【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种针对免疫检查点蛋白pd-l1和cd47的双特异性人源化单域抗体及其用途。
技术介绍
1、近年来，随着通过人体免疫系统新研发出的免疫抗癌疗法的疗效得到证实，现有利用化疗和靶向治疗剂的抗癌疗法正在向利用免疫治疗剂的免疫抗癌疗法转变。
2、基本上，癌症患者的免疫细胞对癌症抗原产生耐受性，虽能够识别癌细胞，但其功能受到抑制，无法有效去除癌细胞。免疫治疗的核心是通过唤醒耐受性免疫细胞来诱导为活化免疫细胞，由此消灭癌细胞。这种免疫疗法包括ifn-γ、il-2等细胞因子治疗剂、利用树突状细胞的癌症疫苗、利用t细胞的细胞治疗剂、以及阻断免疫检查点蛋白的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor，ici)等，这种治疗剂通常被称为肿瘤免疫疗法(immuno-oncology therapy)。其中，跨国性制药公司竞相研发的免疫抗癌剂是免疫检查点抑制剂。
3、免疫检查点蛋白是细胞膜蛋白，其抑制免疫细胞的分化、增殖、以及活性。具体而言，这种蛋白通常在活化的t细胞中表达，其降低t细胞增殖、细胞因子分泌、细胞毒性，并具有抑制t细胞的过度活性的功能，因此也被称为共抑制(co-inhibitory)分子。通常，t细胞中存在表达的共抑制受体ctla-4和pd-1，因此通过与作为每个配体的b7.1/2和pd-l1结合来调节t细胞的活性。同时，pd-l1在癌细胞中表达，其灭活癌症特异性t细胞并诱导细胞凋亡，由此保护癌细胞免受t细胞的免疫攻击，从而作为癌症的免疫逃逸机制。此外，报告指出，与癌细胞中
4、免疫检查点抑制剂是通过阻断免疫检查点蛋白(其参与这种t细胞的抑制)的活性激活t细胞来攻击癌细胞的药物，通常使用识别ctla-4、pd-1和pd-l1的抗体。ipilimumab(yervoy)是一种ctla-4抑制剂，在免疫检查点抑制剂中其是第一个于2011年获得美国fda批准的转移性黑色素瘤二线治疗剂。之后的2014年，pd-1阻断剂nivolumab(opdivo)和pembrolizumab(keytruda)分别获得对转移性黑色素瘤的美国fda批准。随后，作为针对pd-l1的免疫检查点抑制剂的atezolizumab(tecentriq)获得对膀胱癌的美国fda批准(2016)，2017年avelumab(bavencio)和durvalumab(imfinzi)分别获得对梅克尔细胞癌(一种皮肤癌)治疗和膀胱癌的美国fda批准。2018年，pd-1抑制剂cemiplimab(libtayo)获得对鳞状细胞癌的美国fda批准。目前，这些药物正在扩大治疗适应症，并获得对更多癌症治疗的美国fda批准。截至2019年，6种pd-1/pd-l1抑制剂获得对共18种癌症的fda批准。此外，b7-h4、icos、hvem、pdl-2、pvrig等免疫调节蛋白等作为新靶点处于临床前试验当中。这些治疗剂大多数靶向t细胞上表达的靶点。
5、为了克服这种以t细胞为中心的偏斜的靶标研究趋势，近年来正研发靶向免疫检查点蛋白(其在巨噬细胞、树突状细胞等骨髓类细胞中表达)的抑制剂。其中，csf1r、cd47和tlr7等正成为重要的靶点。
6、免疫检查点蛋白通过抑制t细胞的活性使肿瘤细胞逃避免疫系统的攻击，程序性死亡配体1(pd-l1，programmed death-ligand 1)作为一种免疫检查点蛋白，主要在淋巴系统和非淋巴组织的白细胞和非造血细胞中表达，并且也在结肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、宫颈癌等各种肿瘤细胞表面表达。特别地，其与在活化的t细胞表面表达的程序性死亡-1(pd-1，programmed death-1)相互作用，由此引起tcr介导的t细胞活化(tcr mediated t-cellactivation)并抑制t细胞增殖(t-cell proliferation)，从而负向调节t细胞的免疫反应。
7、1980年首次在人类卵巢癌中被鉴定为肿瘤抗原的分化簇47(cluster ofdifferentiation 47，cd47)在诸如非霍奇金淋巴瘤(nhl)、多发性骨髓瘤(mm)、急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞性白血病(aml)、慢性粒细胞白血病、膀胱癌以及实体癌等多种人类瘤细胞中表达。
8、cd47在细胞表面表达，并与sirpα、血小板反应蛋白(tsp1)以及和整联蛋白相互作用，由此参与细胞的死亡、增殖和免疫反应。特别地，在肿瘤细胞中表达的cd47与在巨噬细胞表面表达的sirpα相互作用，发出“别吃我”的信号，不仅逃避巨噬细胞的吞噬作用，还抑制肿瘤环境中的血管增殖和效应t细胞的作用，从而促进肿瘤细胞的增殖和生长。
9、跨国制药公司吉利德的magrolimab作为靶向cd47的抗体治疗剂而处于临床试验阶段，并且近年来跨国制药公司正在积极研发基于cd47抗体治疗剂的双抗体。
10、另一方面，非人类来源的抗体通常具有免疫原性，因此限制其有效性，并且在部分情况下可能引起危险的过敏反应。对于这种外来抗体的免疫反应促进其从体内清除，并抑制其与靶标抗原结合的能力，从而实质性降低抗体的效果。为了克服这种问题，可以通过人源化非人抗体来降低其对人的免疫原性，同时保持亲本非人抗体的特异性和亲和力。
11、对此，本专利技术人研发出一种人源化抗体作为靶向免疫检查点蛋白pd-l1和cd47的免疫检查点抑制剂，由此提出本申请。
12、[现有技术文献]
13、[专利文献]
14、美国专利公开第2020-0181259号
15、国际公开专利第2011-143624号
16、美国专利第8,008,449号
17、[非专利文献]
18、pol specenier(2016):ipilimumab in melanoma,expert review ofanticancer therapy.
19、db johnson,c peng et al.nivolumab in melanoma:latest evidence andclinical potential.ther adv med oncol 2015,vol.7(2)97-106
20、liu j,wang l,zhao f,tseng s,narayanan c,shura l,et al.(2015)pre-clinical development of a humanized anti-cd47 antibody with anti-cancertherapeutic potential.plos one 10(9):e0137345.
