本发明专利技术涉及体外检测技术领域，特别涉及牛奶过敏原特异性IgE定量检测试剂盒及其应用。所述试剂盒采用链霉亲和素‑生物素体系，增加生物素化‑牛奶过敏原提取物的载量；在制备时对牛奶过敏原提取物进行生物素标记，通过在生物素化‑牛奶过敏原提取物溶液中添加IgG抗体，并使用HSA作为保护蛋白，可以提高检测灵敏度及特异性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外检测，特别涉及牛奶过敏原特异性ige定量检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、牛奶被认为是全球引起婴幼儿过敏的常见食物，各地发病率从1%到7.5%不等。目前市场上牛奶过敏原特异性ige抗体检测的试剂盒，主要有免疫印迹、胶体金、酶联免疫分析法、磁微粒化学发光法和荧光免疫分析法。牛奶过敏原特异性ige抗体检测试剂盒均有各自方法的优缺点，需要进一步优化。
2、磁微粒化学发光间接法建立的人血清中过敏原特异性ige抗体的检测方法具有自动化检测，快速、灵敏，检测通量大的优点。但是，采用磁微粒化学发光间接法建立的人血清中过敏原特异性ige抗体的检测方法并不完全适合用于牛奶过敏原特异性ige抗体检测。目前磁微粒化学发光间接法中常用保护蛋白是牛血清白蛋白bsa，作为牛奶过敏原之一，游离的保护蛋白牛血清白蛋白会特异性结合抗牛血清白蛋白ige，降低检测灵敏度。由于人血清中存在非特异性结合igg的嗜异性抗体的干扰，会导致检测结果出现假阳性，且人血清样本中ige抗体含量较低，在检测样本添加阻断剂会使样本被稀释，导致检测结果降低，影响了检测结果的准确性。因此，对于牛奶过敏原特异性ige抗体磁微粒化学发光检测方法中存在检测结果不准确的问题，目前没有较好的解决方案。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了牛奶过敏原特异性ige定量检测试剂盒及其应用，该试剂盒在制备时，在生物素化-牛奶过敏原提取物溶液中添加igg抗体，并使用hsa作为保护蛋白，可以提高检测灵敏度及特异性。
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p>2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：3、本专利技术提供了以下一项或两项在制备检测牛奶过敏原特异性ige抗体的试剂盒中的应用：
4、（i）、作为保护蛋白的hsa；
5、（ii）、作为阻断剂的igg。
6、本专利技术还提供了检测牛奶过敏原特异性ige抗体的试剂盒，其保护蛋白为hsa。
7、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒包括阻断剂，所述阻断剂为igg。
8、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述igg包括鼠igg、牛igg和/或兔igg。
9、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒包括生物素化-牛奶过敏原提取物溶液；
10、所述生物素化-牛奶过敏原提取物溶液包括所述hsa和/或所述阻断剂。
11、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述生物素化-牛奶过敏原提取物溶液由生物素化-牛奶过敏原提取物与缓冲液1组成；
12、所述缓冲液1为ph 7~9的含有5 mg/ml~30 mg/ml hsa、0.01%~1% proclin 300、0.01%~0.05% tween-20、50 mg/ml~100 mg/ml海藻糖和0.1 mg/ml~10 mg/ml所述阻断剂的0.1 m磷酸盐缓冲液。
13、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述生物素化-牛奶过敏原提取物溶液的制备方法包括以下步骤：
14、步骤（1）：将二甲基亚砜和生物素以1~10 mg/ml混合，优选以2~6 mg/ml混合，获得溶解好的生物素；
15、步骤（2）：将所述溶解好的生物素与牛奶过敏原提取物进行反应，摩尔比为1:110~1:250；优选的标记比例为1:150；反应时间为0.5~4 h，优选为1~3 h；反应后在磷酸盐缓冲液中4℃透析48小时，得到生物素化-牛奶过敏原提取物；
16、步骤（3）：将所述生物素化-牛奶过敏原提取物用含0.5%~3% hsa、0.01%~1%proclin 300、0.01%~0.05% tween-20、5%~10%海藻糖、0.01%~1%的igg阻断剂的0.1 m磷酸盐缓冲液（ph 7~9）配制成生物素化-牛奶过敏原提取物溶液。
17、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述生物素化-牛奶过敏原提取物溶液的浓度为2~8 μg/ml，优选的浓度为4.5 μg/ml。
18、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括链霉亲和素修饰的磁微粒悬液和抗人ige酶标抗体溶液。
19、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述抗人ige酶标抗体溶液由抗人ige酶标抗体和缓冲液2组成；
20、所述缓冲液2为ph 7~9的含有20 mg/ml~50 mg/ml casein、0.5%~1% proclin300、0.01%~0.05% tween-20和50 mg/ml~100 mg/ml海藻糖的0.1 m磷酸盐缓冲液。
