【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物学；更具体地，本专利技术涉及多物种兼性检测试剂在制备检测双属寄生虫的试剂盒中的应用。
技术介绍
1、在原生动物类群中，顶复门(apicomplexa)的孢子(虫)纲(sporozoea)均营寄生生活，已报道能够在人体红细胞内寄生虫并造成宿主发病的常见种类有真球虫目(eucoccidiida)疟原虫科(plasmodiidae)疟原虫属(plasmodium)的恶性疟原虫(p.falciparum)、间日疟原虫(p.vivax)、三日疟原虫(p.malariae)、卵形疟原虫(p.ovale)和诺氏疟原虫(p.knowlesi)，以及梨浆虫目(piroplasmida)巴贝虫科(babesiidae)巴贝虫属(babesia)的田鼠巴贝虫(b.microti)、分歧巴贝虫(b.divergens)、邓肯巴贝虫(b.duncani)、猎户巴贝虫(b.venatorum)等。
2、由疟原虫感染引发的疟疾，是严重危害人类健康的三大疾病之一。近年来每年全球报告疟疾病例多达数亿，绝大多数分布在非洲。国内基本无本土原发感染疟疾病例，但在全球经贸一体化的情况下，疟疾输入病例和死亡病例每年依然都会发生，严重损害人们的生命和健康；若不能及时发现和诊断病例并及时防控，或治疗防控不得当，将有可能出现输入再传播，威胁已有的疟疾防控成果。
3、疟疾诊断的常用检测方法主要有快速诊断试剂盒(rdt)、显微镜检和核酸检测。以往在基层和临床上仅采用rdt和显微镜的检测方法。核酸检测通常只在省或国家疾病预防控制中心(简称疾控
4、目前临床或疾控机构应用的疟疾核酸检测体系或试剂盒往往只包含对恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫的虫种鉴定，大部分没有对诺氏疟原虫的虫种鉴定。诺氏疟原虫虽然是一种通常经按蚊在猴群中传播，但也可感染人。近年来，诺氏疟原虫疫情有上升趋势。2011年起世界卫生组织在其每年发布的世界疟疾报告中将诺氏疟原虫列为第5种能感染人的疟原虫。诺氏疟原虫一个红细胞内发育周期约24小时，短于其它4种人体疟原虫，若不及时诊断和治疗，有发展成重症甚至死亡的风险。因此，有必要研发包含诺氏疟原虫的检测试剂盒。不过，当前报道的诺氏疟原虫虫株不止一种株型，是准确检出该虫的一大挑战。
5、同时，人对巴贝虫普遍易感，巴贝虫的无性繁殖期会破坏人体红细胞，造成患者寒战、发热、出汗、乏力、恶心、食欲减退、肌肉疼痛、关节疼痛、头痛、腹痛、贫血或血红蛋白尿等。重症患者可出现高热(体温可达40℃)、重度贫血、血红蛋白尿、呈酱油色尿、黄疸、呼吸窘迫、肾功能衰竭或昏迷，甚至死亡。近年来，居民感染巴贝虫属病原体的报告有上升趋势，主要种类包括田鼠巴贝虫、猎户巴贝虫和分歧巴贝虫。
6、与疟原虫一样，巴贝虫在人体内也主要寄生于人体的红细胞，其形态特征与常见的疟原虫环状体接近，显微镜检查不易区分。同时，感染人体的疟原虫也存在镜检阳性，rdt阴性的虫株。在这种情况下，应用核酸方法相对可以更为精确。2017年发布了巴贝虫核酸检测的标准方法(测序法)，测试范围理论上可以包含所有感染人体的巴贝虫。但该体系与检测疟原虫时应用的qpcr方法不属于同一体系，在应用时不是很方便。
7、尽管一次性实现多物种的检测对于临床而言意义重大，然而鉴于不同种属寄生虫的基因组的复杂性、其它物种基因组同源区域的干扰性，以及检测实验体系的不确定性，找到精简的、灵敏度理想的检测试剂并非易事。例如，本专利技术人在先研究中建立了基于疟原虫无性期18s rdna检测感染人的5种疟原虫的qpcr，并评价其检测效果，但是需要各异的引物对，不适宜应用于同时检测多个虫种，且无法实现利用同一套组其特征的检测试剂对疟原虫以外的其它物种的特异性检测。
8、综上，本领域有需要同时检测多种属的微生物，以在一次的样本中尽可能多地了解个体寄生虫存在情况。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供多物种兼性检测试剂在制备检测双属寄生虫的试剂盒中的应用。
2、在本专利技术的第一方面，提供一种多物种兼性检测试剂在制备检测寄生虫的试剂盒中的应用；其中，所述多物种兼性检测试剂包括：通用引物：seq id no:1～3；探针：seq idno:4～seq id no:11。其中，所述寄生虫包括：疟原虫属寄生虫和巴贝虫属寄生虫。
3、在一种或多种实施方式中，所述多物种兼性检测试剂形成双体系，包括探针法qpcr反应体系和染料法qpcr反应体系。
4、在一种或多种实施方式中，所述探针法qpcr反应体系中包括：通用引物seq idno:1～3和探针seq id no:4～seq id no:11。
5、在一种或多种实施方式中，所述染料法qpcr反应体系中包括：通用引物seq idno:1～2。
6、在一种或多种实施方式中，所述疟原虫属寄生虫包括：恶性疟原虫(p.falciparum)，诺氏疟原虫(p.knowlesi)，三日疟原虫(p.malariae)，卵形疟原虫(p.ovale)，间日疟原虫(p.vivax)，食蟹猴疟原虫(p.cynomolgi)，吼猴疟原虫(p.simium)，巴西疟原虫(p.brasilianum)；较佳地，所述卵形疟原虫包括：卵形疟原虫curtisi亚种或卵形疟原虫wallikeri亚种；较佳地，所述三日原虫包括：三日疟原虫虫株1或三日疟原虫虫株2；较佳地，所述诺氏疟原虫包括：诺氏疟原虫虫株1或诺氏疟原虫虫株2。
7、在一种或多种实施方式中，所述巴贝虫属寄生虫包括：可拉萨巴贝虫(b.crassa)；类可拉萨巴贝虫(b.crassa-like)；分歧巴贝虫(b.divergens)；邓肯巴贝虫(b.duncani)；吉布森巴贝虫(b.gibsoni)；田鼠巴贝虫(b.microti)；奥氏巴贝虫(b.odocoilei)；巴贝虫b.sp；猎户巴贝虫(b.venatorum)；韦氏巴贝虫(b.vogeli)。
8、在一种或多种实施方式中，针对疟原虫的18s rdna序列实施检测。