21、c vincke et al.general strategy to humanize a camelid single-domainantibody and identific本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其包括：
2.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
3.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
4.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
5.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
6.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
7.根据权利要求6所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
8.根据权利要求7所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
9.根据权利要求6所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
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11.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特
12.根据权利要求7所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
13.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
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15.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
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20.根据权利要求15所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其包括，
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22.根据权利要求21所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
23.根据权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
24.一种抗体缀合物，其包括：
25.一种核酸分子，其编码权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体。
26.一种表达载体，其包括：权利要求25所述的核酸分子。
27.一种宿主细胞，其由权利要求26所述的表达载体转化。
28.一种与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体的生产方法，其包括：
29.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其含有权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体或权利要求24所述的抗体缀合物作为有效成分。
30.根据权利要求29所述的药物组合物，其中，
31.根据权利要求29所述的药物组合物，其进一步包括：药学上可接受的载体。
32.一种预防或治疗癌症的方法，其包括：
33.一种权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体或权利要求24所述的抗体缀合物在用作预防或治疗癌症的药物组合物中的用途。
34.一种权利要求1所述的与PD-L1和CD47双特异性结合的双特异性抗体或权利要求24所述的抗体缀合物用于制备预防或治疗癌症的药物组合物中的用途。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其包括：
2.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
3.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
4.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
5.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
6.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
7.根据权利要求6所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
8.根据权利要求7所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
9.根据权利要求6所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
10.根据权利要求9所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
11.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
12.根据权利要求7所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
13.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
14.根据权利要求13所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
15.根据权利要求1所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
16.根据权利要求15所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
17.根据权利要求15所述的与pd-l1和cd47双特异性结合的双特异性抗体，其中，
18.根据权利要求15...
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