21、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述抗人ige酶标抗体溶液中抗人ige酶标抗体的浓度为0.3~1.5 mg/ml；优选的浓度为1 mg/ml。
22、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述链霉亲和素修饰的磁微粒悬液中磁微粒的含量为1.3~2.5 mg/ml。
23、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒所述抗人ige酶标抗体为标记了辣根过氧化物酶的抗人ige抗体。
24、本专利技术还提供了牛奶过敏原特异性ige抗体检测方法，基于上述试剂盒检测。
25、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述牛奶过敏原特异性ige抗体检测方法包括以下步骤：
26、步骤（a）：将待测样品与链霉亲和素包被的磁微粒悬液和生物素标记的牛奶过敏原提取物溶液混合，孵育，磁分离去上清；
27、步骤（b）：与抗人ige酶标抗体溶液混合，孵育，磁分离去上清；
28、步骤（c）：底物溶液混合，测定化学发光强度；
29、步骤（d）：根据标准曲线，计算得到所述待测样本中ige的浓度。
30、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述牛奶过敏原特异性ige抗体检测方法中步骤（a）和步骤（b）所述孵育的温度为15~40℃，优选为37℃。
31、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述牛奶过敏原特异性ige抗体检测方法中步骤（a）和步骤（b）所述孵育的时间为5~40 min，优选为15 min。
32、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述牛奶过敏原特异性ige抗体检测方法所述抗人ige酶标抗体为标记了辣根过氧化物酶的抗人ige抗体。
33、本专利技术的牛奶过敏原特异性ige定量检测试剂盒及其应用有如下效果：
34、1）本专利技术的试剂盒通过在生物素化-牛奶过敏原提取物溶液中添加igg抗体，并使用hsa作为保护蛋白，可以提高检测灵敏度及特异性。
35、2）本专利技术的试剂盒适配于全自动磁微粒化学发光仪，具有检测全自动化、反应时间短、检测灵敏，通量大的优点。
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【技术保护点】
1.以下一项或两项在制备检测牛奶过敏原特异性IgE抗体的试剂盒中的应用：
2.检测牛奶过敏原特异性IgE抗体的试剂盒，其特征在于，保护蛋白为HSA。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包括阻断剂，所述阻断剂为IgG。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述IgG包括鼠IgG、牛IgG和/或兔IgG。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，包括生物素化-牛奶过敏原提取物溶液；
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素化-牛奶过敏原提取物溶液由生物素化-牛奶过敏原提取物与缓冲液1组成；
7.如权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，还包括链霉亲和素修饰的磁微粒悬液和抗人IgE酶标抗体溶液。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人IgE酶标抗体溶液由抗人IgE酶标抗体和缓冲液2组成；
9.如权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素修饰的磁微粒悬液中磁微粒的含量为1.3~2.5 mg/mL。
10.非诊断目的的牛奶过敏原特异性IgE抗体检测方法，其特征在于，基于如权利要求2至9任一项所述的试剂盒检测。
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【技术特征摘要】
1.以下一项或两项在制备检测牛奶过敏原特异性ige抗体的试剂盒中的应用：
2.检测牛奶过敏原特异性ige抗体的试剂盒，其特征在于，保护蛋白为hsa。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包括阻断剂，所述阻断剂为igg。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述igg包括鼠igg、牛igg和/或兔igg。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，包括生物素化-牛奶过敏原提取物溶液；
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素化-牛奶过敏原提取物溶液由...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱宇皇，申王尚，常富江，韩晶，李忠信，刘功成，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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