【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，公开了一种蛋白变体。具体而言，本专利技术公开了一种免疫球蛋白fc变体，该变体与fcrn之间具有减弱的结合能力。
技术介绍
1、igg型抗体通过两个抗原结合片段(fab)识别靶抗原，这两个片段通过铰链区连接到恒定的可结晶片段(fc)，该片段结合fc受体并诱导效应子功能，特异性的抗原结合以及适当的效应子功能使得igg型抗体被成功用于治疗各类疾病。
2、人类有四种igg亚型，其中igg1、2和4拥有较长半衰期，而影响igg型抗体血浆半衰期的关键因素是称为新生儿fc受体(fcrn)的细胞受体。fcrn是一种异二聚体，由与可溶性β2-微球蛋白非共价结合的n-糖基化跨膜mhc i类重链组成。两个fcrn分子可以通过分别结合到fc中对称的ch2-ch3界面的来接合igg，这使得igg免于在溶酶体中被降解：igg可被血管内皮细胞吸收，通过胞饮进入细胞；随后，igg以ph依赖的方式在内含体中(ph6.0-6.5)与fcrn结合，而未与fcrn结合的抗体与溶酶体融合，并被溶酶体内蛋白酶降解；而当igg-fcrn复合物循环到细胞表面时，在偏中性的环境下(ph7.0-7.4)igg从fcrn快速解离，重新进入循环。
3、通过fc工程来调节其与fcrn的结合能力，对igg在体内的半衰期及清除速率有重要的影响。例如，在不影响中性ph条件下与fcrn结合的情况下改善酸性ph条件下与fcrn结合的fc变体，可以获得相比亲本更长的半衰期，一类这样的工程化抗体具有三个fc取代(m252y/s254t/t256e，
4、然而，并非所有的治疗性抗体都期望拥有较强的fcrn结合能力、较长的半衰期和/或较缓慢的清除速率。例如，对于一类针对免疫球蛋白fc段的抗体来说，在通过靶向fc段而与免疫球蛋白形成复合物后，为快速清除被靶向的免疫球蛋白，并不希望这类针对免疫球蛋白fc段的抗体与fcrn产生进一步的结合，因此在这类针对免疫球蛋白fc段的抗体中包含与fcrn结合减弱的fc变体是实践中所期望的。又如，对于局部施用的药物来说，通常期望其在血清中被快速清除，以免因为全身暴露而引起额外的毒副作用。
5、专利公开文献us20210238308、cn110317272a公开了与fcrn结合减弱的fc变体，但未公开具体的突变组合。因此，仍然需要更多工程化的与fcrn结合减弱的fc变体，来满足各类治疗性抗体等药物开发的需要。
技术实现思路
1、本专利技术通过蛋白质工程，筛选得到了与fcrn结合减弱的免疫球蛋白fc变体，其具有氨基酸的突变组合，预期可以在哺乳动物体内具有较短的半衰期和/或较快的清除速率。
2、在第一方面，本公开提供了一种免疫球蛋白fc变体，其包含位于314位、435位以及436位氨基酸的突变；或其包含位于253位、254位、435位以及436位氨基酸的突变，所述氨基酸位置采用kabat的eu索引进行编号。
3、在一些实施方案中，所述免疫球蛋白fc变体衍生自igg，例如所述fc变体衍生自igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白fc变体衍生自人igg。
4、在一些实施方案中，与不包含所述突变的亲本fc相比，所述变体具有下述特征中的至少一个：a)与fcrn的结合能力减弱；b)在哺乳动物体内的血清清除速率增加；c)在哺乳动物体内的血清半衰期缩短；和d)因fc全身暴露而引起的副作用降低。
5、在一些实施方案中，所述位于314位氨基酸的突变为l314a、l314d、l314e、l314f、l314g、l314h、l314i、l314k、l314m、l314n、l314p、l314q、l314r、l314s、l314t、l314v、l314w或l314y；优选为l314a、l314f、l314g、l314h、l314i、l314k、l314m、l314p、l314r、l314s、l314v、l314w或l314y。在一些优选的实施方案中，所述位于314位氨基酸的突变为l314a、l314s、l314g、l314r、l314k、l314w或l314y。在一些更优选的实施方案中，所述位于314位氨基酸的突变为l314a、l314r、或l314w。
6、在一些实施方案中，所述位于253位氨基酸突变为i253a、i253d、i253e、i253f、i253g、i253h、i253k、i253l、i253m、i253n、i253p、i253q、i253r、i253s、i253t、i253v、i253w或i253y。在一些优选的实施方案中，所述位于253位氨基酸的突变为i253a、i253d、i253e、i253g、i253n、i253q或i253s。在一些更优选的实施方案中，所述位于253位氨基酸的突变为i253e或i253d。
7、在一些实施方案中，所述位于254位氨基酸的突变为s254a、s254d、s254e、s254f、s254g、s254h、s254i、s254k、s254l、s254m、s254n、s254p、s254q、s254r、s254t、s254v、s254w或s254y。在一些优选的实施方案中，所述位于254位氨基酸的突变为s254a、s254d、s254e、s254g、s254n或s254q。在一些更优选的实施方案中，所述位于254位氨基酸的突变为s254d或s254e。
8、在一些实施方案中，所述位于435位氨基酸的突变为h435a、h435d、h435e、h435f、h435g、h435i、h435k、h435l、h435m、h435n、h435q、h435s、h435t、h435v、h435w或h435y。在一些优选的实施方案中，所述位于435位氨基酸的突变为h435a、h435f、h435g、h435i、h435l、h435m、h435s、h435v、h435w或h435y。在一些更优选的实施方案中，所述位于435位氨基酸的突变为h435a、h435s、h435g、h435m、h435l、h435y或h435i。在一些优选的实施方案中，所述位于435位氨基酸的突变为h435a或h435m。
