谱离子累积时间为50ms；一级质谱离子累积量为1e6；二级质谱离子累积量为1e5。
12、应用本专利技术的技术方案，开发出一种优化的替考拉宁的分离和分析条件，以便使得hplc与lc-hrms兼容，解决了原药典液相方法色谱条件与液质仪器不兼容的问题。本专利技术先将液相色谱技术用于分离样品中的组分及杂质，进一步提高了组分与杂质的分离度，以便进行后续分析；采用液质联用技术对液相色谱分离出的各组分及杂质结构进行鉴定，实现对超过鉴定限的组分及杂质的结构解析。本专利技术的联用方法可以对不同来源的发酵家族化合物替考拉宁样品进行对比分析，明确组分及杂质出峰顺序，实现组分及杂质的分离，并进一步进行结构鉴定，从而评价产品药学基础的一致性。
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1.一种替考拉宁组分解析的液质分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的液质分析方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的液质分析方法，其特征在于，
4.根据权利要求2或3所述的液质分析方法，其特征在于，所述HPLC采用梯度洗脱程序，其包括顺次进行的第一洗脱过程、第二洗脱过程、第三洗脱过程、第四洗脱过程和第五洗脱过程；
5.根据权利要求2至4中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述LC-HRMS采用梯度洗脱程序，其包括顺次进行的第六洗脱过程、第七洗脱过程、第八洗脱过程和第九洗脱过程；
6.根据权利要求1至5中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述HPLC中，所述待测样品的进样量为15～25μL。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述LC-HRMS中，所述组分富集样的进样量为0.5～1.0μL，所述杂质富集样的进样量为24～26μL。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述LC-HRMS的柱温为20～30℃，样品
9.根据权利要求1至8中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述LC-HRMS中，所述离子源的喷雾温度为275～400℃，离子源喷雾电压为负3000～正3500V。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述LC-HRMS的质谱条件为：
...【技术特征摘要】
1.一种替考拉宁组分解析的液质分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的液质分析方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的液质分析方法，其特征在于，
4.根据权利要求2或3所述的液质分析方法，其特征在于，所述hplc采用梯度洗脱程序，其包括顺次进行的第一洗脱过程、第二洗脱过程、第三洗脱过程、第四洗脱过程和第五洗脱过程；
5.根据权利要求2至4中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述lc-hrms采用梯度洗脱程序，其包括顺次进行的第六洗脱过程、第七洗脱过程、第八洗脱过程和第九洗脱过程；
6.根据权利要求1至5中任一项所述的液质分析方法，其特征在于，所述hplc中...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓燕，杜加秋，赵技宇，徐慧娟，易芬芬，邵婷婷，金杨巧，
申请(专利权)人：瀚晖制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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