9、在一种或多种实施方式中，所述恶性疟原虫基因序列包括：恶性疟原虫a型18srdna序列或恶性疟原虫s型18s rdna序列。
10、在一种或多种实施方式中，所述间日疟原虫基因序列包括：间日疟原虫a型18srdna序列或间日疟原虫s型18s rdna序列。
11、在一种或多种实施方式中，所述三日疟疟原虫基因序列包括：三日疟原虫虫株1的a型18s rdna序列或三日疟原虫虫株2的a型18s rdna序列。
12、在一种或多种实施方式中，所述疟氏疟原虫基因序列包括：诺氏疟原虫虫株1的a或s型18s rdna序列或诺氏疟原虫虫株2的a型18s rdna序列。
13、在一种或多种实施方本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.多物种兼性检测试剂在制备检测寄生虫的试剂盒中的应用；
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多物种兼性检测试剂形成双体系，包括探针法qPCR反应体系和染料法qPCR反应体系；
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述疟原虫属寄生虫包括：恶性疟原虫(P.falciparum)，诺氏疟原虫(P.knowlesi)，三日疟原虫(P.malariae)，卵形疟原虫(P.ovale)，间日疟原虫(P.vivax)，食蟹猴疟原虫(P.cynomolgi)，吼猴疟原虫(P.simium)，巴西疟原虫(P.brasilianum)；较佳地，所述卵形疟原虫包括：卵形疟原虫Curtisi亚种或卵形疟原虫Wallikeri亚种；较佳地，所述三日原虫包括：三日疟原虫虫株1或三日疟原虫虫株2；较佳地，所述诺氏疟原虫包括：诺氏疟原虫虫株1或诺氏疟原虫虫株2；
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述探针法qPCR反应体系检出恶性疟原虫、间日疟原虫和卵形疟原虫；
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂对于人的DNA为高度非特异性。
6.一种检测寄生虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：容器或包装，以及装于所述容器或包装的多物种兼性检测试剂；其中，所述多物种兼性检测试剂包括：
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述多物种兼性检测试剂形成双套组，包括探针法反应套组和染料法反应套组；
8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的端部携带有荧光基团以及相应的猝灭基团；较佳地，所述荧光基团/猝灭基团包括：HEX/BHQ1，CY5.5/BHQ3，CY5/BHQ3，FAM/BHQ1，Texas RED/BHQ2；或
9.一种特异性检测寄生虫的方法，所述寄生虫包括疟原虫属寄生虫和巴贝虫属寄生虫；所述方法包括利用多物种兼性检测试剂进行检测，所述多物种兼性检测试剂包括：通用引物SEQ ID NO:1～3，探针SEQ ID NO:4～SEQ ID NO:11；
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述检测体系包括探针法qPCR反应体系和染料法qPCR反应体系；其中，以所述检测体系检测(a)进行恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟疟原虫、诺氏疟原虫、巴西疟原虫、可拉萨巴贝虫、邓肯巴贝虫、田鼠巴贝虫或巴贝虫B.sp的属和种水平上的检测，(b)进行吼猴疟原虫、食蟹猴疟原虫、分歧巴贝虫、奥氏巴贝虫、猎户巴贝虫、可拉萨巴贝虫、吉布森巴贝虫或韦氏巴贝虫的属水平上的检测；较佳地，(b)中属水平上检测后，还可通过测序对虫种进行细分鉴定。
...【技术特征摘要】
1.多物种兼性检测试剂在制备检测寄生虫的试剂盒中的应用；
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多物种兼性检测试剂形成双体系，包括探针法qpcr反应体系和染料法qpcr反应体系；
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述疟原虫属寄生虫包括：恶性疟原虫(p.falciparum)，诺氏疟原虫(p.knowlesi)，三日疟原虫(p.malariae)，卵形疟原虫(p.ovale)，间日疟原虫(p.vivax)，食蟹猴疟原虫(p.cynomolgi)，吼猴疟原虫(p.simium)，巴西疟原虫(p.brasilianum)；较佳地，所述卵形疟原虫包括：卵形疟原虫curtisi亚种或卵形疟原虫wallikeri亚种；较佳地，所述三日原虫包括：三日疟原虫虫株1或三日疟原虫虫株2；较佳地，所述诺氏疟原虫包括：诺氏疟原虫虫株1或诺氏疟原虫虫株2；
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述探针法qpcr反应体系检出恶性疟原虫、间日疟原虫和卵形疟原虫；
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂对于人的dna为高度非特异性。
6.一种检测寄生虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：容器或包装，以及装于所述容器或包装的多物种兼性检测试剂；其中，所述多物种兼...
【专利技术属性】
技术研发人员：李美，夏志贵，周何军，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：
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