9、在一些实施方案中，所述位于436位氨基酸的突变为y436a、y436d、y436e、y436f、y436g、y436h、y436i、y436k、y436l、y436m、y436n、y436q、y436r、y436s、y436t、y436v或y436w。在一些优选的实施方案中，所述位于436位氨基酸的突变为y436s、y436a、y436g、y436d、y436e、y436q或y436n。在一些更优选的实施方案中，所述位于436位氨基酸的突变为y436a、y436d、y436e、或y436q。
10、在一些实施方案中，所述位于314位、435位以及4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.免疫球蛋白Fc变体，其包含位于314位、435位以及436位氨基酸的突变；或其包含位于253位、254位、435位以及436位氨基酸的突变，所述氨基酸位置采用Kabat的EU索引进行编号。
2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白Fc变体，其中所述免疫球蛋白Fc变体衍生自IgG，例如所述Fc变体衍生自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
3.根据权利要求2所述的免疫球蛋白Fc变体，其中所述免疫球蛋白Fc变体衍生自人IgG。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的免疫球蛋白Fc变体，与不包含所述突变的亲本Fc相比，所述免疫球蛋白Fc变体具有下述特征中的至少一个：a)与FcRn的结合能力减弱；b)在哺乳动物体内的血清清除速率增加；c)在哺乳动物体内的血清半衰期缩短；和d)因Fc全身暴露而引起的副作用降低。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫球蛋白Fc变体，所述位于314位氨基酸的突变为L314A、L314D、L314E、L314F、L314G、L314H、L314I、L314K、L314M、L314N、L314P、L314Q、L3
6.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫球蛋白Fc变体，所述位于253位氨基酸突变为I253A、I253D、I253E、I253F、I253G、I253H、I253K、I253L、I253M、I253N、I253P、I253Q、I253R、I253S、I253T、I253V、I253W或I253Y；优选为I253A、I253D、I253E、I253G、I253N、I253Q或I253S；更优选为I253E或I253D。
7.根据权利要求1-4和6中任一项所述的免疫球蛋白Fc变体，所述位于254位氨基酸的突变为S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254I、S254K、S254L、S254M、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W或S254Y；优选为S254A、S254D、S254E、S254G、S254N或S254Q；更优选为S254D或S254E。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的免疫球蛋白Fc变体，所述位于435位氨基酸的突变为H435A、H435D、H435E、H435F、H435G、H435I、H435K、H435L、H435M、H435N、H435Q、H435S、H435T、H435V、H435W或H435Y；优选为H435A、H435F、H435G、H435I、H435L、H435M、H435S、H435V、H435W或H435Y；更优选为H435A、H435S、H435G、H435M、H435L、H435Y或H435I；更优选为H435A或H435M。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的免疫球蛋白Fc变体，所述位于436位氨基酸的突变为Y436A、Y436D、Y436E、Y436F、Y436G、Y436H、Y436I、Y436K、Y436L、Y436M、Y436N、Y436Q、Y436R、Y436S、Y436T、Y436V或Y436W；优选为Y436S、Y436A、Y436G、Y436D、Y436E、Y436Q或Y436N；更优选为Y436A、Y436D、Y436E或Y436Q。
10.根据权利要求1-5和8-9中任一项所述的Fc变体，其中所述位于314位、435位以及436位氨基酸的突变选自由以下组成的组：L314A/H435M/Y436D、L314A/H435M/Y436E、L314W/H435M/Y436D、L314W/H435M/Y436E和L314R/H435M/Y436Q，优选地，所述位于314位、435位以及436位氨基酸的突变选自由以下组成的组：L314A/H435M/Y436D、L314A/H435M/Y436E、L314W/H435M/Y436D和L314W/H435M/Y436E，更优选地，所述位于314位、435位以及436位氨基酸的突变为L314A/H435M/Y436D或L314W/H435M/Y436D。
11.根据权利要求1-4和6-9中任一项所述的Fc变体，其中所述位于253位、2...
【技术特征摘要】
1.免疫球蛋白fc变体，其包含位于314位、435位以及436位氨基酸的突变；或其包含位于253位、254位、435位以及436位氨基酸的突变，所述氨基酸位置采用kabat的eu索引进行编号。
2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白fc变体，其中所述免疫球蛋白fc变体衍生自igg，例如所述fc变体衍生自igg1、igg2、igg3或igg4。
3.根据权利要求2所述的免疫球蛋白fc变体，其中所述免疫球蛋白fc变体衍生自人igg。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，与不包含所述突变的亲本fc相比，所述免疫球蛋白fc变体具有下述特征中的至少一个：a)与fcrn的结合能力减弱；b)在哺乳动物体内的血清清除速率增加；c)在哺乳动物体内的血清半衰期缩短；和d)因fc全身暴露而引起的副作用降低。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，所述位于314位氨基酸的突变为l314a、l314d、l314e、l314f、l314g、l314h、l314i、l314k、l314m、l314n、l314p、l314q、l314r、l314s、l314t、l314v、l314w或l314y；优选为l314a、l314f、l314g、l314h、l314i、l314k、l314m、l314p、l314r、l314s、l314v、l314w或l314y；更优选为l314a、l314s、l314g、l314r、l314k、l314w或l314y；最优选为l314a、l314r、或l314w。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，所述位于253位氨基酸突变为i253a、i253d、i253e、i253f、i253g、i253h、i253k、i253l、i253m、i253n、i253p、i253q、i253r、i253s、i253t、i253v、i253w或i253y；优选为i253a、i253d、i253e、i253g、i253n、i253q或i253s；更优选为i253e或i253d。
7.根据权利要求1-4和6中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，所述位于254位氨基酸的突变为s254a、s254d、s254e、s254f、s254g、s254h、s254i、s254k、s254l、s254m、s254n、s254p、s254q、s254r、s254t、s254v、s254w或s254y；优选为s254a、s254d、s254e、s254g、s254n或s254q；更优选为s254d或s254e。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，所述位于435位氨基酸的突变为h435a、h435d、h435e、h435f、h435g、h435i、h435k、h435l、h435m、h435n、h435q、h435s、h435t、h435v、h435w或h435y；优选为h435a、h435f、h435g、h435i、h435l、h435m、h435s、h435v、h435w或h435y；更优选为h435a、h435s、h435g、h435m、h435l、h435y或h435i；更优选为h435a或h435m。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，所述位于436位氨基酸的突变为y436a、y436d、y436e、y436f、y436g、y436h、y436i、y436k、y436l、y436m、y436n、y436q、y436r、y436s、y436t、y436v或y436w；优选为y436s、y436a、y436g、y436d、y436e、y436q或y436n；更优选为y436a、y436d、y436e或y436q。
10.根据权利要求1-5和8-9中任一项所述的fc变体，其中所述位于314位、435位以及436位氨基酸的突变选自由以下组成的组：l314a/h435m/y436d、l314a/h435m/y436e、l314w/h435m/y436d、l314w/h435m/y436e和l314r/h435m/y436q，优选地，所述位于314位、435位以及436位氨基酸的突变选自由以下组成的组：l314a/h435m/y436d、l314a/h435m/y436e、l314w/h435m/y436d和l314w/h435m/y436e，更优选地，所述位于314位、435位以及436位氨基酸的突变为l314a/h435m/y436d或l314w/h435m/y436d。
11.根据权利要求1-4和6-9中任一项所述的fc变体，其中所述位于253位、254位、435位以及436位氨基酸的突变为i253e/s254d/h435a/y436d、i253e/s254d/h435m/y436q或i253e/s254d/h435a/y436a。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的免疫球蛋白fc变体，与不包含...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐霆，郭康平，王燕，李倩，吴圆丽，
申请(专利权)人：苏州康宁杰瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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